莲房原花青素通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导HepG2细胞凋亡

研究莲房原花青素(LSPCs)诱导肝癌Hep G2细胞凋亡的机制。利用MTT法检测LSPCs对肝癌Hep G2细胞的生长抑制作用,Hochest 33258染色观察凋亡细胞的核形态,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,彗星实验用来检测细胞DNA损伤,JC-1染色用来检测线粒体膜电位,Western blotting法检测细胞凋亡蛋白水平的表达。LSPCs作用细胞后,显著抑制Hep G2细胞的增殖;细胞凋亡征象明显,核染色体高度凝聚,细胞核碎裂,核固缩,染色质凝聚的细胞数从3.86%增至42.76%(p<0.01);活细胞率急剧减少,而凋亡率从5.32%增至67.05%(p<0.01);LSPCs诱发细胞产生DNA损伤,线粒体膜电位下降,导致Cytochromec、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达量增加,Bax蛋白的表达量上调,Bcl-2蛋白的表达量下调,Bax/Bcl-2的比值上升。而凋亡抑制剂Z-VAD能够削弱LSPCs对Hep G2细胞增殖的抑制作用,显著下调细胞核聚缩,抑制线粒体损伤及Caspase相关蛋白的表达量,最终阻断LSPCs的致凋亡作用。由此得出结论,LSPCs可通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导人肝癌细胞凋亡。

Etoposide经由caspase依赖途径诱导RGC-5细胞凋亡

目的研究etoposide诱导视网膜神经节细胞RGC-5细胞死亡的分子机制。方法建立etoposide诱导的RGC-5细胞死亡模型,应用APOPercentageTM及原位TUNEL染色确定RGC-5细胞的死亡方式,并进而利用Westernblot检测细胞内活化caspase-3及PARP-1的变化情况,并通过广谱caspase抑制剂间接证明是否有caspase依赖途径的激活。结果相对高浓度的etoposide(1～10μmol/L)可以迅速降低RGC-5细胞的活性并诱导死亡;APOPercentageTM及原位TUNEL染色确定etoposide是以凋亡的方式诱导RGC-5细胞死亡;Westernblot显示etoposide诱导后的RGC-5细胞中caspase-3被激活并伴有PARP-1的降解片段出现;广谱caspase抑制剂Z-VAD-fmk可以保护etoposide诱导的RGC-5细胞,提高细胞活性。结论Etoposide经由caspase依赖途径诱导RGC-5细胞凋亡。

鬼臼毒素纳米脂质载体通过非Caspase依赖途径诱导VK2/E6E7细胞凋亡机制的研究

目的:探讨鬼臼毒素纳米脂质载体(POD-NLC)诱导人永生化阴道上皮细胞(VK2/E6E7)凋亡的作用及机制。方法:取对数期生长VK2/E6E7细胞,分别加入POD-NLC和Caspase抑制剂Z-VAD-FMK共同培养24小时。实验分为4组:A组:空白对照组;B组:0.25μg/mL POD-NLC+Caspase抑制剂组;C组:1μg/mL POD-NLC+Caspase抑制剂组;D组:空白NLC+Caspase抑制剂组。采用流式细胞仪检测ROS水平,qPCR检测AIF mRNA表达,蛋白印迹检测各组细胞AIF、cyt-C蛋白表达。结果:B组、C组均可以上调ROS、AIF、cyt-C水平,与A组及D组相比均有统计学差异(P值均<0.05);B组与C组AIF mRNA及AIF蛋白表达无统计学差异(P值均>0.05);ROS、cyt-C各组间比较均有统计学意义(P值均<0.05)。结论:鬼臼毒素纳米脂质载体可以通过非Caspase依赖途径诱导永生化阴道上皮细胞凋亡。

