GST-CBX2-1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

目的:构建GST标签的CBX2-1融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达,纯化出表达蛋白。方法:以CBX2-1全长为模板,构建3对引物,将CBX2-1PCR扩增成3段,通过XhoⅠ和NotⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-3载体中,并转化E.coli DH5ɑ,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序坚定正确后,转入E.coli BL21中,经IPTG大量诱导表达,SDSPAGE电泳和Western blot鉴定,运用GST pull down方法纯化3段蛋白。结果:酶切电泳及测序结果证明,原核表达质粒GST-CBX2-1 3个载体构建成功,用Western blot方法证实了GST-CBX2-1-1(1-288),GST-CBX2-1-2(259-600),GST-CBX2-1-3(601-1596)融合蛋白的表达,并成功纯化出3段蛋白。结论:成功构建了GST-CBX2-1-1,GST-CBX2-1-2,GST-CBX2-1-3原核表达载体,证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达与纯化,为进一步研究CBX2-1各结构域的功能提供了前提基础。

CBX7蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨CBX7蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义。方法收集江夏区人民医院病理科2009-2013年手术切除及活检的甲状腺乳头状癌标本40例和癌旁组织标本20例。采用免疫组织化学方法检测各组组织中CBX7蛋白的表达。并对各组免疫组织化学反应的平均光密度和平均阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验,检验水准α为0.05。结果 CBX7蛋白在癌旁组织中呈高表达,甲状腺乳头状癌中呈低表达,统计分析显示,CBX7蛋白在癌旁组织中的表达显著高于甲状腺乳头状癌(P<0.05)。结论 CBX7蛋白在甲状腺乳头状癌中呈低表达,可能与甲状腺乳头状癌的发生和发展密切相关。

CBX4与肿瘤的研究进展

多梳蛋白家族(polycomb group proteins,PcG)是通过修饰染色质对靶基因进行转录抑制的表观遗传调控复合物。研究发现CBX4能介导与疾病发生的相关信号通路,从而参与增殖、分化及预后等生物学过程。该文就CBX4与肿瘤发生的相关机制及潜在的临床应用价值等方面的研究作一综述。

CBX与肿瘤关系的研究进展

CBX蛋白(Chromobox protein homolog)是多梳蛋白家族(Polycomb group proteins,Pc G)的重要成员,多梳蛋白家族是一种表观遗传调控复合物,以聚合转录抑制复合体PRCs的形式存在,可以通过修饰染色质对靶基因进行转录抑制,在调控细胞分化、衰老、死亡和肿瘤发生、转移中发挥着重要作用。CBX蛋白家族是经典型PRC1的重要成员,包括5个成员,CBX2、CBX4、CBX6、CBX7和CBX8,越来越多的证据表明它在肿瘤发生、发展中扮演重要角色。本篇综述阐述了目前关于CBX家族成员在肿瘤中的研究进展。

CBX7在喉鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的观察喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中CBX7 mRNA和蛋白的表达,探讨其在LSCC发生发展中的作用。方法收集手术切除的LSCC组织及对应的癌旁正常黏膜组织60例,采用real-time PCR法检测CBX7 mRNA表达,Western blot法检测CBX7蛋白表达,分析CBX7 mRNA和蛋白表达与LSCC患者临床病理特征的关系。结果LSCC组织和癌旁正常黏膜组织中CBX7 mRNA的相对表达量分别为6.79±2.36、1.04±0.51,LSCC组织和癌旁正常黏膜组织中CBX7蛋白的相对表达量分别为0.51±0.16、0.15±0.08,LSCC组织中CBX7 mRNA和蛋白的表达均高于癌旁正常黏膜组织(P均<0.01)。临床分期高、合并颈部淋巴结转移、组织分化程度低者CBX7 mRNA和蛋白表达高于临床分期低、无颈部淋巴结转移、组织分化程度高者(P均<0.01)。结论 LSCC组织中CBX7表达升高,CBX7参与了肿瘤形成和转移过程,可能成为LSCC治疗的新靶点和预后评价指标。

CBX8在肿瘤学中的研究进展

在哺乳动物中,CBX蛋白是PRC1的核心组成成分,在多梳蛋白调控基因转录的过程中发挥着重要的作用,本文旨在综述CBX的同源蛋白CBX8的基础研究及在多种肿瘤研究过程中所获得的成果,探究其在未来研究的方向及可能的临床应用。

