花生CAX相互作用蛋白4(CXIP4)基因克隆表达分析及载体构建

钙离子是细胞信号传导中重要的第二信使。CAX interacting protein(CXIP)是一类能够激活Cation exchanger(CAX)的钙离子转运活性蛋白,在离子转运体系中起重要作用。本研究利用RACE方法获得花生CAX相互作用蛋白4(CXIP4)基因的cDNA和DNA全长序列。该基因cDNA序列的全长包括966bp的开放阅读框,编码321个氨基酸。DNA全长为966bp,不含有内含子序列。推测的蛋白质分子量为36706.24Da,等电点为9.62。使用荧光定量技术(qRT-PCR)分析了该基因在花生品种日花1号植株中的组织表达和青枯菌胁迫条件下的表达变化规律,并构建了该基因的过表达载体、反义表达载体以及原核表达载体,为进一步研究花生中该基因的功能及其在花生抗青枯病中的作用奠定基础。

慢性心力衰竭患者血清环状RNA同源域相互作用激酶3和转录因子GATA结合蛋白4与心室重构及心功能的相关性

目的探究慢性心力衰竭(CHF)患者血清环状RNA同源域相互作用激酶3(circHIPK3)和转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)与心室重构及心功能的相关性。方法选取2021年6月至2023年6月河南科技大学第一附属医院收治的152例慢性心力衰竭(CHF)患者为观察对象,作为CHF组,选取同期健康体检者110例,作为对照组,参照纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级标准将CHF患者分为Ⅰ~Ⅱ级(53例)、Ⅲ级(50例)、Ⅳ级(49例),采用实时荧光定量PCR法检测血清样本中circHIPK3表达水平,酶联免疫吸附法检测血清中GATA4蛋白水平,彩色多普勒超声心动图检测心室重构及心功能指标:左心室质量指数(LVMI)、左心室重构指数(LVRI)、左心室后壁厚度(LVPW)、左室舒张内径(LVEDD)、左心室短轴缩短率(LVFS)、心输出量(CO)、左心室射血分数(LVEF),多因素logistic回归分析CHF患者心功能分级的影响因素,Pearson法分析CHF患者血清circHIPK3、GATA4与LVMI、LVRI、LVPW、LVEDD、LVFS、CO、LVEF的相关性。结果与对照组比较,CHF患者血清中circHIPK3[(1.14±0.25)比(1.89±0.59)]、GATA4[(17.26±2.52)pg/ml比(26.94±4.24)pg/ml]水平显著升高,差异存在统计学意义(t=12.538、21.363;P<0.05),circHIPK3、GATA4水平随心功能分级的增加而升高。circHIPK3、GATA4、LVMI是心功能分级为Ⅲ~Ⅳ级的独立危险因素,CO、LVEF是保护因素(P<0.05)。CHF患者血清中circHIPK3、GATA4水平与LVMI、LVPW、LVEDD呈正相关,与LVRI、LVFS、CO、LVEF呈负相关(P<0.05);CHF患者血清中circHIPK3与GATA4呈正相关(P<0.05)。结论circHIPK3、GATA4在CHF患者血清中呈现高表达,与心室重构、心功能指标存在一定关联性,可能对该病的诊治、预后评估有重要参考价值。

猪瘟病毒非结构蛋白NS4B与宿主蛋白相互作用的研究进展

猪瘟病毒(CSFV)是一种可感染猪只并引起典型或慢性猪瘟(CSF)的单链RNA包膜病毒,严重影响动物的健康和养猪业的经济发展。CSFV自身编码的结构蛋白和非结构蛋白可与宿主蛋白相互作用,促进病毒自身的复制、翻译和增殖,并影响病毒毒力和免疫反应等。CSFV的非结构蛋白NS4B在病毒生命周期中发挥重要作用,其自身结构上含有多种特定区域靶点,可与多种蛋白发生相互作用;其作为CSFV复制体碳价结构最重要的组成部分,还可被非结构蛋白NS3切割,在细胞内与CSFV自身蛋白或其他宿主蛋白,如核糖体蛋白侧柄亚基P1(RPLP1)、铁蛋白重链(FHC)、Rab蛋白22a(Rab22a)、脂肪酸合成酶(FASN)、线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)、肿瘤易感基因101(Tsg101)蛋白和猪指环蛋白114(pRNF114)等相互作用。本文对CSFV非结构蛋白NS4B的结构功能以及与宿主蛋白发生相互作用的研究进展进行概述,以期为CSFV致病机理研究和感染防控提供理论帮助。

