淋巴细胞胞浆分裂阻滞微核技术及其应用前景

淋巴细胞胞浆分裂阻滞微核法是检测人及动物细胞在Cyt-B作用后形成的双核CB细胞中的微核,它克服了常规培养微核法在细胞动力学上存在的问题,确保检测第一次分裂后细胞中的微核.该法比常规培养微核法准确、敏感,预计不久将有可能取代常规培养微核法.

不同浓度松胞素B对淋巴细胞双核及微核率的影响

本文用CB微核法观察不同浓度Cy^(t-B)对淋巴细胞双核比例的影响。在一定范围内双核细胞比例随Cy^(t-B)浓度增加而增加。用全血培养时,6ug/ml Cy^(t-B)是最适宜浓度。经1Gy^(60)Coγ线照射后加不同浓度Cy^(t-B)未见诱发微核。

CB诱导熊本牡蛎三倍体及其存活率与倍化率的变化关系

为诱导熊本牡蛎三倍体,研究了细胞松弛素B (CB)浓度、诱导起始时间、诱导持续时间等因素对卵裂率、D幼率、三倍体率的影响,并分析了幼虫、稚贝及成贝的存活率和三倍体率的变化特征。结果显示,CB浓度为0.5～0.6 mg/L,诱导起始时间为40%受精卵释放第一极体,诱导持续时间为20 min时可获得87%的三倍体率。卵裂率、D幼率、三倍体率的最大影响因素分别为CB浓度、诱导持续时间、诱导起始时间与诱导持续时间。三倍体率与卵裂率无显著负相关性,而与D幼率呈显著正相关。因此,减小CB浓度或诱导持续时间,可同时获得较高的三倍体率与幼虫产量。3～15日龄三倍体组与对照组的存活率分别由71.27%与96.09%降低至34.14%与58.80%,成贝期450日龄(9月)三倍体组与对照组的存活率分别为53.62%与44.67%。3～9日龄三倍体率从87%降低至77%,而90～450日龄三倍体率平均值为59.21%±4.99%,表明幼贝与成贝期三倍体率变化较小,三倍体率的维持与存活率无显著相关性。

细胞松弛素B诱导鲍异源三倍体

用细胞松弛素B（CB）处理受精卵（九孔鲍♀×盘鲍♂）,抑制第二极体释放,诱导异源三倍体.在水温24℃下,分别进行了不同起始处理时间（受精后5~25 min）、不同药物处理浓度（0.2~1.0 mg/L）和不同持续处理时间（5~15 min）的实验.结果表明：受精后10~15 min开始处理的效果较好,平均担轮幼虫成活率为52.07%,平均三倍体率为55.81%;最佳药物处理质量浓度为0.4 mg/L,最佳持续处理时间为10 min,担轮幼虫率为21.43%,异源三倍体率为50.96%;药物空白对照组1（九孔鲍♀×九孔鲍♂）担轮幼虫率为85.38%,二倍体率为95.42%;药物空白对照组2（九孔鲍♀×盘鲍♂）担轮幼虫率为54.37%,二倍体率为75.87%.综合考虑,鲍异源三倍体的适宜诱导条件为：在受精后13 min,即当40%~50%受精卵排出第一极体时,用0.4 mg/L的CB处理10 min.

^(60)Co γ射线照射离体人血后诱发的淋巴细胞微核率与剂量的效应关系

本文报道了^(60)Co γ射线照射人离体血后诱发的双核淋巴细胞微核效应的剂量关系结果表明,在各剂量组中的CB细胞微核细胞率、微核率与剂量的关系可拟合成线性平方模式y=aD+bD^2。