胃腺癌中CBX8的表达与临床病理特征及预后的关系

目的探讨CBX8在胃腺癌组织中的表达及其临床意义。方法收集119例原发性胃腺癌手术切除标本及癌旁正常组织,应用组织芯片、免疫组化PV 6000法检测胃腺癌组织、癌旁正常组织中CBX8的表达,并分析其表达与胃腺癌临床病理特征及生存预后的关系。结果 CBX8在胃腺癌、癌旁正常组织高表达率分别为46. 2%(55/119)、13. 4%(16/119),两者差异有统计学意义(χ2=30. 53,P <0. 01)。胃腺癌组织中CBX8表达与分化程度、临床分期及有无淋巴结转移相关(P <0. 05)。CBX8在低分化胃腺癌组中的高表达率低于中、高分化胃腺癌组,Ⅰ+Ⅱ期胃腺癌中CBX8的高表达率高于Ⅲ+Ⅳ期; CBX8高表达的胃腺癌患者转移率低。Cox回归分析表明,CBX8表达、临床分期、淋巴结转移是影响胃腺癌患者术后总生存期和无瘤生存期的独立预后因素(P <0. 05)。Kaplan-Meier分析显示,CBX8高表达的胃腺癌患者术后总生存期(P=0. 004)和无瘤生存期(P=0. 004)比低表达的患者长。结论 CBX8可能参与胃腺癌的发生、发展过程,是影响患者预后的独立因素之一,检测其表达对评价胃腺癌可能具有重要的临床价值,并有望成为胃腺癌靶向治疗的新靶点。

CBX家族成员作为独立指标对肺癌患者生存预后的评估价值

目的:探讨chromobox家族蛋白(CBX)在评估肺癌预后中的作用。方法:在ONCOMINE、UALCAN、Human Protein Atlas、Kaplan-Meier Plotter等数据库中对CBX mRNA和蛋白表达水平以及肺癌患者的生存期等数据进行生物信息学分析和整理。结果:8个CBX成员的表达均与肺癌患者的临床分期(AJCC-TNM分期)显著相关,其中CBX2、CBX4、CBX7和CBX8表达水平增高与肺癌患者总生存率(OS)显著相关,CBX2、CBX4和CBX8表达增高预示肺癌患者预后差,而CBX7表达水平升高预示肺癌患者预后良好。结论:CBX2、CBX4、CBX7和CBX8可以作为检测标志物,用于预测肺癌患者的生存期。

人源CBX7全长及部分片段的表达纯化及单体结构研究

本实验通过构建人源色素框同源蛋白7(chromobox protein homolog 7,CBX7)全长及部分片段的大肠杆菌pp SUMO表达载体,经过Ni柱亲和纯化、离子交换纯化以及分子筛纯化等方法,获得较纯的CBX7(Full-Length)蛋白及达到蛋白质结晶条件的CBX7(13-65aa)蛋白。证实了人源CBX7中间区域存在大量疏水基团,该区域对CBX7蛋白的稳定性有一定影响。人源CBX7蛋白质的纯化及疏水区域的发现为后续相关结构及功能的研究提供了途径。

过表达miR-515-5p的视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、侵袭能力变化及其机制

目的探讨过表达miR-515-5p对视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响及其机制。方法利用StarBase数据库进行生物信息学分析并预测miR-515-5p的靶基因为CBX4,并经双荧光素酶报告基因实验验证。选择视网膜母细胞瘤细胞系SO-RB50、Y79、HXO-RB-44细胞中miR-515-5p表达降低最明显的SO-RB50细胞进行实验,分为miR-515-5p NC组、miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组,分别转染miR-515-5p阴性对照、miR-515-5p mimics、miR-515-5p mimics+CBX4过表达载体、miR-515-5p mimics+CBX4空载体。采用实时荧光定量PCR法检测各组miR-515-5p及CBX4 mRNA表达,Western blotting法检测CBX4蛋白表达,CCK-8法检测转染12、24、48、72 h的细胞增殖能力(OD值),TUNEL法检测细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组miR-515-5p相对表达量均高于miR-515-5p NC组(P均<0.05)。miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组、miR-515-5p mimics+CBX4组CBX4 mRNA相对表达量及培养48、72 h的OD值均低于miR-515-5p NC组,且miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组降低更明显(P均<0.05)。培养12 h,各组细胞OD值比较P>0.05。培养24 h,miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组OD值均低于miR-515-5p NC组(P均<0.05)。与miR-515-5p NC组、miR-515-5p mimics+CBX4组比较,miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组细胞凋亡率均升高,CBX4蛋白相对表达量及侵袭细胞数均降低(P均<0.05)。结论过表达miR-515-5p能够抑制视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50的增殖、侵袭能力并促进其凋亡,其机制可能与抑制CBX4表达有关。

多梳蛋白CBX家族在哺乳动物中结构与功能多样性的研究进展

多梳蛋白家族(PcG)是一类重要的表观遗传调控因子,主要参与维持特定基因的转录沉默,与多种干细胞的干性维系、细胞分化、细胞周期的调控、细胞衰老、X染色体失活、基因印记、癌症的发生发展等一系列细胞生理及病理活动密切相关.PcG蛋白主要形成PRC1和PRC2两类多梳蛋白抑制复合体,它们彼此相互协同调控基因的表达.其中Chromobox同源蛋白即CBX蛋白作为PRC1复合体的核心组分协助招募并稳定PRC1到染色质的特定区域.在哺乳动物中,CBX蛋白家族包含5个成员,它们在结构和功能方面既有共性又有特性,本文主要就多梳蛋白CBX家族在哺乳动物中结构与功能多样性的研究进展作一综述.

