靶向CD19抗原的CAR-NK-92MI和CAR-CD19-T细胞对套细胞淋巴瘤的体外杀伤

目的:探讨靶向CD19抗原的CAR-NK-92MI和CAR-CD19-T细胞对套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)的体外杀伤作用。方法:利用近年来在B细胞急性淋巴细胞白血病(B-lineage acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)临床试验中获得的成功嵌合抗原受体基因修饰的T(CAR-T细胞)技术,针对MCL高表达CD19抗原的情况,分别构建了靶向CD19抗原的CAR-CD19-T和CAR-NK-92MI细胞,运用LDH释放法检测两者对MCL细胞的体外杀伤作用,另外通过流式细胞术对其杀伤作用进行了验证。结果:相对于对照,无论是CAR-NK-92MI细胞还是CAR-CD19-T细胞,都对MCL细胞具有极高的杀伤能力(均P<0.01),都对K562-CD19细胞具有非常高的毒性(均P<0.01),而对K562细胞基本不起作用。CAR-NK-92MI细胞组MCL细胞的死亡率比对照组高30%~40%,CAR-CD19-T细胞组MCL细胞的死亡率比对照组高40%~50%。结论:CAR-NK-92MI和CARCD19-T细胞在体外对MCL细胞具有强的特异性杀伤作用。

去甲基化处理对NK-92MI细胞系抑制性受体KIR表达的影响

为分析NK细胞系NK-92MI细胞中抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immnoglobulin-like re-ceptor,KIR)的基因启动子区的甲基化模式及去甲基化处理对基因表达的影响,探讨基因kir可能的表达调控机制,采用亚硫酸氢盐测序法检测NK-92MI细胞kir2DL1和kir2DL2/2DL3基因启动子区的甲基化水平,应用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞以诱导CpG岛去甲基化,RT-PCR方法检测其基因表达。结果显示:kir2DL1和kir2DL2/2DL3基因启动子区CpG二核苷酸甲基化频率依次在25%-88%、5%-80%之间;应用甲基化抑制剂5-氮胞苷可以诱导NK-92MI细胞重新表达kir2DL1基因,并使kir2DL1、kir2DL2和kir2DL3基因表达量增加。结论:启动子甲基化参与调控NK-92MI细胞基因kir表达。

紫杉醇对NK-92MI细胞杀伤功能及凋亡的影响

探讨紫杉醇对人自然杀伤细胞系NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响。用不同浓度的紫杉醇处理NK.92MI细胞后,测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;同时检测NK·92MI细胞凋亡率及凋亡相关基因Bcl-2、Ba】【的表达。结果表明,紫杉醇可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK.92MI细胞的凋亡,而后者与Bcll2/Ba】【基因表达增高有关。

Hp阳性慢性萎缩性胃炎患者miR-92a-1-5p和FOXD1表达特征及其与预后的相关性

目的 探讨幽门螺杆菌(Hp)阳性慢性萎缩性胃炎(CAG)患者胃粘膜组织中微小RNA-92a-1-5p(mi R-92a-1-5p)和人转录因子叉头框1(FOXD1)表达特征及其与预后的相关性。方法 选取2017年1月至2021年10月四川省妇幼保健院收治的Hp阳性CAG患者124例作为研究对象,所有患者均在接受胃镜检查时取萎缩胃粘膜活检组织与周边正常形态粘膜活检组织,置于液氮内储存待检,测定mi R-92a-1-5p、FOXD1相对表达水平,并根据患者病情及病理评估结果给予针对性治疗。比较研究对象病变粘膜组织与正常粘膜组织mi R-92a-1-5p、FOXD1表达水平和不同病情程度患者粘膜组织mi R-92a-1-5p、FOXD1表达水平,并比较不同预后Hp阳性CAG患者mi R-92a-1-5p、FOXD1表达水平。统计分析mi R-92a-1-5p、FOXD1表达水平与疾病病情程度、Hp阳性CAG预后的相关性。结果(1)病变粘膜组织mi R-92a-1-5p、FOXD1mRNA及蛋白表达水平高于正常粘膜组织(P<0.05)。(2)不同病情程度的Hp阳性CAG患者粘膜组织mi R-92a-1-5p、FOXD1mRNA及蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05),且随着病情程度的增加,Hp阳性CAG患者粘膜组织mi R-92a-1-5p、FOXD1mRNA及蛋白表达水平呈持续增高趋势(P<0.05)。(3)预后不良患者mi R-92a-1-5p、FOXD1mRNA及蛋白表达水平高于预后良好患者(P<0.05)。(4)经Pearson检验可知,mi R-92a-1-5p、FOXD1mRNA及蛋白表达水平与Hp阳性CAG病情程度呈正相关(P<0.05),mi R-92a-1-5p、FOXD1mRNA及蛋白表达水平与Hp阳性CAG预后呈负相关(P<0.05)。结论 Hp阳性CAG患者胃粘膜组织中mi R-92a-1-5p、FOXD1表达较正常水平异常增高,且其增高幅度在不同病情程度患者中具有明显差异,其表达水平与疾病病情、预后均具有密切相关性,可评估病情、预测预后。