慢性氟中毒调控caspase途径介导大鼠脑组织神经细胞凋亡的研究

目的研究慢性氟中毒是否通过激活caspase途径介导大鼠脑组织神经细胞凋亡。方法 90只SD大鼠随机分为3组,对照组(饮用正常自来水)、染氟组(饮用含氟量50 mg/L蒸馏水)、VitE(维生素E)拮抗组(饮用含氟量50 mg/L蒸馏水,按VitE 5 mg/kg体重灌胃)。10个月后观察大鼠氟斑牙情况,尿氟和骨氟含量;流式细胞仪检测各组大鼠海马细胞和皮质细胞凋亡率;Western-blot检测各组大鼠海马细胞和皮质细胞Cleaved-caspase3、9、8及Cytosolic Cyt-c蛋白表达情况。结果染氟组及VitE拮抗组大鼠均出现不同程度的氟斑牙;尿氟与骨氟含量、细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05),VitE拮抗组低于染氟组(P<0.05);染氟组及VitE拮抗组大鼠海马细胞和皮质细胞中Cleaved-caspase3、9、8及Cytosolic Cyt-c蛋白表达显著升高,VitE拮抗组低于染氟组。结论慢性氟中毒可能通过激活caspase途径参与大鼠脑组织神经细胞凋亡过程,维生素E对这一过程具有拮抗作用。

稳心颗粒对心肌梗死大鼠BCL-2/BAX/Caspase凋亡途径基因表达的影响

目的:探讨稳心颗粒调控心肌细胞凋亡相关基因表达的心脏保护机制。方法:建立心肌梗死大鼠模型,术后随机分为模型组、稳心颗粒低剂量组、稳心颗粒高剂量组、美托洛尔组及假手术组。治疗2周后采用心脏超声心动图检测各组大鼠左心室收缩末期前壁厚度(LVAWs)、收缩末期内径(LVIDs)、收缩末期后壁厚度(LVPWs)、舒张末期前壁厚度(LVAWd)、舒张末期内径(LVIDd)、舒张末期后壁厚度(LVPWd)以及左室射血分数(LVEF);苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠心脏病理结构改变;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各组大鼠哺乳动物B细胞淋巴瘤-2(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的相对表达水平;TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡率变化。结果:与假手术组相比,模型组LVAWs、LVPWs、LVPWd及LVEF均显著减少(P<0.05~0.01),LVIDs、LVIDd显著增加(P<0.05~0.01),心脏组织病理缺血损伤严重,并且模型组BCL-2mRNA相对表达水平及BCL-2/BAX比值明显减少(P<0.01),而BAX、Caspase-9、Caspase-3 mRNA相对表达水平明显增高(P<0.01),心肌细胞凋亡率显著升高(P<0.01);稳心颗粒低、高剂量组及美托洛尔组的LVAWs、LVPWs、LVPWd、LVEF均显著增加(P<0.05~0.01),LVIDs、LVIDd显著减小(P<0.05~0.01),心脏组织病理损伤改善,BCL-2 mRNA表达水平和BCL-2/BAX比值显著增加(P<0.05~0.01),BAX、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达水平显著降低(P<0.05~0.01),心肌细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。结论:稳心颗粒可通过调控BCL-2/BAX/Caspase凋亡途径基因表达而发挥心脏保护作用。

替莫唑胺诱导大鼠脑胶质瘤C6细胞caspase非依赖的程序性死亡

目的观察替莫唑胺对大鼠脑胶质瘤C6细胞程序性死亡的诱导效应,并探讨可能的分子机制。方法观察不同浓度替莫唑胺在不同时间点处理大鼠脑胶质瘤大鼠脑胶质瘤C6细胞系,MTT法观察抑制率并筛选出最优的作用时间和作用浓度。应用400μg/ml替莫唑胺处理细胞24 h,通过HE染色、Hochest、Western blot、Tunnel、免疫组化观察替莫唑胺对大鼠脑胶质瘤C6细胞系的程序性死亡的诱导效应。结果 MTT法、HE染色、Hochest和Tunnel结果显示替莫唑胺对大鼠脑胶质瘤C6细胞具有凋亡诱导效应;免疫组化和Western blot结果显示促凋亡蛋白Bax表达水平上调,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达的下调。未发现主要的caspase蛋白的表达变化。结论替莫唑胺对脑胶质瘤C6细胞具有凋亡诱导效应,而这种效应可能是通过caspase非依赖途径完成的。

