不同拷贝数CArG/5HRE+HSV-TK系统辅助伽玛刀杀伤C6胶质瘤的初步研究

目的研究不同拷贝数CArG/5HRE+HSV-TK系统辅助伽玛刀杀伤C6胶质瘤效果,寻求伽玛刀条件下对胶质瘤杀伤更有效的适宜拷贝数CArG/5HRE+HSV-TK系统。方法在Wistar大鼠颅内C6胶质瘤模型的基础上,构建不同拷贝数CArG/5HRE+HSV-TK质粒(空质粒转染+伽玛刀照射组、HSV-TK+伽玛刀照射组、4CArG/5HRE启动子+伽玛刀照射组、9CArG/5HRE启动子+伽玛刀照射组、12CArG/5HRE启动子+伽玛刀照射组),通过脂质体转染到大鼠颅内胶质瘤组织中,对瘤组织伽玛刀放射外科治疗后取大鼠肿瘤组织。通过对瘤组织常规病理、瘤体细胞凋亡、HSV-TK mRNA及蛋白表达的观察,确定不同拷贝数CArG/5HRE+HSV-TK系统辅助伽玛刀诱导HSV-TK表达及对C6胶质瘤杀伤效果。结果各组肿瘤细胞均可见凋亡、破坏,CArG/HRE双启动子+伽马刀照射组更为明显(P<0.05),尤以9CArG/5HRE启动子+伽马刀照射组最为突出,凋亡率为(0.71±0.12)%(P<0.05);CArG/HRE双启动子+伽马刀照射组中HSV-TK mRNA及蛋白表达较无启动子组明显增加(P<0.05),9CArG/5HRE启动子+伽马刀照射组最为明显,HSV-TK mRNA的相对表达量为(0.84±0.09,P<0.05)。结论在SRS治疗条件下,CArG/HRE双启动子能促进目的基因HSV-TK的表达,增加对C6胶质瘤细胞的杀伤,其中,9CArG/5HRE双启动子的作用最明显。

CArG调控元件辐射诱导活性的研究

目的构建含有人工合成CArG调控元件的荧光素酶报告基因重组质粒,研究该元件在多种肿瘤细胞中不同剂量放射线照射下的放射诱导活性。方法将含有9个串联的CCATATAAGG结构的CArG增强子与CMVIEbasalgenepromoter构成的嵌合调控元件插入到pGL3Basic质粒,构建荧光素酶报告质粒。利用脂质体将该报告质粒瞬时转染肿瘤细胞株HeLa、A549、HepG2,给予不同剂量137Csγ射线照射,36h后检测荧光素酶活性,观察该调控序列的放射诱导活性。结果该CArG调控元件在低剂量放射线的诱导下能明显增强下游基因的表达,在3Gy的γ射线照射下诱导活性最强。结论人工合成的CArG调控元件在低剂量的放射线作用下能有效诱导下游基因的表达,在肿瘤的放射-基因治疗中具有较强的应用潜力。

基于E-CARGO模型的共乘出行匹配建模与优化方法

共乘出行应用系统通过提高汽车可用座位容量利用率来减少交通拥堵、缓解停车位紧张,提高社会效益和环境效益。司机和乘客的实时匹配和优化技术是共乘系统的核心内容。基于角色的协同(RBC)是一种用于促进组织结构、提供有序系统行为和协调系统内活动的新方法。为了减少乘客和司机的动态实时匹配时间、提高匹配效率,提出结合RBC和环境-类、代理、角色、群组和对象(E-CARGO)模型形式化共乘问题的方法。在资源容量约束和利润收入给定的情况下,对共乘匹配问题进行建模和仿真实验,提高可用座位容量利用率,实现平台收益最大化,资源匹配合理化。实验结果表明,基于E-CARGO模型的形式化方法可以应用于共乘出行匹配问题建模,最优匹配矩阵和时间可以采用Kuhn-Munkres(K-M)算法和Java中的优化软件包(ILOG)解决方案获得。与ILOG软件包算法相比,K-M算法所用平均时间至少减少了21%;当代理规模大于一定数值(大于600)时,算法时间开销急剧增大。

