LncRNA CBR3-AS1调节miR-448/TFAM轴对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)CBR3-AS1对结直肠癌(CRC)细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法 收集济南市第五人民医院2021年1月至2022年6月获取的40对CRC组织和邻近癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人CRC组织、癌旁组织和CRC细胞系、正常结直肠上皮细胞中LncRNA CBR3-AS1、微小RNA-448(miR-448)及线粒体转录因子A(TFAM)mRNA表达。根据不同CRC细胞系中LncRNA CBR3-AS1的表达水平筛选后续实验使用的细胞系。验证miR-448与LncRNA CBR3-AS1、TFAM的靶向关系。在目标细胞中转染靶向LncRNA CBR3-AS1的小干扰RNA(si-CBR3-AS1)、miR-448抑制物(miR-448 inhibitor),采用qRT-PCR、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LncRNA CBR3-AS1、miR-448及TFAM mRNA和蛋白表达;采用CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验和Transwell实验分别检测细胞活力、凋亡率、迁移及侵袭能力。结果 CRC组织和细胞中LncRNA CBR3-AS1及TFAM mRNA呈高表达,miR-448呈低表达,且HCT116细胞中LncRNA CBR3-AS1的表达最高,故选择HCT116细胞进行后续靶向验证和转染实验。经验证,HCT116细胞中miR-448与LncRNA CBR3-AS1、TFAM均存在靶向关系。转染si-CBR3-AS1可降低HCT116细胞中LncRNA CBR3-AS1及TFAM mRNA和蛋白表达水平,同时降低细胞活力、划痕愈合率、迁移细胞数、侵袭细胞数,升高miR-448表达水平及凋亡率;转染si-CBR3-AS1基础上转染miR-448 inhibitor可减弱干扰LncRNA CBR3-AS1表达对HCT116细胞的影响。结论 干扰LncRNA CBR3-AS1可抑制CRC细胞的恶性生物学行为,其机制可能与靶向miR-448/TFAM轴有关。

长链非编码RNA CBR3-AS1在骨肉瘤中的表达及意义

目的:探讨长链非编码RNA CBR3-AS1(LncRNA CBR3-AS1)在骨肉瘤患者中的表达及意义。方法:回顾性收集2012年1月—2014年1月本院收治的66例骨肉瘤患者组织标本和临床资料,qRT-PCR法检测组织中LncRNA CBR3-AS1表达情况,并将患者分为高表达组和低表达组,卡方检验分析LncRNA CBR3-AS1表达与临床参数的关系,Kaplan-Meier法比较Lnc RNA CBR3-AS1的表达与总生存率的关系。将U-2 OS细胞系分成LncRNA CBR3-AS1沉默表达组(si-CBR3-AS1组)和阴性对照组(si-NC组),经LipofectamineTM3000分别转染LncRNA CBR3-AS1 siRNA和si-NC序列,MTT和集落形成试验测定细胞增殖,细胞迁移和侵袭试验测定细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术测定细胞凋亡。q RT-PCR和Western blot法检测羧基还原酶3(CBR3)的表达。结果:LncRNA CBR3-AS1在骨肉瘤组织和细胞系中高表达(P <0.001)。LncRNA CBR3-AS1高表达与Enneking分期(P <0.001)、远处转移(P=0.004)和组织学分级(P=0.036)显著相关;LncRNA CBR3-AS1高表达与骨肉瘤患者总生存率呈负相关(P <0.01),是骨肉瘤患者的不良预后因素(HR=1.558,95%CI:1.041~2.641,P=0.013)。si-CBR3-AS1组细胞增殖、集落形成能力、细胞迁移和侵袭能力显著低于si-NC组,si-CBR3-AS1组细胞凋亡率高于si-NC组。LncRNA CBR3-AS1和CBR3mRNA表达呈正相关(r=0.44,P=0.036),si-CBR3-AS1组CBR3 mRNA和蛋白表达量显著低于si-NC组(P <0.001)。结论:LncRNA CBR3-AS1在骨肉瘤中高表达,LncRNA CBR3-AS1下调表达抑制细胞增殖、迁移及侵袭,促进凋亡,是影响骨肉瘤预后的独立危险因素。