全反式视黄酸诱导ARPE-19细胞凋亡的信号途径

目的探讨全反式视黄酸(ATRA)体外诱导人视网膜色素上皮(ARPE)-19细胞凋亡的信号途径。方法采用不同浓度的ATRA处理ARPE-19细胞24 h、48 h,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测其细胞活性;分别采用0、2.5、5、10、15和20μmol/L ATRA处理ARPE-19细胞24 h,通过流式细胞术和Western blot法检测细胞凋亡水平和caspase相关蛋白相对表达量;分别采用0、2.5、5、10和20μmol/L ATRA处理ARPE-19细胞24 h,通过流式细胞术检测其总活性氧簇(ROS)水平和多重半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(multicaspase)水平,通过实时荧光定量PCR法检测caspase相关基因mRNA相对表达量。其中0μmol/L ATRA组作为空白对照。结果CCK-8检测结果显示,ATRA处理ARPE-19细胞24 h和48 h后的半数抑制浓度(IC 50)分别为13.88μmol/L和11.99μmol/L,不同浓度ATRA处理ARPE-19细胞24 h和48 h后细胞存活率总体比较,差异均有统计学意义(F=176.60、350.30,均P<0.01)。细胞培养24 h时,2μmol/L、6μmol/L ATRA组细胞存活率较空白对照组高,12、14、16、18、20μmol/L ATRA组细胞存活率较空白对照组低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,不同浓度ATRA处理ARPE-19细胞后24 h,细胞凋亡、multicaspase及ROS水平总体比较差异均有统计学意义(F=86.39、166.84、101.40,均P<0.01),其中2.5μmol/L和5μmol/L ATRA组细胞凋亡率较空白对照组下降,10、15和20μmol/L ATRA组较空白对照组升高,2.5、5、10、20μmol/L ATRA组multicaspase和ROS相对表达量较空白对照组升高,差异均有统计学意义(均P<0.01);Western blot检测结果显示,与空白对照组比较,2.5、5、10、15、20μmol/L ATRA组caspase 9蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与空白对照组比较,2.5μmol/L ATRA组caspase 12蛋白相对表达量升高,5、10、15、20μmol/L ATRA组逐渐降低,2.5、15、20μmol/L ATRA组与空白对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05);与空白对照组比较,5、10、20μmol/L ATRA组caspase 3蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与空白对照组比较,2.5、5、10、15、20μmol/L ATRA组cleaved caspase 3蛋白相对表达量显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,与空白对照组比较,2.5、5、10、20μmol/L ATRA组caspase 9、caspase 12 mRNA及5μmol/L、10μmol/L ATRA组caspase 3 mRNA相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ATRA浓度小于10μmol/L时,caspase 9和caspase 12 mRNA的相对表达量呈浓度依赖性升高,当浓度达20μmol/L时,其相对表达量显著降低,但仍高于空白对照组。结论ATRA体外诱导ARPE-19细胞凋亡是通过激活ROS及内源性caspase依赖性凋亡途径导致的。

大黄素对Jurkat细胞凋亡的诱导作用及其机制的初步研究

本研究探讨中药大黄素(emodin)对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。应用MTT法检测细胞增殖能力;DNA片段化检测和末端缺口原位标记(TUNEL)法分析细胞凋亡;蛋白印迹法(Western blot)检测BCL-2、C-MYC、hTERT、caspase蛋白前体procaspase-8、procaspase-9、procaspase-3和caspase-3剪切片段以及PARP等蛋白的表达水平。结果表明:大黄素能明显抑制Jurkat细胞增殖,对Jurkat细胞的半数抑制浓度(IC50)约为20μmol/L。DNA片段化的检出及TUNEL凋亡细胞的检出证实了大黄素能有效诱导Jurkat细胞凋亡,细胞凋亡率在一定的药物浓度范围内(0-80μmol/L)与药物作用浓度和作用时间呈正相关。Western blot检测结果显示,BCL-2、C-MYC和hTERT蛋白在大黄素作用后表达水平下降,caspase家族的蛋白前体procaspase-3、8、9表达均下降,而激活后的活性片段caspase-3则表达上调。结论:大黄素能有效抑制Jurkat细胞增殖,诱导其凋亡。其机制可能与下调BCL-2、C-MYC、hTERT等凋亡相关蛋白表达,激活caspase家族特别是caspase-3活性片段蛋白表达有关。