去甲基化处理对NK-92MI细胞杀伤活力的影响

为观察DNA去甲基化处理对NK细胞系NK-92MI细胞抑制性KIR表达及细胞杀伤活力的影响,探讨抑制性kir基因去甲基化与NK细胞功能之间的可能联系,采用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理NK-92MI细胞,采用流式细胞术检测NK-92MI细胞表面KIR3DL1、KIR2DL2/KIR2DL3、KIR2DL1表达及细胞活力,并采用流式细胞仪将NK-92MI细胞分选为KIR3DL1阳性和KIR3DL1阴性细胞群,采用乳酸脱氢酶释放法检测NK-92MI细胞对白血病细胞系K562的杀伤活力。结果显示:应用终浓度为1.0、2.5和5μmol/L的5-氮胞苷作用72小时可以诱导NK-92MI细胞KIR3DL1、KIR2DL2/KIR2DL3、KIR2DL1表达增加,同时NK-92MI对K562细胞的杀伤活力降低,5-氮胞苷在1-5μmol/L范围内不影响NK-92MI的细胞活力,KIR3DL1阳性NK-92MI细胞的杀伤活力较KIR3DL1阴性细胞的杀伤活力低。结论:去甲基化处理通过诱导抑制性KIR表达增加抑制NK-92MI细胞的杀伤活力。

低浓度紫杉醇对NK-92MI细胞增殖及细胞毒效应的影响

目的 探讨低浓度肿瘤化疗药物紫杉醇对人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞（NK-92MI）细胞系生长及细胞毒效应的影响.方法 体外培养NK-92MI,加入不同浓度（1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03、0.015、0.008、0.004μmol/L）的紫杉醇培养72h,MTS法检测NK-92MI细胞的增殖;以低浓度（0.02μmol/L）的紫杉醇预培养NK-92MI细胞48h,杀伤试剂盒检测NK-92MI 细胞对K-562细胞的细胞毒效应,流式细胞术检测NK-92MI细胞表面NKG2D受体的表达,RT-PCR检测NK-92MI受体NKG2D、NKG2A/B以及效应分子颗粒酶、穿孔素及IFN-γ基因的表达,ELISA检测IFN-γ分泌的改变.结果 高浓度（0.06～1μmol/L）紫杉醇明显抑制细胞的生长（P＜0.05）,且呈浓度梯度依赖性;低浓度（0.008～0.06μmol/L）紫杉醇能相对促进NK-92MI细胞的增殖,但无统计学意义（P＞0.05）,当低于0.008μmol/L时,对NK-92MI细胞的增殖不影响（P＞0.05）.0.02μmol/L紫杉醇能增强NK-92MI细胞的细胞毒活性,在效靶比为10∶1、5∶1、2.5∶1、1.25∶1时,实验组细胞毒效应均明显高于对照组（P＜0.05或0.01）.紫杉醇处理组NK-92MI细胞高表达穿孔素、颗粒酶及IFN-γ（均P＜0.05）,而抑制性受体NKG2A/B基因表达下调（P＜0.05）,未发现表面杀伤性受体NKG2D基因和蛋白的表达上调（P ＞0.05）.结论 低浓度紫杉醇能促进NK-92MI细胞的增殖和细胞毒活性,细胞毒活性的增强可能与紫杉醇处理后NK-92MI细胞活化能力增强以及相关基因（穿孔素和颗粒酶）的表达增强有关.