lncRNA CBR3-AS1靶向调控miR-5195-3p促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的探讨长链非编码RNA CBR3-AS1(lncRNA CBR3-AS1)是否通过靶向调控miR-5195-3p的表达从而促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法体外培养正常胃上皮细胞GES-1与胃癌细胞系HGC-27、NCI-N87、AGS,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CBR3-AS1、miR-5195-3p的表达量;分别将si-NC、si-CBR3-AS1、si-CBR3-AS1与anti-miR-NC、si-CBR3-AS1与anti-miR-5195-3p转染至AGS细胞;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证CBR3-AS1、miR-5195-3p的靶向关系;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达量。结果与GES-1比较,胃癌细胞系HGC-27、NCI-N87、AGS中CBR3-AS1的表达水平显著升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-CBR3-AS1组细胞活力显著降低(P<0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数显著减少(P<0.05),E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05),N-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实CBR3-AS1可靶向结合miR-5195-3p;与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+anti-miR-5195-3p组细胞活力显著升高(P<0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数显著增多(P<0.05),E-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05),N-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论CBR3-AS1可能通过抑制miR-5195-3p的表达从而促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭。

长链非编码RNA CBR3-AS1通过PI3K/AKT/mTOR/S6K通路介导白血病细胞对阿糖胞苷的耐药机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)CBR3-AS1通过PI3K/AKT/mTOR/S6K通路介导急性髓细胞白血病(AML)细胞对阿糖胞苷耐药的可能机制。方法在2个AML细胞株K562和HL-60中建立耐药模型,分别为K562-R和HL-60-R。逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测lncRNA CBR3-AS1在K562-R和HL-60-R中的表达情况。在K562和HL-60细胞株中,利用质粒过表达lncRNA CBR3-AS1;在K562-R和HL-60-R细胞株中,利用siRNA敲低lncRNA CBR3-AS1表达,并计算阿糖胞苷的半数抑制浓度(IC_(50))。蛋白印迹法检测PI3K/AKT/mTOR/S6K通路激活情况。结果相较于K562和HL-60细胞株,K562-R和HL-60-R细胞株中lncRNA CBR3-AS1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达lncRNA CBR3-AS1可提高阿糖胞苷IC_(50)超过1000μmol/L(P<0.05)。敲低lncRNA CBR3-AS1后,阿糖胞苷在耐药细胞株K562-R和HL-60-R中的IC_(50)分别降低到21.27μmol/L和12.10μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达lncRNA CBR3-AS1显著提高磷酸肌醇3激酶(PI3K)、AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、S6K蛋白的磷酸化水平(P<0.05);敲低lncRNA CBR3-AS1显著降低PI3K、AKT、mTOR、S6K蛋白的磷酸化水平(P<0.05)。结论lncRNA CBR3-AS1可能通过激活PI3K/AKT/mTOR/S6K通路介导AML细胞对阿糖胞苷的耐药。

LncRNA CBR3-AS1调节miR-409-3p/hnRNPA2B1轴对肝细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链RNA CBR3-AS1(LncRNA CBR3-AS1)靶向微小RNA-409-3p(miR-409-3p)/核不均一核糖核蛋白A2B1(hnRNPA2B1)轴对肝细胞癌(HCC)细胞恶性生物学行为的影响。方法qRT-PCR法分析肝癌组织中LncRNA CBR3-AS1和miR-409-3p表达水平。双荧光素酶检测LncRNA CBR3-AS1和miR-409-3p及hnRNPA2B1和miR-409-3p的靶向关系。将Hep G2细胞分为si-NC组、si-CBR3-AS1组、si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组、si-CBR3-AS1+anti-miR-409-3p组、miR-NC组、miR-409-3p mimics组、miR-409-3p mimics+pcDNA组、miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1组。平板克隆检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot分析法检测细胞核增殖抗原标记物(Ki67)、细胞周期负调控因子(P21)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9蛋白的表达变化。小鼠移植瘤实验检测LncRNA CBR3-AS1对肝癌肿瘤生长及miR-409-3p/hnRNPA2B1的影响。结果与癌旁组织比较,癌组织中LncRNA CBR3-AS1表达显著升高,miR-409-3p表达显著降低(P<0.05)。StarBase预测显示LncRNA CBR3-AS1与miR-409-3p有靶向结合位点。双荧光素酶实验显示,miR-409-3p mimics与LncRNA CBR3-AS1-WT共转染Hep G2细胞相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-CBR3-AS1组LncRNA CBR3-AS1表达明显下降,miR-409-3p表达明显上升(P<0.05);与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+anti-miR-409-3p组miR-409-3p表达明显下降(P<0.05)。与si-NC组比较,si-CBR3-AS1组Hep G2细胞集落形成数、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+anti-miR-409-3p组Hep G2细胞集落形成数、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著升高,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。生物信息学分析显示miR-409-3p与hnRNPA2B1有靶向结合位点。双荧光素酶实验显示,miR-409-3p mimics与hnRNPA2B1-WT共转染Hep G2细胞相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-409-3p mimics组miR-409-3p表达明显上升,hnRNPA2B1表达明显下降(P<0.05);与miR-409-3p mimics+pcDNA组比较,miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1组hnRNPA2B1表达明显上升(P<0.05),与miR-NC组比较,miR-409-3p mimics组细胞集落形成、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与miR-409-3p mimics+pcDNA组比较,miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1组细胞集落形成、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著升高,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,小鼠注射转染si-CBR3-AS1的细胞后,移植瘤体积生长缓慢。与si-NC组比较,si-CBR3-AS1组移植瘤中LncRNA CBR3-AS1表达水平下降,miR-409-3p表达水平升高(P<0.005)。免疫组化检测结果显示,si-CBR3-AS1组移植瘤中,hnRNPA2B1蛋白表达水平显著降低(P<0.005)。结论LncRNA CBR3-AS1在肝癌中表达升高,下调LncRNA CBR3-AS1的表达,可上调miR-409-3p表达,从而下调hnRNPA2B1表达,抑制肝癌细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞凋亡。