诱导异源三倍体鲍的初步研究

用细胞松弛素B(CB)处理九孔鲍♂×盘鲍♀受精卵,分别抑制其第一极体和第二极体、以及第二极体释放诱导异源三倍体。水温24℃,九孔鲍♂×盘鲍♀授精后10min,用浓度0.6～1.0mg/L的CB持续处理受精卵20～25min,抑制其第一极体的排放。而九孔鲍♂×盘鲍♀在受精后27min,当40%～50%受精卵排出第一极体时,用浓度0.6～1.0mg/L的CB持续处理受精卵10～15min,分别统计对照组和药物处理组的担轮幼虫率,并用倍体分析仪检测各组稚鲍的倍性。结果表明:对照组和药物处理组担轮幼虫的倍性较复杂,起始处理时间为10min,CB药物处理浓度为0.6mg/L,持续处理时间为25min,其三倍体率可达40.67%,担轮幼虫的孵化率为26.44%。起始处理时间为27min,CB药物处理浓度0.6mg/L,处理持续时间为10min,其三倍体率可达48.11%,担轮幼虫率的孵化率为29.86%。

醋酸铅致hprt基因位点突变的实验研究

目的了解醋酸铅对hprt基因位点的影响,以寻找铅致机体损伤的早期指标。方法采用多核细胞法,研究醋酸铅体外对人外周血淋巴细胞及体内对大鼠血淋巴细胞hprt基因位点的影响及突变频率。结果醋酸铅在体外实验中可诱发淋巴细胞hprt基因位点突变,且突变频率随着染毒浓度的增加而升高,突变频率Y(×10-3)与醋酸铅的浓度C(mg/kg或mg/ml)之间存在剂量-效应关系。体内实验中则是在一定范围内表现出突变频率随染毒剂量增加而增加。结论在该实验条件下,醋酸铅在体内外实验中均对血淋巴细胞hprt基因位点突变频率有影响,hprt基因突变频率检测有望作为铅接触的早期效应标志物,用于接触人群的流行病学调查中。

异藤黄酚对小鼠红白血病CB3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨异藤黄酚对小鼠红白血病CB3细胞增殖以及凋亡的影响。方法用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况。根据MTT结果,将给药后细胞分为低、中、高3个浓度实验组(2.5,5.0,和10.0μmol·L^(-1)异藤黄酚,处理48 h);未给药细胞作为空白组。用流式细胞术检测CB3细胞凋亡的情况,蛋白质印迹法检测异藤黄酚作用于细胞后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和胞活化的磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白表达水平。结果异藤黄酚可显著抑制小鼠红白血病CB3细胞的增殖,半数抑制浓度(IC_(50))为(8.19±0.63)μmol·L^(-1)。空白组和低、中、高3个浓度实验组的细胞凋亡率分别为(1.30±0.22)%,(1.80±0.23)%,(2.50±0.52)%和(64.50±3.35)%。给药12 h后,这4组的PARP蛋白相对表达量分别为1.00±0.08,0.86±0.02,0.68±0.12和0.57±0.11;这4组的p-ERK蛋白相对表达量分别为1.00±0.02,0.57±0.13,0.54±0.02和0.05±0.01。上述指标:高浓度实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论异藤黄酚可通过诱导CB3细胞发生凋亡,从而抑制细胞的增殖。其诱导CB3细胞凋亡可能与其调控PARP和p-ERK的表达有关。

人淋巴细胞胞浆分裂阻滞微核法的探讨

本文用健康人血对 CB 微核法进行了探讨,发现用全血、1ml 培养体系、准确滴加 Cyt-B 的方法,比由全血分离淋巴细胞的方法省时、省血,且细胞不易成堆,破坏小,不需二氧化碳孵箱设备。诱发大量双核 CB 细胞的最适浓度为6μg/ml,虽 Cyt-B 用量比文献报道的稍大,但节省了其它试剂,仍值得选择使用。

RANKL／RANK／OPG系统在类风湿性关节炎骨质疏松中的研究进展

由细胞核因子KB受体活化因子配体（RANKL）、细胞核因子KB受体活化因子（RANK）和护骨素（OPG）组成的RANKL／RANK／OPG系统是近些年来发现并且研究愈趋热门的一个在骨调节上发挥重要作用的系统。