冠心病PCI手术前后外周血miR-92a表达水平变化研究

接诊的38例冠心病PCI手术患者,将其设为观察组;另选取同期接纳的38例健康体检者作为对照组。观察对照组、观察组PCI手术前/PCI手术后外周血mi R-92a表达水平,对比PCI术前术后外周血mi R-92a表达水平与正常人群的差异。结果观察组术前外周血mi R-92a表达水平(0.99±0.32)明显高于对照组(0.62±0.03),组间差异有差异有统计学意义(P<0.05);但观察组PCI术后外周血mi R-92a表达水平与对照组对比无显著差异(P>0.05)。冠心病PCI手术前后外周血mi R-92a表达水平变化差异显著,患者经手术治疗外周血mi R-92a表达水平可趋近正常值,临床务必给予高度重视。

地塞米松诱导NK-92MI细胞株凋亡机制的研究

目的:探讨地塞米松(DEX)对NK-92MI细胞株杀伤活性及凋亡的影响及机制。方法:用不同浓度的DEX处理NK-92MI细胞:采用MTT比色法测定NK-92MI细胞的增殖率和对靶细胞的杀伤作用;流式细胞术检测NK-92MI细胞凋亡率;RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。结果:浓度为1×10-8mol/L至1×10-3mol/L的DEX作用NK-92MI细胞24、48、72小时后,对其增殖均有明显抑制作用(P<0.05);效靶比为5∶1时,1×10-8mol/L至1×10-3mol/L的DEX对NK-92MI细胞杀伤活性均有抑制作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);DEX可诱导NK-92MI细胞发生凋亡且凋亡诱导作用呈浓度时间依赖性;与对照组相比,DEX组Bcl-2基因表达降低(P<0.05),Bax基因表达增高(P<0.01)。结论:DEX可以抑制NK-92MI细胞增殖并且降低其杀伤活性,机制可能是通过诱导NK-92MI细胞凋亡,而后者与Bax/Bcl-2基因表达增高有关。

RhIL-21对NK-92MI细胞生物学活性的影响

目的探讨rhIL-21对NK-92MI细胞免疫功能的影响。方法以不同浓度(25～100ng/ml)的rhIL-21培养NK-92MI细胞24～72h,观察NK-92MI细胞的增殖。以50ng/ml的rhIL-21处理NK-92MI不同时间后,FACS检测NK-92MI细胞的凋亡,NK-92MI细胞表面NKG2D受体及胞内颗粒酶-B蛋白的表达;细胞杀伤试剂盒检测NK-92MI细胞对靶细胞K-562的细胞毒效应;RT-PCR检测NK-92MI受体NKG2D,效应分子颗粒酶-B、穿孔素及细胞因子IFN-γ基因mRNA的表达;ELISA检测其分泌IFN-γ的水平。结果 RhIL-21虽能抑制NK-92 MI细胞的增殖(P<0.05),但不会促进细胞的凋亡(P<0.05)。RhIL-21能促进NK-92MI细胞穿孔素、IFN-γ、颗粒酶-B、NKG2D受体基因及相应蛋白质的表达上调(P<0.05)。rhIL-21预处理组NK-92MI对K-562细胞的细胞毒效应也明显增强(P<0.05)。结论 RhIL-21能增强NK-92 MI细胞的细胞毒效应,IL-21在肿瘤的免疫治疗中有潜在临床应用价值。

冬凌草甲素对NK-92 MI杀伤THP1细胞的活性影响及机制

目的:观察冬凌草甲素对效应细胞NK-92 MI杀伤靶细胞THP1活性的影响并探讨其作用机制。方法:LDH释放法检测冬凌草甲素作用前后NK-92 MI对THP1的杀伤效率;应用qRT-PCR和Western blot分别检测THP1细胞表面自然杀伤细胞激活性受体D(NKG2D)相关配体表达情况;ELISA法检测效靶细胞共培养上清中细胞因子表达变化。结果:冬凌草甲素处理后NK-92 MI在不同效靶比均可提高对THP1细胞的杀伤效率;冬凌草甲素可上调THP1细胞表面MICB、ULBP1和ULBP2表达,同时增加效靶细胞共培养上清中IFN-γ和TNF-β释放,而对MICA、ULBP3表达及TNF-α释放无明显影响。结论:冬凌草甲素通过增加MICB、ULBP1和ULBP2表达以及促进IFN-γ和TNF-β释放提高THP1细胞对NK-92 MI的杀伤敏感性。