伽马射线对重组质粒(CArG)_6-hTERTp-SEA-GPI在人肿瘤A549细胞和成纤维细胞WI-38中的SEA表达的影响

目的:观察γ-射线对重组质粒(CArG)6-hTERTp-SEA-GPI在人肿瘤A549细胞和人正常细胞WI-38中的SEA表达的影响。方法:重组质粒(CArG)6-hTERTp-SEA-GPI分别转染A549和WI-38细胞,转染后12h2Gyγ-射线照射肿瘤细胞和正常细胞,转染后24h后采用RT-PCR法检测SEA mRNA的表达,转染后48h采用Western blot法检测SEA蛋白的表达。结果:(CArG)6-hTERTp-SEA-GPI能够在肿瘤细胞A549细胞中表达SEA,正常细胞WI-38细胞中不能表达SEA;2Gyγ-射线可以诱导转染(CArG)6-hTERTp-SEA-GPI质粒的A549细胞SEA mRNA和蛋白的表达,表达量分别增加115.4%和24.2%。结论:重组质粒(CArG)6-hTERTp-SEAGPI能够在肿瘤细胞A549中选择性表达SEA,且2Gyγ-射线可以增强SEA的表达水平。

E1A激活基因阻遏子过表达诱导体外培养大鼠平滑肌细胞分化

为探讨E1A激活基因阻遏子蛋白 (CREG)对血管平滑肌细胞表型转换的调控机制 ,应用pRC/CMV hCREG真核表达载体转染体外培养的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMCs) ,观察了转染前后细胞的表型改变 .结果发现 ,pRC/CMV hCREG质粒转染后 ,大鼠平滑肌细胞增殖受抑 ,细胞分化标志蛋白SMα actin表达显著增加 .免疫共沉淀分析发现 ,CREG与血清反应因子 (SRF)发生相互作用形成复合体 ,在CREG基因过表达时 ,与CREG结合的SRF蛋白增加 .凝胶迁移阻滞分析 (GSMA)和抗体凝胶迁移阻滞分析 (supershift)显示 ,过表达的CREG蛋白与SRF蛋白共同结合到SMα actin基因启动子区CArG位点上 ,可能参与SMα actin表达的调控 .构建SMα actinpromoter pCAT 3报告基因载体并与pRC/CMV hCREG质粒共转染VSMCs也证实 ,CREG蛋白过表达可增强SMα actin基因表达 .上述研究提示 。

APETALA1基因启动子的克隆与功能分析

为了分析AP1的表达调控模式,本研究克隆了拟南芥花异常株系AFDL的AP1启动子,启动子元件预测结果表明:AP1启动子中含有3个结合MADS调控因子的CArG box(从5'依次编号为CArG1、CArG2、CArG3),通过删减AP1启动子长度以及改变CArG box数量构建了5个GUS表达载体并转化野生型拟南芥。测序结果显示:AFDL的AP1启动子在核苷酸序列上与野生型拟南芥完全一致,这表明AP1在AFDL中的表达显著降低并不是启动子序列突变引起的;转基因植株的GUS表达模式说明了CArG1在花发育早期及后期激活基因的表达,CArG2在整个后期都对基因的表达有抑制作用,而CArG3在花发育初期就能抑制基因的表达,并且在中后期仍然保持了对下游基因的抑制作用,CArG box1、2、3对AP1的表达有显著但非决定性的影响。此外,还推测在AP1启动子0-3 579 bp范围之外存在影响AP1在第4轮花器官表达的调控元件,-3 579 bp至-1 752 bp区域可促进AP1的表达,而AP1启动子-1 759 bp至-1 359 bp区域除CArG2外的其它元件对调节其表达无明显作用。

血管平滑肌细胞移行及表型转换的分子机制

在动脉粥样硬化发生、发展的不同阶段,血管平滑肌细胞表型转换具有重要且可能是不同的病理生理学意义。文章复习了近年动脉粥样硬化病损内膜中血管平滑肌细胞来源、血管平滑肌细胞表型转换的分子机制及鉴别不同平滑肌细胞表型的标志性分子,以期为深入理解动脉粥样硬化的发病机制和相关研究提供有益认识。

岩石中爆炸冲击波能量分布规律初探

岩石中装药爆炸后产生的总的爆破能量可以分为爆炸冲击波能量和爆生气体膨胀能量两部分。本文就冲击波能量主要消耗在爆腔扩胀、形成裂隙和引起岩石弹性变形上作讨论。首先分析了冲击波作用岩石变形和破坏的特点，在此基础上探讨了炮孔柱状装药爆破时冲击波能量的分布规律以及各部分能量消耗量的求算方法。

