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亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因重组犬2型腺病毒的构建
1
作者
张秀芹
夏咸柱
+2 位作者
卫广森
常惠芸
高玉伟
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期118-121,共4页
应用PCR方法扩增出亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒的VP1基因,继而构建出真核表达载体pVAX-VP1。再将含有巨细胞启动子CMV的目的基因表达盒连接到穿梭载体pVAX△E3上,筛选出VP1表达盒方向与E3区转录方向一致的重组子,获得转移载体。再经酶切,连接等...
应用PCR方法扩增出亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒的VP1基因,继而构建出真核表达载体pVAX-VP1。再将含有巨细胞启动子CMV的目的基因表达盒连接到穿梭载体pVAX△E3上,筛选出VP1表达盒方向与E3区转录方向一致的重组子,获得转移载体。再经酶切,连接等方法获得重组腺病毒质粒。利用脂质体介导将重组质粒转染DK细胞,转染3次后,细胞出现明显的腺病毒病变。经PCR扩增、测序检测及基因组酶切鉴定,证明该病毒即为重组犬2型腺病毒。命名为CAV2/FMDV。经验证,该重组毒可稳定遗传,其毒价为103.5TCID50/mL。
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关键词
亚洲
ⅰ
型口蹄疫病毒
犬2型腺病毒
重组
VP1基因
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职称材料
重组Ⅸ蛋白检测犬传染性肝炎病毒抗体间接ELISA方法的建立
2
作者
张洋
许澄
+3 位作者
刘燕玲
刘殿峰
任文陟
袁宝
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2010年第36期20724-20726,共3页
[目的]建立用重组蛋白Ⅸ检测犬传染性肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。[方法]分别设置不同抗原包被浓度、包被条件、封闭液等,比较ELISA反应效果。[结果]最佳抗原包被浓度为5.0μg/ml;最佳包被条件为,37℃包被1 h、4℃过夜;最佳封闭液为5%...
[目的]建立用重组蛋白Ⅸ检测犬传染性肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。[方法]分别设置不同抗原包被浓度、包被条件、封闭液等,比较ELISA反应效果。[结果]最佳抗原包被浓度为5.0μg/ml;最佳包被条件为,37℃包被1 h、4℃过夜;最佳封闭液为5%BSA;HRP-羊抗犬IgG的最佳工作浓度为1∶1 600。[结论]建立了检测犬传染性肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。
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关键词
犬传染性肝炎病毒
Ⅸ蛋白
间接ELISA
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职称材料
犬细小病毒、犬腺病毒Ⅰ型和犬腺病毒Ⅱ型三联PCR诊断方法的建立
被引量:
2
3
作者
于永乐
王吉贵
+5 位作者
苏俊
杨双双
刘莹
李沛然
李兆达
刘维全
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第12期2340-2344,共5页
旨在建立可同时检测犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒I型(canine adenovirus typeⅠ,CAV-Ⅰ)和犬腺病毒Ⅱ型(canine adenovirus typeⅡ,CAV-Ⅱ)的PCR诊断方法,分别将3种病毒基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Pr...
旨在建立可同时检测犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒I型(canine adenovirus typeⅠ,CAV-Ⅰ)和犬腺病毒Ⅱ型(canine adenovirus typeⅡ,CAV-Ⅱ)的PCR诊断方法,分别将3种病毒基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5.0计算机软件设计并合成了2对特异性扩增引物,目的片段大小分别为670 bp(CPV)、497 bp(CAV-Ⅰ)和1019 bp(CAV-Ⅱ)。分别提取CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ细胞培养物的DNA,进行三联PCR扩增试验。结果表明,所建立的单项PCR及二联PCR扩增良好,其产物经测序比对与引物扩增序列完全一致。在此基础上,优化三联PCR扩增试验条件,成功建立了可同时检测CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的三联PCR诊断方法。并对其特异性和灵敏度进行检测,三联PCR最低检测限度为0.16 pg总DNA,而对犬副流感病毒和犬瘟热病毒的PCR检测结果均为阴性。对送检的20份病料进行检测,结果显示15份为CPV阳性,5份为CAV-Ⅰ阳性,1份为CAV-Ⅱ阳性。
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关键词
犬细小病毒
犬腺病毒
ⅰ
型
犬腺病毒Ⅱ型
三联PCR
原文传递
题名
亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因重组犬2型腺病毒的构建