Eph受体相互作用蛋白B2-肝细胞激酶B4信号通路在正畸牙移动压力侧牙周改建中的作用

目的 探讨Eph受体相互作用蛋白B2(Ephrin B2)-肝细胞激酶B4(EphB4)信号通路在正畸牙移动(OTM)压力侧牙周改建中的作用。方法 36只大鼠分为对照组、OTM组和EphB4抑制剂(NVP-BHG712)组各12只。对照组应用相同未激活的正畸矫治器,OTM组和NVP-BHG712组建立OTM模型。NVP-BHG712组从应用正畸螺旋弹簧的第1天开始在左上颌第一磨牙附近牙周组织的颊舌侧皮下注射NVP-BHG712,连续治疗14天;对照组和OTM组只接受载体(0.1%乙酸)。比较三组OTM距离和骨密度、牙周膜结构、牙周组织炎症相关基因白细胞介素(IL)-1、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA表达。结果 与第0 d比较,OTM过程中第4、7、14 d时第一磨牙压力侧EphrinB2和EphB4蛋白表达增加,并在第7 d时达到峰值。与OTM组比较,NVP-BHG712组第一磨牙和第二磨牙的距离较低,骨体积/组织体积比值、骨密度、骨小梁数、骨小梁间隙较高,骨小梁厚度显著降低(P<0.05)。OTM组IL-1、IL-6和TNF-α的表达显著高于NVP-BHG712组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EphrinB2-EphB4信号抑制可以减少骨密度的下降,抑制炎症因子的表达,并在OTM期间排列牙周韧带,为临床正畸治疗提供了新的途径。

艾多沙班药代动力学相互作用研究进展

目的阐明艾多沙班药代动力学相互作用(PK-DDI)的机制和剂量调整意见,为临床合理联合用药提供参考。方法检索PubMed、Web of Science、中国知网、万方数据、维普网中艾多沙班的药物相互作用(DDIs)文献,结合2021年欧洲心律协会指南、美国食品药品监督管理局(FDA)说明书、欧盟产品特性概要(SmPC)和Lexicomp数据库,总结不同种类药物与艾多沙班的PK-DDI机制、临床证据以及推荐剂量调整方法。结果共涉及17类69种药品,其中无需调整剂量药品24种和需要禁用、慎用或者需要调整剂量药品45种。结论艾多沙班PK-DDI涉及多种药品,机制主要与CYP3A4和P-糖蛋白抑制剂/诱导剂相关,但是目前PK数据缺乏。此外患者的个体特征和疾病状态也会对艾多沙班的体内过程产生影响,目前对于多因素的研究较欠缺,需进一步研究为临床合理用药提供证据。

免疫共沉淀结合质谱分析筛选HMGB4相互作用蛋白

为揭示HMGB4在精子发生过程中所起的作用,采用免疫共沉淀技术富集NTera-2细胞中的HMGB4结合蛋白.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离,从胶中切取HMGB4结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)分析,得到相应的肽序列标签(peptide sequence tags,PST).通过搜索数据库在NTera-2细胞系中鉴定到5个HMGB4相互作用蛋白,分别是Pdha1、Keratin 6B、Keratin 5、Actb Actin cytoplasmic 1、RPL18.为进一步研究HMGB4在精子发生机制中的生理功能提供了基础.

5,7-二羟基-4'-甲氧基二氢黄酮与牛血清白蛋白的相互作用研究

应用荧光光谱、紫外吸收光谱和核磁共振波谱研究了5,7-二羟基-4'-甲氧基二氢黄酮(ISO)与牛血清白蛋白(BSA)分子间的相互作用.研究表明:ISO对BSA内源性荧光的猝灭机制属于ISO和BSA形成化合物所引起的静态猝灭;二者的结合常数为7.41×1011L/mol,结合位点数为1.98.ISO与BSA作用的活性部位为其分子内的7-OH和5-OH,且7-OH活性强于5-OH,并且随着ISO浓度增大,BSA的构象发生了变化.

4',5,7-三羟基二氢黄酮与人血清白蛋白相互作用的光谱学研究

应用紫外吸收光谱、荧光光谱和红外光谱等方法对人血清白蛋白(HSA)与4',5,7-三羟基二氢黄酮(naringenin,NAR)相互作用的机理进行了研究.紫外光谱显示,在生理pH下NAR分子中A环7位的酚羟基发生部分解离,7位酚羟基的解离使A环与B环上羰基形成的共轭体系的紫外吸收峰发生明显红移;药物与蛋白质的相互作用使该谱带发生了进一步的红移,说明该共轭体系参与了与蛋白质的相互作用.在药物与蛋白质浓度比(cNAR/cHSA)为0.1～10的范围内,NAR在HSA上只有一个结合位点(可能位于site I),结合常数为1.27×105L·mol^(-1)(n=5,RSD小于5%).研究了不同pH值条件下药物对蛋白质荧光猝灭的影响,发现药物分子中的没有解离的活性基团在结合过程中发挥着主导作用.在缓冲水溶液和重水溶液中分别测定了与药物作用前后蛋白质二级结构的变化.随着药物浓度的增加,NAR和HSA之间的相互作用使HSA的α-螺旋结构的含量明显降低,而β-折叠和β-转角结构的含量增加,无轨结构在药物浓度较高时也有少量的增加.结合紫外吸收光谱、荧光光谱和红外光谱结果,探讨了HSA与NAR相互作用的模式.