嵌合抗原受体修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤

目的:探讨用特异性靶向HER2抗原的嵌合抗原受体(HER2-CAR)修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率。方法:通过PCR获得HER2-CAR片段,运用常规分子克隆技术,将其构建到慢病毒载体上,利用包装的慢病毒颗粒对NK-92MI细胞进行转染;应用流式细胞术检测细胞转染效率以及转染前后NK-92MI的IFN-γ和颗粒酶分泌差异;使用7-AAD和流式细胞术体外检测HER2-CAR-NK92MI细胞对乳腺癌细胞的杀伤效率;构建小鼠乳腺癌原位肿瘤模型进行体内细胞毒性的检测。结果:用HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌肿瘤细胞MCF-7和T47D的杀伤效率明显高于未被基因修饰的NK-92MI细胞[分别为(62.4±1.3)%vs(22.1±1.2)%和(50.0±1.9)%vs(16.9±0.6)%,P<0.01];而两者对HER2阴性的乳腺癌细胞MDA-MB-468的杀伤效率没有明显差异[(13.6±1.4)%vs(12.7±0.8)%,P>0.05]。同时,经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞相比未被基因修饰的NK-92MI细胞,IFN-γ的分泌明显升高(P<0.01)。结论:经HER2-CAR修饰的NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤效率明显提高,且具有特异性靶向,此为治疗乳腺癌等恶性肿瘤提供了临床依据。

高表达miR-92a对结直肠癌患者预后影响的Meta分析

目的系统评估mi R-92a对结直肠癌(CRC)患者病理生理特征及预后的影响。方法计算机检索Pub Med、中国生物医学数据库(CBM)、中国知网(CNKI)、万方数据库以及维普科技期刊数据库获取相关文献,检索时间从建库到2016年12月。利用stata 12.0对资料进行合并分析,数据采取危险比(HR),比值比(OR)以及95%置信区间(95%CI)表示。结果总共6篇文献,695例患者纳入本次Meta分析。合并分析表明:(1)高表达的mi R-92a与CRC患者总体生存率有着显著的联系(HR=2.91,95%CI:1.16~7.28,P<0.05);(2)高表达的mi R-92a与CRC患者肿瘤浸润深度(OR=0.56,95%CI:0.33~0.96,P<0.05),TNM分期(OR=0.41,95%CI:0.24~0.71,P<0.05),远处转移(OR=4.71,95%CI:1.74~12.69,P<0.05),淋巴结转移(OR=2.90,95%CI:1.64~5.13,P<0.05)有着明显的联系;与CRC患者的性别(OR=1.01,95%CI:0.60~1.69,P>0.05)和肿瘤分化程度(OR=0.66,95%CI:0.33~1.30,P>0.05)无明显关系。结论高表达的mi R-92a能够潜在的预测CRC患者总体预后和临床病理特征。

识别乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体NK92MI细胞的制备

目的构建识别乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体(CAR)慢病毒表达载体,并使其在NK92MI细胞表达,制备识别HBsAg的CAR-NK92MI细胞。方法根据单链抗体(scFv)的序列,设计并合成CAR,构建慢病毒表达载体,将其包装、浓缩、测定滴度。然后用浓缩的慢病毒感染HEK293T细胞、Western blot法验证CD3ζ链的表达及在NK92MI细胞中的感染效率。结果成功构建识别HBsAg的CAR慢病毒表达载体,测得滴度≥10^(7)转导单位(TU)/mL。感染NK92MI细胞后,可表达CD3ζ蛋白。结论成功制备了识别HBsAg的CAR-NK92MI细胞。

结直肠癌早期筛查中人血浆及粪便miR-92a-1表达水平分析

目的探讨结直肠癌早期筛查中联合检测人血浆和粪便中的mi R-92a-1表达水平的临床意义。方法选择2013年1月‐2015年1月该院收治的结直肠癌患者55例和健康者55名为研究对象,检测所有人的血浆和粪便标本中的mi R-92a-1表达水平并进行对比。结果根据ROC曲线,观察组血浆中mi R-92a-1的敏感性为83.6%,大便中mi R-92a-1的敏感性为32.7%;联合检测血浆和大便标本时敏感性为89.1%,联合检测与单本检测相比存在显著性差异(P<0.05)。结论联合检测血浆和粪便中的mi R-92a-1表达水平对于结直肠癌早期筛查具有重要的临床意义。