CBX2蛋白在大肠癌中的表达及对CACO2细胞增殖、转移的作用机制

目的探究色素框同源蛋白2(chromobox protein homolog,CBX2)蛋白在大肠癌中的表达水平及对CACO2细胞增殖与转移的作用机制。方法对85例大肠癌患者及癌旁正常组织中的CBX2蛋白水平进行检测,并设置CACO2癌细胞组,CACO2-mimics组以及CACO2-inhibitor组,对各组细胞OD值、存活率水平、单克隆形成数目、细胞穿膜数、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1,cyc D1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平进行分析。结果大肠癌组CBX2蛋白水平显著高于癌旁正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。CBX2-mimics组OD值、存活率水平、克隆形成数目、细胞穿膜数、CBX2 mRNA、MMP-9、cyc D1、VEGF显著高于CBX2癌细胞组及CBX2-inhibitor组,差异有统计学意义(P<0.05),CBX2-inhibitor组OD值、存活率水平、克隆形成数目、细胞穿膜数、CBX2 mRNA、MMP-9、cyc D1、VEGF显著低于CBX2癌细胞组,差异有统计学意义(P<0.05);CBX2 mRNA与MMP-9、CycD1、VEGF蛋白呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大肠癌组织中CBX2蛋白表达水平升高,且CBX2高表达能促进CACO2细胞增殖、转移,其机制与CBX2诱导CACO2细胞高表达MMP-9、CycD1、VEGF有关。

miR-454-3p调控肺癌细胞活性及对CBX7蛋白表达的影响

目的探究miR-454-3p对肺癌细胞活性的调控及对CBX7蛋白表达的影响。方法体外培养正常肺上皮细胞293T细胞和人肺癌细胞A549细胞,把肺癌A549细胞分为三组,空白组、miR-NC组(转染miR-NC)和miR-454-3p组(转染miR-454-3p mimics),用CCK-8法检测三组细胞增殖情况;用Transwell检测三组细胞的侵袭数目,用流式细胞仪检测细胞的凋亡率;用蛋白质印迹对肺癌细胞中CBX7蛋白的表达进行检测并比较。结果和正常肺上皮293T细胞相比较,肺癌A549细胞中miR-454-3p mRNA表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。空白组和miR-NC组细胞中CBX7蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-454-3p组细胞中CBX7蛋白表达明显高于空白组及miR-NC组,差异有统计学意义(均P<0.05)。CCK-8结果发现,miR-454-3p组的A值明显低于空白组及miR-NC组(均P<0.05);空白组和miR-NC组肺癌细胞A值比较差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell小室实验结果表明,和空白组及miR-NC组相比较,miR-454-3p组细胞的侵袭数量明显减少,肺癌细胞的侵袭能力明显减弱(均P<0.05);空白组和miR-NC组肺癌细胞的侵袭能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪检测结果显示,空白组和miR-NC组细胞的凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05);和空白组及miR-NC组相比,miR-454-3p组肺癌细胞的凋亡率明显增加(均P<0.05)。结论在肺癌细胞中miR-454-3p呈低表达,过表达miR-454-3p能有效地调控肺癌细胞的生物活性,抑制肺癌细胞的增殖和侵袭,导致细胞的凋亡,其作用机制可能与miR-454-3p促进CBX7蛋白表达有关。

Epigenetic regulation by polycomb group complexes:focus on roles of CBX proteins

Polycomb group （PCG） complexes are epigenetic regulatory complexes that conduct transcriptional repression of target genes via modifying the chromatin. The two best characterized forms of PCG complexes, polycomb repressive complexes 1 and 2 （PRC1 and PRC2）, are required for maintaining the sternness of embryonic stem cells and many types of adult stem cells. The spectra of target genes for PRCs are dynamically changing with cell differentiation, which is essential for proper decisions on cell fate during developmental processes, Chromobox （CBX） family proteins are canonical components in PRC1, responsible for targeting PRC1 to the chromatin. Recent studies highlight the function specifications among CBX family members in undifferentiated and differentiated stem cells, which reveal the interplay between compositional diversity and functional specificity of PRCI. In this review, we summarize the current knowledge about targeting and functional mechanisms of PRCs, emphasizing the recent breakthroughs related to CBX proteins under a number of physiological and pathological conditions.