LncRNA CBR3-AS1在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

目的检测多发性骨髓瘤患者血清中长链非编码羰基还原酶3反义RNA1(LncRNA CBR3-AS1)的表达水平,并分析其临床意义。方法该研究纳入石家庄市人民医院2012年1月至2020年3月期间初诊的100例多发性骨髓瘤患者作为观察组,另纳入50名65岁以下的健康体检人员作为对照组。用RT-qPCR技术检测LncRNA CBR3-AS1在血清中的相对表达,分析血清LncRNA CBR3-AS1的表达水平与多发性骨髓瘤患者临床参数的关系;Kaplan-Meier(K-M)法生存曲线分析血清LncRNA CBR3-AS1表达水平与多发性骨髓瘤患者预后的关系;单因素、多因素Cox回归评估可能影响多发性骨髓瘤患者预后的因素。结果观察组血清中LncRNA CBR3-AS1的相对表达水平显著高于对照组(P<0.05);多发性骨髓瘤患者血清中LncRNA CBR3-AS1的相对表达水平与临床传统分期系统(D-S)分期、国际分期系统(ISS)分期有关(P<0.05);LncRNA CBR3-AS1低表达组患者的生存率(78.0%)明显高于LncRNACBR3-AS1高表达组的患者(58.0%)(χ2=5.370,P<0.05);单因素分析结果显示,临床D-S分期(HR=2.159;95%CI=1.323~3.524;P<0.05)和ISS分期(HR=1.746;95%CI=1.091~2.794;P<0.05)及血清LncRNA CBR3-AS1的表达(HR=1.975;95%CI=1.210~3.224;P<0.05)影响多发性骨髓瘤患者的预后,多因素COX回归分析结果表明临床D-S分期(HR=2.769;95%CI=1.315~5.832;P<0.05)、ISS分期(HR=2.495;95%CI=1.117~5.573;P<0.05)及血清LncRNA CBR3-AS1的表达(HR=3.214;95%CI=1.206~8.564;P<0.05)均可作为多发性骨髓瘤的独立影响因素。结论CBR3-AS1在多发性骨髓患者中高表达,并且可能与多发性骨髓瘤患者的预后有关。

lncRNA CBR3-AS1调节miR-145-5p/FSCN1轴对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