电除尘技术研究中的几个问题的探讨

着重分析了静电收尘理论、静电收尘非稳态过程、电除尘器工作电压的确定及极板涂装技术等的研究现状 ,存在的问题 。

非平衡相变系统相关函数的临界奇异性

在非平衡相变系统规格化模型的基础上，考察了非平衡系统局域序参量涨落的相关函数．在非平衡相变临界点邻城内，导出了其空时相关函数的具体形式，并讨论了当系统趋于非平密相变临界点时，该相关函数的临界奇异行为，以及非平衡相变涨落的临界触发机理．由此看出相关函数的奇异性是导致非平衡系统临界巨涨落的根源．

城市自来水中临床抗生素耐药基因的分布研究

为了解长江流域中下游城市/县自来水中临床抗生素耐药基因(cARGs)分布和污染来源等相关问题,文章采用定量聚合酶链式反应技术,测定了长江中下游12个城市/县自来水中9种cARGs、整合子基因intl1和转座子基因tnpA的相对丰度,并对intl1、tnpA、环境因子与cARGs的相关性进行了分析。用微生物溯源(MST)方法确定了自来水中cARGs污染的潜在来源。结果表明:(1)在所有地区中,铜陵市自来水的总cARGs相对丰度最高(5.50×10^(-2)拷贝数/16S rRNA),南京市最低(1.56×10^(-3)拷贝数/16S rRNA);(2)除荆州市外的其他城市/县自来水中最多的cARGs种类是blaTEM,而最低的是黏菌素类;(3)tnpA的相对丰度均低于intl1,且与sul3的相对丰度呈显著正相关(p<0.05);(4)自来水中的总氮含量与blaCTX-M丰度呈显著负相关(p<0.05);(5)MST仅检测到反刍动物和非特异性物种的粪便污染,其中九江市的非特异性物种标记相对丰度最高(4.11×10^(-2)拷贝数/16S rRNA)。

高压静电除尘返还可控因素分析与时控方向

本文描述了高压静电除尘器工作时,由子除尘空间各物质因素组合的大幅度起伏变化所造成的故障现象.经过分析,提出了根除这一故障的实施方案.

9—10世纪东南亚海洋贸易沉船研究——以“黑石号”沉船和“井里汶”沉船为例

大约20年前,印度尼西亚爪哇海域打捞出两艘轰动世界的沉船,即著名的“黑石号”沉船和“井里汶”沉船。两艘相距不远的沉船亦具有相近的沉没年代,并且都出水了数量巨大且种类丰富的船货。这两艘9—10世纪的远洋商船既有相似之处,又有极大不同,主要反映在船体和船货构成方面。文章旨在通过对这两艘沉船内容的简单介绍和异同比较,探讨唐五代时期中国与海外进行的繁荣海上贸易活动。船货中大量的中国瓷器揭示了当时外销瓷生产数量和质量的盛况。受到商业利益驱使的阿拉伯人和东南亚人应为环印度洋—太平洋区际贸易的主导力量。

基于信度灰色马尔科夫模型的广东省货物周转量预测

在GM(1,1)对数据进行预测的基础上,采用一种信度马尔科夫链对结果进行修正,新方法引入了Dempster-Shafer(DS)证据理论来描述相对误差所处状态分类的不确定性,将相对误差的所有状态归为一个辨识框架,建立基本概率指派函数,然后对灰色马氏链的转移概率矩阵进行重新构造,最后根据近期相对误差所处的状态得到将来的状态,进而修正预测结果。最终结果表明,新方法克服了马尔科夫链划分状态的不确定性,提高了预测的准确性。

银行卡收单市场外包业务问题与政策建议

目前,银行卡收单机构广泛采用外包模式开展银行卡收单业务。在外包业务模式下,由于收单机构与外包商信息不对称,市场衍生出非实名商户、切机、信息二清、资金二清等诸多乱象。文章分析了上述乱象背后的内在原因,并针对性的提出市场治理建议。