球药隔重楼凝集素的抗肿瘤活性及机制研究

目的探讨球药隔重楼中分离得到的球药隔重楼凝集素(PFL)的肿瘤细胞毒性及其可能的机制。方法用交换层析法纯化PFL同源二聚体;通过噻唑蓝(MTT)法、形态学观察、乳酸脱氢酶(LDH)法、糖蛋白阻断分析等方法分析PFL对肿瘤细胞增殖的抑制情况及其机制。结果 PFL对宫颈癌HeLa、肝癌HepG2以及鼻咽癌CNE-2细胞增殖都有抑制作用。PFL的糖结合位点被甲状腺球蛋白阻断后对肿瘤细胞生长的抑制活性明显降低,表明PFL是通过识别CNE-2细胞表面的糖链作用于细胞,并诱导细胞凋亡。半胱氨酸蛋白酶(caspase)家族抑制剂的研究表明PFL是通过经典的caspase途径诱导CNE-2细胞凋亡。结论PFL可通过caspase途径诱导肿瘤细胞凋亡。

大黄素诱导Molt-4细胞凋亡的作用及其机制的初步研究

目的 研究中药大黄素（Emodin）对急性淋巴细胞白血病Molt-4细胞株增殖、凋亡的影响,并观察大黄素对增殖、凋亡相关蛋白表达水平的影响,探讨其作用机制.方法 应用MTT法检测细胞增殖能力;DNA片段化检测分析细胞凋亡;蛋白印迹法（Western-Blot）检测Caspase蛋白前体Caspase-3剪切片段以及PARP等蛋白表达水平的变化.结果 大黄素能明显抑制Molt-4细胞增殖,对Molt-4细胞的半数抑制浓度（IC50）为25.1μmol·L-1.DNA片段化的检出证实了大黄素能有效诱导Molt-4细胞凋亡,细胞凋亡率在一定的药物浓度范围内（0μmol·L-1～80μmol·L-1）与药物作用浓度和作用时间呈正相关.Western-Blot的结果Caspase家族的蛋白前体procaspase-3表达下降,而激活后的活性片段Caspase-3则表达上调.结论 大黄素能有效抑制Molt-4细胞增殖,诱导其凋亡.其机制可能是通过激活Caspase家族特别是Caspase-3活性片段蛋白表达.

荧光定量PCR测定木糖醇亚硒酸酯诱导人肝癌细胞系SMMC-7221细胞凋亡的机制研究（英文）

木糖醇亚硒酸酯是一种新合成的化合物,其能够引发人肝癌细胞系SMMC-7221细胞凋亡并且其引发SMMC-7221细胞凋亡伴随着谷胱甘肽的消耗.为了提供更多关于木糖醇亚硒酸酯的抗癌机制研究,该实验用荧光定量PCR技术检测经该化合物处理后的SMMC-7221细胞中caspase-3、caspase-8、caspase-9这3个基因mRNA水平的变化.在经0.5mg/L或1mg/L木糖醇亚硒酸酯分别处理SMMC-7221细胞12、24、36、48h后,与对照组相比,caspase-3的mRNA表达水平从12~48h内显著上调;此外,caspase-8和caspase-9的mRNA表达水平仅在24h显著变化,而在其他时间点与对照组相比变化不明显.与对照组相比,caspase-3、caspase-8、caspase-9的mRNA表达在12h上升,在24h到达最大值,在36h和48h逐渐下降.木糖醇亚硒酸酯作为一个能够诱导细胞凋亡的有应用前景的抗癌药物,可能是通过内源性和外源性信号通路引发SMMC-7221细胞凋亡,其深层次的抗癌机制需要更进一步的研究.