流感病毒PA蛋白与宿主SSR4蛋白的相互作用研究

PA蛋白是流感病毒聚合酶复合体的重要组成部分,在病毒基因组的转录和复制过程中发挥重要功能,而流感病毒在宿主细胞内的有效复制离不开大量宿主因子的协助。本研究团队前期利用酵母双杂交(Y2H)系统从人源cDNA文库中筛选到大量与流感病毒PA蛋白可能存在相互作用的宿主因子,其中之一为Signal sequence receptor subunit 4(SSR4)。为研究流感病毒PA蛋白与宿主蛋白SSR4的相互作用,本研究采用酵母回交试验验证二者之间是否存在相互作用,结果显示PA蛋白与SSR4之间存在相互作用;在真核细胞中利用免疫共沉淀(Co-IP)试验检测,结果进一步证实了PA蛋白与SSR4蛋白之间的相互作用。利用慢病毒包装系统构建SSR4蛋白的过表达细胞系,并感染病毒后进行噬斑滴定,结果显示SSR4过表达可以抑制流感病毒的复制。瞬时转染过表达SSR4后再转染流感病毒聚合酶复合体表达质粒及荧光素酶报告质粒,利用双荧光素酶报告系统检测SSR4蛋白对聚合酶活性的影响,结果显示SSR4过表达后可以显著抑制流感病毒的聚合酶活性。本研究首次证实SSR4可以抑制流感病毒复制,并可使流感病毒RNP聚合酶活性显著降低,上述结果进一步完善了PA蛋白与宿主因子的互作网络,丰富了对宿主因子参与流感病毒复制周期的认识。

含喹唑啉酮的4-(4-氟苯基)哌嗪二硫代甲酸酯与牛血清白蛋白相互作用的荧光光谱研究

用荧光光谱法研究了具有抑制人肿瘤细胞活性的含喹唑啉酮的4-(4-氟苯基)哌嗪二硫代甲酸酯与牛血清白蛋白的相互作用。结果表明:在生理条件下,它对牛血清白蛋白的荧光有较强的猝灭作用。根据猝灭结果,求得了不同温度下反应的结合位点数、结合常数及反应热力学参数,并据此确定了它们相互作用的主要形式。

新试剂N-(4-乙氧苯基)-N′-(4-安替吡啉基)硫脲与蛋白质相互作用的机理研究

利用荧光光谱法研究了N-(4-乙氧苯基)-N′-(4-安替吡啉基)硫脲与血清白蛋白的作用机理,根据荧光猝灭效应求得了硫脲与血清白蛋白的结合常数,根据荧光非辐射能量转移理论和热力学参数确定了它们之间的主要作用力类型为疏水作用力.

人蛋白酶体β亚基4型(PSMB4)与BcL-2家族中促凋亡蛋白分子Bim的相互作用

目的:探讨人蛋白酶体β亚基4型(PSMB4)与Bcl-2家族中的促凋亡蛋白分子Bim之间的相互作用。方法:借助PlexA-bimL技术从人胎脑文库筛选PSMB4,借助显微共聚焦技术探讨PSMB4与Bim相互作用的亚细胞定位,应用免疫共沉淀技术探讨PSMB4与Bim的相互作用。结果:PSMB4与Bim存在于同一细胞中,PSMB4和Bim在空间上存在相互作用。结论:PSMB4和Bim有可能存在空间位置上的共定位;PSMB4在细胞内能够与Bim发生相互作用。

SARS冠状病毒N蛋白和CYP4F3的相互作用

目的:研究SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白与CYP4F3的相互作用。方法:应用免疫共沉淀、GST-pulldown、BIACORE实验验证SARS-CoVN蛋白与CYP4F3的相互作用。结果:SARS-CoVN蛋白与CYP4F3能够相互作用,BIA-CORE实验证实CYP4F3与SARS-CoVN蛋白的亲和常数为KD=4.3×10-11。结论:SARS-CoVN蛋白与CYP4F3在细胞内、外均能形成复合物,这为进一步探讨SARS-CoVN蛋白在SARS致病机理中的作用奠定了基础。

金属离子对4-氨基安替比林与牛血清白蛋白相互作用的影响

采用荧光法研究了金属离子Ca^(2+)、Zn^(2+)和Mg^(2+)存在下4-氨基安替比林(4-AAP)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.结果表明,金属离子存在时,4-AAP对BSA的猝灭常数减小,但猝灭机制仍旧为静态猝灭,4-AAP与BSA之间的结合常数(KA)及结合位点数(n)均增大,分析认为,金属离子在二者的结合作用中起了"离子架桥"的作用.