该文旨在探究长链非编码RNA CBR3-AS1(lncRNA CBR3-AS1)靶向微小RNA-145-5p(miR-145-5p)/肌动蛋白束蛋白1(FSCN1)轴对鼻咽癌(NPC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。qRTPCR法检测鼻咽癌组织中lncRNACBR3-AS1和miR-145-5p的表达水平。将鼻咽癌细胞CNE-1分为si-NC组、si-CBR3-AS1组、si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组、si-CBR3-AS1+anti-miR-145-5p组、miR-NC组、miR-145-5pmimics组、miR-145-5pmimics+pcDNA组、miR-145-5pmimics+FSCN1组。双荧光素酶实验检测lncRNA CBR3-AS1和miR-145-5p及FSCN1和miR-145-5p的靶向关系;MTT法检测细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡情况;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测细胞周期负调控因子(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白表达变化。建立小鼠移植瘤模型,探究lncRNA CBR3-AS1对鼻咽癌移植瘤生长及miR-145-5p/FSCN1轴的影响。在鼻咽癌组织中,lncRNA CBR3-AS1表达上调,miR-145-5p表达下调(P<0.05)。干扰lncRNA CBR3-AS1或上调miR-145-5p表达可以抑制鼻咽癌细胞的增殖与侵袭,促进鼻咽癌细胞凋亡(P<0.05)。下调miR-145-5p表达或上调FSCN1表达可以逆转干扰lncRNA CBR3-AS1表达或上调miR-145-5p表达对鼻咽癌细胞的增殖与侵袭的抑制作用(P<0.05)。小鼠移植瘤实验显示,下调lncRNA CBR3-AS1表达可上调miR-145-5p表达,从而下调FSCN1表达,抑制鼻咽癌移植瘤的生长(P<0.05)。lncRNA CBR3-AS1在鼻咽癌组织中上调表达,下调lncRNA CBR3-AS1表达可通过调控miR-145-5p/FSCN1轴抑制鼻咽癌细胞的增殖与侵袭,促进细胞凋亡。

lncRNA CBR3-AS1通过调控miR-145-5p影响胃癌HGC-27细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

为探讨lncRNA CBR3-AS1靶向miR-145-5p对胃癌细胞HGC-27恶性生物学行为的影响,该研究先用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测30例胃癌患者的癌组织及癌旁组织中CBR3-AS1和miR-145-5p的表达水平。然后,将CBR3-AS1干扰表达载体质粒、miR-145-5p模拟物、miR-145-5p抑制剂与CBR3-AS1干扰表达载体质粒转染至胃癌细胞HGC-27;用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡流程;Transwell法检测迁移和侵袭的细胞数;双荧光素酶报告实验检测CBR3-AS1和miR-145-5p的靶向关系。实验结果显示,胃癌组织中CBR3-AS1表达水平高于癌旁组织,而miR-145-5p表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。过表达miR-145-5p或抑制lncRNA CBR3-AS1表达可降低HGC-27细胞活性,减少迁移侵袭细胞数,而提高细胞凋亡率(P<0.05)。lncRNA CBR3-AS1靶向调控miR-145-5p;下调miR-145-5p逆转了抑制lncRNA CBR3-AS1表达对HGC-27细胞的作用。因此,抑制lncRNA CBR3-AS1表达可能通过上调miR-145-5p抑制HGC-27细胞的迁移侵袭、增殖,促进细胞凋亡。

CBR3 rs1048303位点基因多态性与2型糖尿病相关性及其对瑞格列奈疗效的影响

目的:分析CBR3 rs10483032基因多态性在中国淮海地区汉族2型糖尿病(T2DM)患者与正常人群中的分布特征,并探讨该遗传多态性与T2DM易感性的关联及其对瑞格列奈疗效的影响。方法:采用三维聚丙烯酰胺凝胶DNA芯片对180名T2DM患者和101名健康对照者进行CBR3 rs10483032基因型分析;81名初诊初治的T2DM患者口服瑞格列奈1 mg,tid,持续8周;服药前和服药第8周末收集静脉血标本,测定糖脂代谢相关指标。应用非参数检验、两样本t检验、配对t检验和χ~2检验进行统计学分析。结果:CBR3 rs10483032位点G等位基因频率在T2DM组和健康对照组间分别为17.50%和8.91%,差异具有显著性(P<0.01)。在中国淮海地区汉族T2DM患者中,CBR3 rs10483032位点AG/GG基因型患者的空腹血清胰岛素(FINS)、餐后血清胰岛素(PINS)、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显著高于AA基因型患者,差异有显著性(P<0.05)。瑞格列奈连续治疗8周后,2组基因型之间各临床指标无明显差异(P>0.05)。结论:CBR3 rs10483032位点基因型和等位基因频率在T2DM患者及健康人群中分布存在明显差异,与中国淮海地区汉族人群T2DM发生相关;CBR3 rs10483032位点G等位基因携带者可能通过影响FINS、PINS、HOMA-IR值增加患T2DM风险。瑞格列奈治疗后,CBR3 rs10483032位点多态性与瑞格列奈疗效无关。