硫利达嗪对肺癌PC9细胞的杀伤效应及其机制

背景与目的硫利达嗪作为一种吩噻嗪类抗精神疾病药物,近期研究显示其在体外可抑制多种肿瘤细胞的增殖,但对肺癌的作用尚未见报道。本实验以PC9细胞株为研究对象,旨在观察硫利达嗪对其杀伤效应以及探讨其可能的作用机制。方法不同浓度的硫利达嗪作用PC9细胞后,四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyltetrazolium,MTT)法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率,Western blot检测周期相关蛋白Cyclin D1及凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2、Bax、Bcl-xl表达水平。结果硫利达嗪可显著抑制PC9细胞的增殖,其抑制作用呈时间和浓度依赖性。流式结果显示:随着硫利达嗪药物浓度的增高,细胞发生不同程度的G0/G1期阻滞,细胞凋亡率明显增高。各实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示:与对照组比较,实验组Cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xl表达水平明显下调(P<0.01),Bax表达水平明显上调(P<0.01),Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性显著增加(P<0.01)。结论硫利达嗪可显著抑制PC9细胞的增殖,其机制可能与其激活Caspase内外源性凋亡途径,下调Cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xl,上调Bax有关。

抗RIP3抗体的制备及其亚细胞定位

目的:制备兔抗受体相互作用蛋白3(RIP3)的抗体,并探讨其在鼠源NIH3T3细胞株中的定位。方法:用RTPCR技术从NIH3T3细胞株中克隆鼠rip3基因,进行原核表达及电洗脱纯化。以高纯度的RIP3抗原免疫新西兰兔制备抗血清并纯化。用Westernblot检测该抗体的特异性,以免疫荧光法确定RIP3在NIH3T3细胞株中的定位,以及TNFα和zVAD.fmk对其定位的影响。结果:获得特异性的兔抗RIP3蛋白的抗体。免疫荧光的结果显示,RIP3定位于细胞质中。单用TNFα或zVAD.fmk处理NIH3T3细胞后,RIP3的定位均无明显变化;而用zVAD.fmk和TNFα共同处理细胞后,在核内外均有RIP3分布。结论:成功地克隆rip3基因并制备高特异性的兔抗RIP3抗体。RIP3在NIH3T3细胞株中定位于细胞质中,为进一步研究RIP3在TNFα诱导的caspase非依赖的细胞凋亡途径中的作用奠定了基础。

线叶唇柱苣苔中醌类成分及抗癌差异性研究

从线叶唇柱苣苔全草中首次分离和鉴定了6个蒽醌(1、2、3、5、8、9)、2个α-董尼酮(4、7)和1个萘骈董尼酮(6)。抗癌研究表明,羟甲基取代能显著拓宽蒽醌的抗癌谱,晚期凋亡作用强度与蒽醌母核上酚羟基数成正相关。α-董尼酮母核7位酚羟基的取代(4)可显著扩大其抗癌谱和提高抗癌效果(对所选所有癌株抑制率均接近100%),而该酚羟基甲氧基化后(7)抗癌谱变窄、活性显著降低。α-董尼酮(4)既没有晚期凋亡作用也没有基于Caspase 3/PARP的抗癌途径,而其萘骈董尼酮同系物(6)对乳腺癌(MCF-7)具有高效拮抗(IC50=0.53μM,强度为顺铂18.3倍)、显著的晚期凋亡作用和基于PARP的抗癌途径。蒽醌(5、9)和α-董尼酮(4)对PARP均无切割诱导作用,而萘骈董尼酮(6)具有显著的PARP切割诱导活性。可见,α-董尼酮抗癌谱广,为良好的抗癌先导成分;萘骈董尼酮具有研制为新型靶向抗癌PARP抑制剂的潜力。