氧化苦参碱提高乳腺癌MCF-7细胞对NK-92MI细胞杀伤作用的敏感性

目的:探讨氧化苦参碱(OMT)处理前后MCF-7细胞对NK-92MI细胞敏感性的变化及其分子机制。方法:采用CCK-8法检测OMT对MCF-7细胞的毒性作用,采用LDH法和流式细胞术检测NK-92MI细胞对OMT处理后MCF-7细胞的杀伤活性,采用流式细胞术检测OMT处理后MCF-7细胞表面ULBP1、ULBP2和MICA/B蛋白的表达,采用Western blot法检测MCF-7细胞中p65蛋白的磷酸化水平,采用ELISA法检测培养液上清中TNF-α和IFN-γ的含量。结果:OMT对乳腺癌MCF-7细胞活力具有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(P<0. 05);在不同效靶比(5∶1、10∶1和20∶1)下,低浓度OMT可显著提高MCF-7细胞对NK-92MI细胞杀伤作用的敏感性(P<0. 05);低浓度OMT处理后的MCF-7细胞,ULBP1、ULBP2和MICA/B蛋白的表达水平以及p65蛋白的磷酸化水平都显著上调(P<0. 05),可促进NK-92MI细胞分泌更多的TNF-α和IFN-γ(P<0. 05),但该作用可被NF-κB抑制剂PDTC抑制(P<0. 05)。结论:低浓度OMT在体外提高乳腺癌MCF-7细胞对NK-92MI细胞杀伤作用的敏感性,这可能与其激活NF-κB信号通路有关,进而上调MCF-7细胞表面ULBP1、ULBP2和MICA/B蛋白表达,以及促进NK-92MI细胞分泌TNF-α和IFN-γ有关。

靶向CD7的嵌合抗原受体NK-92MI细胞对CD7阳性血液系统恶性肿瘤细胞的杀伤作用

目的:探讨特异性靶向CD7分子的嵌合抗原受体(CD7-CAR)修饰的NK-92MI细胞对CD7阳性血液系统恶性肿瘤细胞的杀伤作用。方法:分别收集5例CD7^+的急性T淋巴细胞白血病(acute T-lymphoblastic leukemia,T-ALL)、10例急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)和6例T细胞淋巴瘤三类血液系统恶性肿瘤细胞,经实验室离心处理、培养后检测肿瘤细胞表面靶标的表达水平;应用7-AAD、CD56-APC、CD3-FITC、IgG Fc-PE流式细胞术检测NK-92MI和CD7-CAR-NK-92MI细胞的转染效率;使用PE Annexin V Apoptosis Detection Kit检测CD7-CAR-NK-92MI细胞对CD7阳性血液肿瘤细胞的体外杀伤效率。用CBA试剂盒检测杀伤后NK-92MI和CD7-CAR-NK-92MI细胞因子白介素-2(IL-2)、干扰素(IFN-γ)及颗粒酶B的分泌差异。结果:CD7-CAR修饰的NK-92MI细胞对CD7^+T-ALL、AML、T细胞淋巴瘤肿瘤细胞的杀伤效率明显高于未被修饰的阴性对照组NK-92MI细胞,其差异具有统计学意义(P<0.05);与未被修饰的NK-92MI细胞相比,经CD7-CAR修饰的NK-92MI细胞分泌的细胞因子中,IFN-γ和颗粒酶B的水平明显升高(P<0.05)。结论:经CD7-CAR修饰的NK-92MI细胞对CD7^+T-ALL、AML和T淋巴瘤细胞的杀伤效率显著提高,且具有特异性靶向作用。

