苦参碱通过lncRNA CASC11/miR-381-3p轴调控宫颈癌细胞的恶性生物学行为的研究

目的探讨苦参碱是否通过调控lncRNA CASC11/miR-381-3p的表达,调控宫颈癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。方法宫颈癌细胞SiHa分别转染pcDNA3.1空载体、pcDNA3.1-lncRNA CASC11、mimics阴性对照和miR-381-3p mimics,经不同质量浓度(25、50和100 mg·L^(-1))的苦参碱处理后,采用qRT-PCR试验检测细胞中lncRNA CASC11和miR-381-3p表达,CCK-8试验检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell小室试验检测细胞迁移和侵袭,双荧光素酶试验验证lncRNA CASC11和miR-381-3p的靶向关系,Western blot试验检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Cleaved-caspase3、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果lncRNA CASC11在宫颈癌细胞中高表达,miR-381-3p在宫颈癌细胞中低表达;不同质量浓度的苦参碱均能抑制SiHa细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡,且具有浓度依赖性;不同质量浓度的苦参碱均能抑制SiHa细胞中lncRNA CASC11表达,促进细胞中miR-381-3p的表达,且具有浓度依赖性;SiHa细胞中lncRNA CASC11靶向负调控miR-381-3p的表达;过表达lncRNA CASC11能够逆转苦参碱对SiHa细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用,而同时过表达miR-381-3p则能逆转lncRNA CASC11对苦参碱的回复作用。结论苦参碱通过抑制lncRNA CASC11的表达,进而上调miR-381-3p的表达,发挥对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用,并促进细胞凋亡。

lncRNA CASC11靶向调控miR-146a-3p对结肠癌细胞增殖、侵袭的影响

目的探究长链非编码RNA癌症易感候选基因11(lncRNA CASC11)通过靶向调控miR-146a-3p对结肠癌细胞增殖及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测人结肠黏膜上皮细胞、人结肠癌组织源细胞及3种不同的人结肠癌细胞系HCT116、SW620及SW480中lncRNA CASC11、miR-146a-3p的表达量,同时体外培养SW620细胞系并分为对照组(未处理组)、lncRNA CASC11 siRNA组、lncRNA CASC11 siRNA阴性对照组及lncRNA CASC11 siRNA+miR-146a-3p inhibitor共转染组,分别予以相应处理后,用MTT法及EdU染色检测各组SW620细胞增殖活性;Transwell小室侵袭实验检测各组SW620细胞侵袭能力;免疫荧光染色(ICF)检测各组SW620细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达情况;qRT-PCR及蛋白免疫印迹检测各组SW620细胞miR-146a-3p及上皮间质转化标志蛋白Vimentin、E-cadherin mRNA及蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测SW620细胞中lncRNA CASC11对miR-146a-3p的靶向调控作用;qRT-PCR和蛋白免疫印迹法检测SW620细胞中lncRNA CASC11对c-Met表达水平的调控作用。结果与人结肠黏膜上皮细胞相比,HCT116、SW480、SW620中lncRNA CASC11表达明显升高(均P<0.05),而miR-146a-3p表达明显降低(均P<0.05)。与对照组相比,lncRNA CASC11 siRNA组细胞活性、EdU阳性率、侵袭细胞数及Vimentin mRNA表达降低(均P<0.05),细胞Bax/Bcl-2比值、miR-146a-3p及E-cadherin mRNA表达均升高(均P<0.05);lncRNA CASC11 siRNA阴性对照组与对照组相比各检测结果无明显差异(均P>0.05);与lncRNA CASC11 siRNA组相比,共转染组细胞活力、EdU阳性率、侵袭细胞数、Vimentin mRNA表达升高(均P<0.05),细胞Bax/Bcl-2比值、miR-146a-3p及E-cadherin mRNA表达均降低(均P<0.05)。在SW620细胞中,lncRNA CASC11可靶向下调miR-146a-3p的表达,上调下游c-Met基因的表达。结论lncRNA CASC11通过靶向下调miR-146a-3p介导结肠癌细胞的生物学行为,敲低lncRNA CASC11基因可促进miR-146a-3p表达,抑制结肠癌细胞增殖及侵袭。

八月札水提物对胶质瘤细胞EMT的作用机制研究

目的:通过长链非编码RNA(LncRNA)肿瘤易感基因(CASC11)/微小RNA-641(miR-641)信号轴探讨八月札水提物对胶质瘤细胞SHG-44上皮间质转化(EMT)的影响。方法:SHG-44细胞分别用含0、30、60、90、120和180μg/mL八月札水提物的培养基培养,24h后MTT法检测细胞存活率。SHG-44细胞随机分为对照组、八月札水提物组(90μg/mL八月札水提物处理24h)、阴性对照组(NC组:转染NC 24h)、CASC11模拟物组(CASC11mimic组:转染CASC11 mimic 24h)和八月札水提物+CASC11 mimic组(转染CASC11 mimic 24h后,90μg/mL八月札水提物处理24h),双荧光素酶报告基因检测CASC11和miR-641的靶向关系、qRT-PCR检测CASC11和miR-641表达水平、划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell实验检测细胞侵袭能力、蛋白印迹法检测上皮钙粘蛋白(E-cad)、神经钙粘蛋白(N-cad)和波形蛋白(vimentin)蛋白相对表达量。结果:随八月札水提物浓度的增加,细胞存活率呈剂量依赖性降低(P<0.05);与对照组比较,八月札水提物组CASC11表达水平、划痕愈合面积百分比、侵袭细胞数及N-cad和vimentin蛋白相对表达量降低,miR-641表达水平和E-cad蛋白相对表达量升高(P<0.05);与八月札水提物组比较,八月札水提物+CASC11 mimic组CASC11表达水平、划痕愈合面积百分比、侵袭细胞数及N-cad和vimentin蛋白相对表达量升高,miR-641表达水平和E-cad蛋白相对表达量降低(P<0.05);与NC组比较,CASC11 mimic组CASC11表达水平、划痕愈合面积百分比、侵袭细胞数及N-cad和vimentin蛋白相对表达量升高,miR-641表达水平和E-cad蛋白相对表达量降低(P<0.05);与CASC11 mimic组比较,八月札水提物+CASC11 mimic组CASC11表达水平、划痕愈合面积百分比、侵袭细胞数及N-cad和vimentin蛋白相对表达量降低,miR-641表达水平和E-cad蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论:八月札水提物抑制胶质瘤细胞SHG-44上皮间质转化过程,其可能是通过降低CASC11表达,同时升高miR-641表达发挥作用。