1
作者
张秀芹
夏咸柱
卫广森
常惠芸
高玉伟
机构
解放军军事医学科学院军事兽医研究所
沈阳农业大学畜牧兽医学院
中国农业科学院兰州兽医研究所
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期118-121,共4页
文摘
应用PCR方法扩增出亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒的VP1基因,继而构建出真核表达载体pVAX-VP1。再将含有巨细胞启动子CMV的目的基因表达盒连接到穿梭载体pVAX△E3上,筛选出VP1表达盒方向与E3区转录方向一致的重组子,获得转移载体。再经酶切,连接等方法获得重组腺病毒质粒。利用脂质体介导将重组质粒转染DK细胞,转染3次后,细胞出现明显的腺病毒病变。经PCR扩增、测序检测及基因组酶切鉴定,证明该病毒即为重组犬2型腺病毒。命名为CAV2/FMDV。经验证,该重组毒可稳定遗传,其毒价为103.5TCID50/mL。
关键词
亚洲
ⅰ
型口蹄疫病毒
犬2型腺病毒
重组
VP1基因
Keywords
foot-and-mouth disease virus Asia
ⅰ
CAV 2
recombination
VP1 gene
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
重组Ⅸ蛋白检测犬传染性肝炎病毒抗体间接ELISA方法的建立
2
作者
张洋
许澄
刘燕玲
刘殿峰
任文陟
袁宝
机构
吉林大学畜牧兽医学院
吉林大学实验动物中心
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2010年第36期20724-20726,共3页
基金
吉林省实验动物质量检测中心平台建设项目(20071138)
文摘
[目的]建立用重组蛋白Ⅸ检测犬传染性肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。[方法]分别设置不同抗原包被浓度、包被条件、封闭液等,比较ELISA反应效果。[结果]最佳抗原包被浓度为5.0μg/ml;最佳包被条件为,37℃包被1 h、4℃过夜;最佳封闭液为5%BSA;HRP-羊抗犬IgG的最佳工作浓度为1∶1 600。[结论]建立了检测犬传染性肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。
关键词
犬传染性肝炎病毒
Ⅸ蛋白
间接ELISA
Keywords
cav-ⅰ
Protein Ⅸ
Indirect ELISA
分类号
S858.292 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
犬细小病毒、犬腺病毒Ⅰ型和犬腺病毒Ⅱ型三联PCR诊断方法的建立
被引量:
2
3
作者
于永乐
王吉贵
苏俊
杨双双
刘莹
李沛然
李兆达
刘维全
机构
青岛农业大学动物医学院
中国农业大学
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第12期2340-2344,共5页
基金
“十三五”国家重点研发计划资助项目(2016YFD0501001)
青岛农业大学高层次人才科研基金资助项目(1120015/663)。
文摘
旨在建立可同时检测犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)、犬腺病毒I型(canine adenovirus typeⅠ,CAV-Ⅰ)和犬腺病毒Ⅱ型(canine adenovirus typeⅡ,CAV-Ⅱ)的PCR诊断方法,分别将3种病毒基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5.0计算机软件设计并合成了2对特异性扩增引物,目的片段大小分别为670 bp(CPV)、497 bp(CAV-Ⅰ)和1019 bp(CAV-Ⅱ)。分别提取CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ细胞培养物的DNA,进行三联PCR扩增试验。结果表明,所建立的单项PCR及二联PCR扩增良好,其产物经测序比对与引物扩增序列完全一致。在此基础上,优化三联PCR扩增试验条件,成功建立了可同时检测CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的三联PCR诊断方法。并对其特异性和灵敏度进行检测,三联PCR最低检测限度为0.16 pg总DNA,而对犬副流感病毒和犬瘟热病毒的PCR检测结果均为阴性。对送检的20份病料进行检测,结果显示15份为CPV阳性,5份为CAV-Ⅰ阳性,1份为CAV-Ⅱ阳性。
关键词
犬细小病毒
犬腺病毒
ⅰ
型
犬腺病毒Ⅱ型
三联PCR
Keywords
canine parvovirus(CPV)
canine adenovirus type
ⅰ
(
cav-ⅰ
)
canine adenovirus typeⅡ(
cav-
Ⅱ)
triple PCR
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因重组犬2型腺病毒的构建
张秀芹
夏咸柱
卫广森
常惠芸
高玉伟
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
下载PDF
职称材料
2
重组Ⅸ蛋白检测犬传染性肝炎病毒抗体间接ELISA方法的建立
张洋
许澄
刘燕玲
刘殿峰
任文陟
袁宝
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2010
0
下载PDF
职称材料
3
犬细小病毒、犬腺病毒Ⅰ型和犬腺病毒Ⅱ型三联PCR诊断方法的建立
于永乐
王吉贵
苏俊
杨双双
刘莹
李沛然
李兆达
刘维全
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
2
原文传递
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