IL-7和IL-21修饰的NK-92MI细胞对其自身及正常人外周血T细胞的影响

目的:研究经IL-7和IL-21修饰后的NK-92MI细胞的增殖和细胞毒性及其对正常人外周血中T细胞的影响。方法:通过基因工程将IL-7和IL-21基因片段构建到电转载体上,通过电转的方式构建了NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞。以细胞计数法和CFSE/7-AAD流式术分别对NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性和细胞毒性进行比较。将正常人PBMC与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外共培养后,用流式细胞术检测PBMC中T细胞的表型变化;同时检测正常人活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞共存时相互的细胞毒性以及对肿瘤细胞的毒性比较。结果:成功构建了高表达IL-21的NK-92MI/IL-21细胞和同时高表达IL-7和IL-21的NK-92MI/IL-7&21细胞;NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对Jurkat和K562细胞的细胞毒性没有变化,但是NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞相对于亲本细胞NK-92MI的体外增殖活性有所提高;NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对PBMC中T细胞的活化有一定的促进作用;活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞相互之间几乎无细胞毒性;同时,当T细胞和3种NK细胞共存时,T细胞不影响NK细胞对K562细胞的细胞毒性。结论:基因工程修饰的NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性有所提高,它们对外周血T细胞的活化有一定的刺激和促进作用;T细胞和NK-92MI细胞之间无细胞毒性,同时活化T细胞的存在不影响NK-92MI细胞的细胞毒性。

Manufacturing CAR-NK against tumors: Who is the ideal supplier?

Chimeric antigen receptor-natural killer(CAR-NK) cells have emerged as another prominent player in the realm of tumor immunotherapy following CAR-T cells. The unique features of CAR-NK cells make it possible to compensate for deficiencies in CAR-T therapy, such as the complexity of the manufacturing process, clinical adverse events, and solid tumor challenges. To date, CAR-NK products from different allogeneic sources have exhibited remarkable anti-tumor effects on preclinical studies and have gradually been applied in clinical practice.However, each source has advantages and disadvantages. Selecting a suitable source may help maximize CAR-NK cell efficacy and increase the feasibility of clinical transformation. Therefore, this review discusses the development and challenges of CAR-NK cells from different sources to provide a reference for future exploration.

循环型m icroRNA-92a在先天性巨结肠中的表达及上调CDX2基因的研究

目的探讨循环型micro RNA-92a(mi R-92a)在先天性巨结肠(HD)中的表达,以及通过上调尾侧型同源转录因子-2(CDX2)基因抑制肠神经干细胞(ENSCs)增殖的可能机制。方法选取2013年1月-2015年12月在山东省临沂市沂水中心医院行先天性巨结肠根治术16例HD患儿的术前血清标本。实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测血清mi R-92a m RNA的表达。提取孕15 d胎鼠肠管ENSCs,通过免疫学方法鉴定ENSCs;免疫磁珠法分选Nestin+ENSCs,脂质体转染使Nestin+ENSCs内过表达mi R-92a,噻唑蓝法检测细胞的增殖活性,q RT-PCR、Western blot检测CDX2基因的表达。结果 HD患儿血清中mi R-92a m RNA的相对表达量为(23.5±4.66),高于对照组(t=12.661,P=0.000);ENSCs细胞培养早期Nestin染色阳性,具有向Tuj-1阳性、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞分化的潜能;ENSCs过表达mi R-92a后,CDX2 m RNA的相对表达为(13.024±3.882),高于对照组(F=47.212,P=0.000),CDX2蛋白表达为(0.436±0.0828),高于对照组(F=48.793,P=0.000),细胞的增殖活性在转染后24、48和72 h明显受抑制。结论 mi R-92a通过上调CDX2基因的表达,抑制ENSCs的增殖,可能促进HD发生、发展。

CAR-NK抗肿瘤研究的现状与发展趋势

作为固有免疫中重要的效应细胞,NK细胞具有强大的抗肿瘤功能,在肿瘤免疫治疗方面具有良好的应用前景。随着嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的T细胞(CAR-T)技术的兴起,NK细胞的CAR修饰潜力也受到了关注。CAR-NK的研发既传承了经典CAR-T研发的思路,也实现了诸多基于NK细胞生物特点的创新和发展。外周血NK细胞、NK细胞系和干细胞来源的NK细胞各具生物学特色,在CAR-NK研发中被广泛使用。已有靶向多种血液肿瘤和实体瘤抗原的CAR-NK在体外实验和动物模型中取得显著效果。虽然在临床暂未有数据支持CAR-NK的疗效且仍存在一些瓶颈问题需要攻克,但是CAR-NK有望在治疗实体瘤、简化免疫治疗等方面实现新的突破。