白头翁皂苷对NCI-H460细胞增殖、凋亡的影响及其差异表达蛋白筛选

目的:采用nano LC-LTQ-Orbitrap-MS/MS技术筛选白头翁皂苷抑制人大细胞肺癌细胞NCI-H460增殖及诱导凋亡作用的差异表达蛋白,初步推测其作用机制。方法:通过体外培养NCI-H460,人卵巢腺癌细胞SK-OV-3,人胃腺癌细胞SGC-7901,利用噻唑蓝(MTT)比色法检测白头翁皂苷的抗肿瘤活性;磷脂酰丝氨酸外翻分析-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色流式细胞术及4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色检测对细胞凋亡的影响;运用nano LC-LTQ-Orbitrap-MS/MS技术对白头翁皂苷干预后NCI-H460细胞全蛋白进行分析与鉴定;利用Thermo Proteome Discoverer 1. 4软件进行蛋白质鉴定,Sieve 2. 1软件对所有样本蛋白进行相对定量分析,筛选并鉴定差异表达蛋白后,通过DAVID Bioinformatics Resources 6. 8和京都基因及基因组百科全书(KEGG)数据库对差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果:白头翁皂苷对NCI-H460,SK-OV-3及SGC-7901细胞的增殖均有一定的抑制作用,且能诱导NCI-H460细胞的凋亡。白头翁皂苷主要通过调节核糖体的生物功能、糖酵解/糖异生、碳代谢、蛋白质的生物合成及mRNA的代谢等生物进程来影响NCI-H460细胞的增殖及凋亡,可能通过干预丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和调控Caspase途径来诱导NCI-H460细胞的凋亡。结论:白头翁皂苷具有抑制NCI-H460细胞增殖及诱导其凋亡的作用,其作用机制可能与干预MAPK信号通路和调控Caspase途径等有关,为研究白头翁皂苷抗肿瘤的分子机制提供了新思路。

问号钩端螺旋体经线粒体相关信号通路诱导巨噬细胞凋亡的研究

目的确定线粒体相关信号转导途径在问号钩端螺旋体（简称钩体）诱导小鼠单核一巨噬细胞凋亡过程中的作用。方法建立问号钩体黄疸出血群赖株诱导小鼠单核．巨噬样细胞株J774A．1凋亡模型。采用透射电镜观察感染细胞线粒体病变情况，JC-1染色法检测感染细胞线粒体膜电位变化，荧光探针DCFH-DA检测感染细胞内活性氧（ROS）水平。采用试剂盒检测感染细胞caspase．8和caspase-9活性变化。流式细胞术检测感染细胞凋亡情况以及caspase阻断剂阻断凋亡的效果。采用Westernblot检测线粒体内和胞质中的细胞色素C（CytC）以及凋亡诱导因子（AIF）、核酸内切酶G（EndoG）和Smac水平。应用免疫荧光染色法检测AIF和EndoG从细胞质至核内的转位。结果问号钩体赖株可诱导J774A．1细胞凋亡。感染细胞的线粒体有明显病变，线粒体膜电位降低且胞内活性氧水平升高。感染细胞caspase-8活化，caspase-9则否，但caspase阻断剂不能完全阻断细胞凋亡。感染细胞AIF和EndoG从线粒体释放至胞质并转位至细胞核内。未检测到感染细胞胞质内CytC水平升高及Smac的释放。结论线粒体可通过非caspase途径的AIF和EndoG参与问号钩体诱导单核-巨噬细胞凋亡的过程。

壁虎粗多肽诱导食管癌KYSE450细胞凋亡机制研究

目的研究壁虎粗多肽(GCP)体外对食管癌KYSE450细胞的增殖抑制作用。方法取对数生长期细胞,种板,用不同浓度的(0.10,0.15,0.20,0.25,0.30,0.35,0.4,0.45,0.50,0.55,0.6 mg·mL^(-1))GCP处理KYSE450细胞24,48,72 h,通过噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖,根据MTT结果,将实验分组为空白组(0)和低、中、高3个浓度(GCP:0.1,0.15,0.22 mg·mL^(-1))实验组与对照组(10μg·mL^(-1)阿霉素)。以免疫印迹法检测GCP对KYSE450细胞内B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达的影响。结果 GCP处理KYSE450细胞24,48,72 h后,半数抑制浓度(IC_(50))值分别为0.32,0.28,0.24 mg·mL^(-1)。空白组和低、中、高3个浓度实验组与对照组的Bax与Bcl-2灰度比值平均分别为(23.83±0.07)%,(51.08±0.78)%,(148.26±6.19)%,(329.33±4.44)%,(115.84±0.26)%;这5组的Caspase-9与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)灰度比值平均分别为(14.81±1.05)%,(20.91±1.24)%,(39.61±1.89)%,(43.68±1.13)%,(39.82±0.69)%;这5组的Caspase-3与GAPDH灰度比值平均分别为(6.37±0.51)%,(10.97±0.50)%,(13.44±0.49)%,(17.03±0.49)%,(8.63±0.42)%。以上各项指标,与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 GCP可抑制KYSE450细胞增殖并诱导其凋亡,其机制与Caspase依赖性途径有关。