荧光光谱法研究一种噻吩并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮衍生物与牛血清白蛋白的相互作用

用荧光光谱法研究了在生理条件下,3-对氯苯基-2-(4-叔丁基苯氧基)-3'-氧环己烷并噻吩并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(PTP)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。实验表明,PTP主要以静态猝灭方式使BSA荧光强度显著降低。计算了不同温度下二者的结合常数和结合位点数,并根据热力学参数确定了PTP与BSA之间的作用力主要为氢键或范德华力。根据Frster非辐射能量转移机理,测定了PTP与BSA相互结合时的作用距离,并用同步荧光技术讨论了其衍生物对BSA构象的影响。

6-甲基-4-(4-甲氧酰基苯基)-5-甲氧羰基-3,4-二氢嘧啶-2-酮的合成及与牛血清白蛋白的相互作用

合成并表征了6-甲基-4-(4-甲氧酰基苯基)-5-甲氧羰基-3,4-二氢嘧啶-2-酮,利用荧光光谱法和紫外光谱法研究了该化合物与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。结果表明,化合物对BSA内源荧光的猝灭为静态猝灭;化合物与BSA的结合常数(Ka)和结合位点数(n)在298 K时分别是7.043 7×102L/mol和0.970 3,化合物与BSA以接近1∶1(物质的量比)的比例生成基态复合物;热力学数据表明化合物与BSA主要以疏水作用力相结合(ΔH>0,ΔS>0,ΔG<0);结合距离(r)为3.49 nm,表明化合物与BSA分子之间发生了非辐射能量转移。

2,4-二氯苯酚与人血清白蛋白的相互作用研究

通过2,4-二氯苯酚与人血清白蛋白结合反应的光谱学特征,探讨2,4-二氯苯酚与人血清白蛋白的结合反应机制;应用荧光光谱法和吸收光谱法,根据荧光猝灭数据,由Stern-Volmer方程和采用lg[(F0-F)/F]对lg[Q]作图,进行一元线性回归处理求出2,4-DCP与HSA的猝灭常数(Kq)、结合常数(Ksv) 和结合位点数(n)及反应热力学参数;荧光静态猝灭常数Kq=3.713×1013L·mol-1·s-1,结合常数为 2.743×106L/mol、结合位点数为n=1。

1-苯基-3-甲基-4-苯甲酰吡唑啉酮-5-苯甲酰肼腙的Pd(Ⅱ)Pt(Ⅱ)配合物与牛血清白蛋白的相互作用

目的合成1-苯基-3-甲基-4-苯甲酰吡唑啉酮-5-苯甲酰肼腙(HL)的Pd(Ⅱ)、Pt(Ⅱ)配合物PDL2和PtL2,研究其对牛血清白蛋白(BSA)的影响。方法利用紫外吸收光谱和静态荧光光谱定性讨论了HL以及PDL2和PtL2对BSA构象的影响。结果 HL以及PDL2和PtL2以静态猝灭的方式猝灭了BSA的内源荧光,并计算出了不同温度下这3种化合物与BSA的键合常数(Ka)以及热力学参数焓变(ΔH)及熵变(ΔS)。结论 HL和PDL2与BSA的作用力主要是静电相互作用,而对于PtL2,除了静电相互作用外还包括疏水相互作用。

钾离子通道相互作用蛋白与Kv4

钾离子通道为心肌复极的主要离子通道,其中构成Ito的Kv4主要存在于左心室外膜下心肌。但体外表达研究表明,Kv4通道电流与体内存在的Ito性质并不一致,这表明还存在其他一些辅助亚单位与Kv4共同构成Ito,其中一类最重要的β亚单位为钾离子相互作用蛋白(KChIPs)。KChIPs为一类钙离子结合蛋白,现已发现4种KChIPs基因。KChIPs与Kv4在体外共同表达时,KChIPs可增加Kv4在细胞膜上的表达,减慢失活以及加速复活,这样使产生的电流接近于体内存在的心室Ito。

CCCTC-结合因子与核周蛋白α4存在分子间相互作用并调控其基因表达

目的:研究CCCTC-结合因子(CTCF)是否与核周蛋白α4(KPNA4)有蛋白间相互作用并调控其表达。方法:用GSTpull-down实验研究CTCF是否与KPNA4存在蛋白间相互作用;用逆转录半定量PCR和免疫印迹检测CTCF敲降对KPNA4基因表达的影响。结果:GSTpull-down实验表明CTCF与KPNA4之间存在相互作用;当CTCF敲降时,KPNA4基因的表达随之下降。结论:CTCF与KPNA4之间存在相互作用并调控其基因表达。