Cbf-β在骨关节炎发病中的研究概况

骨关节炎(OA)是我国最常见的骨关节炎,是老年人活动能力受损的主要原因之一,占慢性中度至重度疼痛的三分之一以上。OA是一种累及关节及其周围组织的慢性疾病,主要导致关节软骨进行性损伤,进而导致软骨下骨和周围滑膜结构损伤。尽管受OA影响的人数逐年增多,但目前仍无法延缓OA的进展,主要治疗方案集中在缓解症状,关节置换术是最终结局。深入探讨分子靶点的作用在研究药物开发的过程中至关重要。特别是,Cbf-β作为一种与Runx2结合形成异质二聚体的共转录因子,不仅增强了Runx2与DNA的结合力,还通过阻止Runx2的泛素化来维持其稳定性,因此在软骨内骨化过程中的作用比膜内骨化更为显著。本文综述了与Cbf-β和骨关节炎发展相关的最新研究成果,并探讨了Cbf-β作为治疗目标的可能性。这些发现强调了深入理解分子机制对于开发新的治疗策略的重要性,并指出了Cbf-β在骨科疾病治疗领域内的潜在价值。

CBF-β辅助SIVagm Vif蛋白诱导限制因子APOBEC3G的降解

APOBEC3蛋白家族是一类重要的慢病毒复制的免疫限制因子。慢病毒编码的附属蛋白Vif可以与Cullin5-Elongin B/Elongin C形成E3泛素化连接酶复合物使APOBEC3G(A3G)聚泛素化和降解,从而抑制A3G对病毒的限制。CBF-β为RUNX家族转录辅助因子,可以调节Vif介导的A3G降解作用。为探索CBF-β对非洲绿猴免疫缺陷病毒Vif蛋白(SIVagm Vif)的调节机制以及对A3G降解的影响,本研究通过生化及病毒学方法对SIVagm和HIV-1编码的Vif蛋白与CBF-β作用进行了对比性研究。结果显示,SIVagm编码的Vif对A3G的降解同样需要CBF-β的辅助。当Vif(HIV-1/SIVagm)编码的第38位色氨酸突变成丝氨酸后,CBF-β辅助Vif调节A3G降解的功能显著降低。由此表明,第38位色氨酸对于不同慢病毒编码的Vif与CBF-β的相互作用具有重要作用。由此推测,CBF-β辅助Vif介导的降解A3G的作用在灵长类慢病毒中具有保守性。

在人类胰腺癌细胞BxPC3全基因组中受Notch-1胞内结构域和CBF-1转录共调控的靶基因特征分析

目的在人类胰腺癌细胞BxPC3全基因组水平上寻找受Notch-1胞内结构域和CBF-1共同转录调控的靶基因;分析它们的类型、功能和在基因组中的分布等特征值;并以此为基础预测Notch信号通路的潜在生物学功能和调控模式。方法染色质免疫共沉淀联合基于Illumina/Solexa平台的高通量测序。结果 1)Notch-1胞内结构域和CBF-1两组样本有效read数分别为14 287 722和14 289 280个,与人类参考基因组唯一匹配的read数分别为11 782 027和11 711 920个;2)两组样本的peak数分别为385和492个,peak区域分别为318 344 bp和383 768 bp,都占全基因组的约0.01%;3)两组样本的peak区域几乎集中于基因间区和内含子区,只有不到5%位于外显子区;4)两组样本的peak对应基因数分别为150和287个,其中共有基因93个;5)通过基因聚类分析和数据库比对可以查到这些基因的名称、分类、基本功能和在基因组中的位置等具体信息。结论在人类胰腺癌细胞BxPC3全基因组范围内找到了更多在转录水平上受CBF-1和Notch-1胞内结构域共同调控的未知靶基因;初步明确了它们的类型、分布和功能等特征值;这些数据可以为进一步分析Notch信号通路潜在的生物学功能和调控模式奠定基础。

多肽突变体Cbf-14-2抗青霉素耐药细菌的活性研究

本研究主要探讨了新型多肽突变体Cbf-14-2对携带NDM-1基因重组菌(E.coli BL21(DE3)-NDM-1)的抗菌活性及机制。实验采用肉汤倍比稀释活菌计数法测定多肽对E.coli BL21(DE3)-NDM-1重组菌的MIC/MBC和杀菌曲线,评价多肽的体外抗菌活性;采用重组菌腹腔感染法建立小鼠败血症模型,评价多肽的体内抗菌活性;通过Zeta电位分析和流式细胞术探讨Cbf-14-2抗耐药细菌感染的作用机制。结果表明,多肽Cbf-14-2对携带NDM-1基因的耐药细菌具有良好的抗菌活性(MIC=16μg/m L),能在2 h内快速杀灭细菌;同时,多肽能显著降低感染小鼠肝、脾、肺和肾脏等组织的细菌负载量,对细菌显示出强效清除能力,将小鼠存活率由10%提高至70%。这主要由于Cbf-14-2能与细菌细胞膜表面负电荷发生静电结合,增加对膜的穿透能力。因此,Cbf-14-2有望成为治疗NDM-1耐药细菌诱发感染的潜在抗菌剂。

液相色谱-质谱联用鉴定抗菌肽Cbf-14凝胶的有关物质

多肽Cbf-14是由14个氨基酸组成的新型抗菌肽。采用优化的反相高效液相色谱-电喷雾正离子化-四极杆飞行时间串联质谱(LC-ESI-QTOF/MS)检测方法,Agilent ZORBAX SB-Phenyl(150 mm×4.6 mm,3.5μm)色谱柱,以乙腈-20 mmol/L甲酸铵水溶液(甲酸调节pH为3.0)为流动相进行梯度洗脱,对Cbf-14凝胶中的有关物质进行了分离鉴定。在所建立的分析条件下,Cbf-14及其有关物质分离良好,检测并鉴定出Cbf-14凝胶及其强制降解试验样品中24个主要有关物质,其中5个为制剂生产工艺杂质,19个为降解产物,分析了有关物质的来源和多肽制剂的稳定性,为其生产工艺优化、贮存条件制定和质量控制提供了参考依据。

多肽Cbf-14的体外抗菌活性研究

多肽Cbf-14是由14个氨基酸组成的抗菌肽,该课题研究了其对临床常见的G+和G-细菌的抑菌活性。通过琼脂平板稀释法和微量肉汤稀释法测定了多肽Cbf-14对临床常见菌株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);通过改变接种量,培养基pH,研究不同条件对多肽Cbf-14抑菌活性的影响。体外抗菌活性实验结果表明,多肽Cbf-14对多种临床常见敏感和耐药细菌均有良好的抑菌活性,对部分耐药菌株的MIC为16μg/m L,且能在4~8 h内快速杀灭细菌,同时pH稳定性好;通过耐受诱导试验研究多肽Cbf-14是否容易诱导细菌耐药。结果表明,不同细菌在亚抑菌浓度的Cbf-14中连续诱导10代后,MIC值基本保持不变,说明Cbf-14不容易诱导细菌耐药;研究结果提示其可以作为临床抗耐药细菌感染的候选药物。