基于CRISPR/Cas9联合Cre-LoxP方法的Ddx3x肝脏条件性敲除小鼠模型的构建与鉴定

目的采用CRISPR/Cas9联合Cre-LoxP方法构建DEAD-box RNA解旋酶3X连锁(DEAD-box RNA helicase 3X-linked,Ddx3x)肝脏条件性敲除小鼠。方法设计特异的sgRNA序列,在Ddx3x基因外显子4~10两端插入LoxP序列,构建Ddx3x-flox小鼠。采用PCR方法对F0代和F1代小鼠进行基因鉴定。将Ddx3x-flox F1代小鼠与特异性表达Alb-Cre的工具鼠交配,获得肝脏条件性敲除Ddx3x基因小鼠(Ddx3x^(Δhep))。采用PCR方法和Western blotting方法分别检测Ddx3x^(Δhep)基因小鼠目的基因与蛋白的表达。选取8周龄雄性野生型C57/6J小鼠、Ddx3x^(Δhep)小鼠、Ddx3x^(fl/fl)小鼠,测定血清ALT、AST水平评价肝脏肝损伤情况。结果对F1代小鼠基因PCR鉴定的结果表明,基因型符合Ddx3x^(fl/fl);F1代小鼠与Alb-Cre小鼠杂交,子代与Ddx3x^(fl/fl)小鼠杂交,即获得Ddx3x^(Δhep)小鼠;PCR与Western blotting结果显示,目的小鼠肝组织中Ddx3x基因和蛋白表达显著降低。此外,Ddx3x^(Δhep)小鼠无胚胎致死现象,出生后生理状况良好。正常饲养条件下,Ddx3x^(Δhep)小鼠与Ddx3x^(fl/fl)小鼠及野生型小鼠相比,血清ALT、AST指标及体质量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论基于CRISPR/Cas9联合Cre-LoxP方法成功构建了Ddx3x^(Δhep)小鼠动物模型,为后续研究Ddx3x在肝脏中的生物学功能及作用机制奠定了良好的基础。

CRISPR/Cas9联合Cre-Loxp系统建立VASN条件敲除的小鼠肝细胞系

目的:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统的条件性敲除策略构建VASN基因敲除的AML12小鼠肝细胞株。方法:在VASN基因第二外显子上下游设计靶点并合成gRNA序列,构建2个CRISPR/Cas9重组载体;设计构建VASN上下游分别带有Loxp序列和旁侧同源序列的供体载体donor DNA质粒;将3个质粒共转染至小鼠肝细胞AML12中,分离单克隆,提取基因组DNA,经PCR及测序鉴定获得稳定敲入Loxp序列的单克隆细胞株AML12-Loxp;将pALB-Cre质粒转染至AML12-Loxp,筛选建立敲除VASN基因的细胞系。结果:成功构建2个靶向敲除VASN基因的pX459-gRNA-VASN-1和pX459-gRNAVASN-2重组载体及一个供体载体;转染药筛后获得12个单细胞克隆,经测序,5个单克隆细胞实现VASN基因上下游精确敲入Loxp序列;同源重组敲入效率为41.6%;pALB-Cre质粒转染后获得20个单细胞克隆,经PCR和测序获得12个VASN基因敲除的单克隆细胞,敲除效率为60%。结论:利用CRISPR/Cas9技术联合Cre-Loxp系统成功构建了VASN基因敲除的AML12细胞,为后续体外研究VASN在肝细胞中的功能及在动物体内实现VASN的条件性敲除奠定了分子基础。

条件接收系统（CAS）技术讲座第二讲 伪随机序列

（上接第22期） 条件接收系统（Conditional AccessSystem，CAS）的核心是密码术。人们有时候会认为把明文（plain．text——这里是指透明的图像、声音、数据等信息）通过算法加扰（scrambling）后变成密文（ciphertext），其安全性主要是依靠加密算法来保证的，这是一种误解。基于保持算法秘密的算法称为受限制的算法，是一种低密级应用，它的保密性是很差的。

有条件接收系统CAS的研究

全数字CAS是一个集多项高新技术于一体的综合系统。从加解扰技术的基本要求出发 ,全面分析了CA技术的发展过程与思路 ,介绍了我国第一套拥有自主知识产权的 ,已成功实现与国外著名IRDETO公司CA系统同密运行测试的清华同方CA系统的技术原理 。

SOPCA条件接收系统的设计与应用

数字电视条件接收系统是广播电视信息安全的关键环节,目前国内实用的系统均为国外公司的产品,不利于国家信息安全的管理。在现有DVB（Digital Video Broadcasting）标准的基础上,提出了SOPCA（SoftwarePlatform of Connecting Appliance）条件接收系统,实现了节目传输流加扰、节目管理、用户管理、分层加密机制和IC卡控制等关键技术,完成了在自主知识产权的SOPCA嵌入式操作系统和硬件平台上的原型机应用。经过总体结构和具体性能的综合分析比较,在功能上优于其它同类系统,最后对系统功能的进一步完善进行了探讨。

金亚数字电视条件接收系统(CAS)V1.0

在金亚数字电视条件接收系统V1.0的发展过程当中,充分考虑了新业务的需求,支持PPC、PPV、NVOD、数据服务等数字广播电视业务。向数字电视运营商提供包括IC卡寻址、4级地域分组寻址、8种逻辑分组寻址、64种业务组合分组寻址、设备型号分组寻址等灵活多样的操作。可以实现针对指定IC卡用户、分组用户的授权、OSD、电子邮件等操作,可以实现IC卡用户的在线充值业务。同时,还也可以实现针对指定IC卡用户、分组用户的条件禁播和条件准播。在金亚数字电视条件接收系统V1.0的开发设计过程当中,充分考虑到数字电视运营的现状。能够支持多种加扰器和多个数字电视用户管理系统,满足同密标准,完成了和国内多家厂商的同密测试和认证。

天柏:主打双向条件接收系统BiCAS

随着网络双向化改造进程的加快，双向互动业务越来越受到人们的重视，数字电视的发展方向（后平移时代）也必然是糅合了多种业务形态的以互动为主要特征的双向化时代。而在一个双向的广电网络中，我们如何为节目加密？何种加密方式才是更经济和更安全的？天柏公司作为国内数字电视广播系统的集成和终端产品供应商，在CCBN2007上展出的BiCAS双向条件接收系统将会解决这些疑问。

天柏有条件接收系统(CAS)获国家广电总局认证证书

2004年2月6日,国家广电总局向天柏宽带网络科技有限公司颁发了数字电视条件接收系统(CAS)A级认证证书(编号:C006),A级为超过200万用户以上级别,实测300万用户,是CAS的最高等级。至此,天柏的SMS和CA已经全部通过总局认证。