芥菜开花整合子SOC1启动子的克隆及其与FLC、SVP蛋白互作的研究

为了深入研究芥菜开花整合子SOC1基因的表达调控机制,利用染色体步移法从芥菜‘QJ’中克隆了SOC1编码区上游782 bp的启动子,并构建SOC1基因启动子的酵母表达载体p Ab Ai-SOC1,与蛋白表达载体p GADT7-FLC、p GADT7-SVP共转化酵母Y1HGold菌株。酵母单杂交表明:芥菜FLC和SVP蛋白均能与SOC1的启动子相互作用。进一步分析发现:SOC1启动子含3个CAr G-box表达调控基序。分别亚克隆这3个基因片段(SOC1-1、SOC1-2和SOC1-3),并再次构建酵母重组质粒p Ab Ai-SOC1-1、pA b Ai-SOC1-2和p Ab Ai-SOC1-3,与p GADT7-FLC、p GADT7-SVP分别融合到Y1HGold菌株。融合菌株均能在相应SD/-Leu/Ab A培养基上生长,说明SOC1-1、SOC1-2和SOC1-3都能被芥菜FLC、SVP蛋白识别并结合。再次构建SOC1-1、SOC1-2、SOC1-3的CAr G-box删除突变体及A-T互换突变体,则均不能与FLC、SVP蛋白互作。由此说明:SOC1-1、SOC1-2和SOC1-3的3个CAr G-box基序确实能特异性识别FLC、SVP,发生DNA—蛋白相互作用。这为利用启动子调控SOC1基因的转录表达等深入研究奠定了理论基础。

放射诱导的肿瘤特异性嵌合启动子研究

目的将放射敏感性的CArG元件与肿瘤特异性的人端粒酶反转录酶（hTERT）基因启动子相结合，构建新的嵌合启动子。方法构建含不同CArG元件数量的嵌合hTERT启动子，在放射线诱导下（单剂量或分割照射），利用荧光素酶报告基因检测其在肿瘤细胞（HeLa、A549、MHCC97细胞）及正常细胞（hEL细胞）中的活性。结果包含6个CArG元件的hTERT嵌合启动子较含其他数量CArG的嵌合启动子显示了更好的放射诱导性，并在4～6Gy时达到顶峰，而构建的嵌合启动子在正常的hEL细胞中活性很低。在肿瘤细胞中，3次2Gy与单次6Gy剂量照射相比较，报告基因的表达相当。结论包含6个CArG元件的肿瘤特异性嵌合启动子具备良好的放射诱导性，这种嵌合的启动子系统具有肿瘤基因治疗的潜力。

小鼠中血清因子结合位点位置分布及保守性的生物信息学分析

目的:血清反应因子在与心血管相关的疾病基因调控方面的作用越来越重要。血清反应因子识别的结合位点CArG元件因其重要的基因调控作用近年来随之备受关。本研究目的是揭示血清因子结合位点的位置分布与功能的关系及CArG元件内部各个位点的保守性。方法:本研究应用生物信息学方法结合遗传学方法对小鼠中CArG元件的位置分布、位点替换率及GO分类进行深入研究。结果:结果表明,71%的功能CArG元件分布在转录起始位点上游,且距离转录起始位点越近,CArG元件的数量越多。保守性分析发掘出元件内部的替换冷点、热点及替换规律。GO分类结果显示,CArG依赖性基因多为信号转导和细胞骨架蛋白。结论:上述研究结果将为准确预测候选CArG元件提供重要理论基础,同时也将为更为深入阐述SRF的调控模式奠定基础。

血清反应因子结合位点在小鼠及人基因组中保守性、多样性及进化的研究(英文)

目的:CArG元件因其为血清反应因子识别的结合位点近年来备受关注。然而迄今为止尚未见到有关CArG元件的序列特征及进化模式的研究。方法:本研究应用生物信息学方法结合遗传学方法对小鼠及人基因组中CArG元件的位置分布序列类型、多样性及保守性进行深入研究。结果:多样性研究结果显示,CArG元件的序列在小鼠及人类基因组存在大量的不同类型。但是,小鼠和人基因组中CArG元件的主要类型又存在明显差异。同源性分析结果表明人类和小鼠中的CArG元件存在两种进化历程,一部分CArG元件拥有共同的祖先,一部分是在物种分化以后突变产生的。结论:上述研究结果将为更为深入阐述SRF的调控模式奠定理论基础,同时为更清楚的阐释CArG元件序列变化对下游基因的表达影响提供理论支持。