miR-141-3p靶向CBX1抑制乳腺癌细胞增殖和细胞迁移侵袭

目的探讨miR-141-3p对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法实验设置miR-con组、miR-141-3p组、si-con组、si-染色体同源物(CBX)1组、anti-miR-con组、anti-miR-141-3p组、miR-141-3p+pcDNA组、miR-141-3p+pcDNA-CBX1组;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-141-3p和CBX1 mRNA的表达水平;Western印迹检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与正常乳腺细胞HBL-100相比,乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和BT474中miR-141-3p的表达水平显著降低,CBX1的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-141-3p、沉默CBX1均可抑制SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭,抑制CBX1、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。miR-141-3p靶向调控CBX1的表达,过表达CBX1能逆转miR-141-3p对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论 miR-141-3p可能通过下调CBX1表达抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

CBX1在胃癌中的表达及与胃癌患者病理特征相关性的生物信息学分析

目的利用生物信息学技术分析CBX1在胃癌中的表达,探讨CBX1与胃瘤临床病理特征的相关性,阐明CBX1对胃瘤早期诊断和预后的影响。方法利用Oncomine数据库、GEPIA数据库分析CBX1在胃癌组织和正常胃组织中转录水平的表达差异;利用Western blot检测CBX1在正常胃黏膜细胞GES-1和胃癌细胞SGC7901中的蛋白表达差异;利用Human Protein Atlas网站分析CBX1在胃癌组织及正常胃组织中翻译水平的表达差异;利用UALCAN数据库及Kaplan Meier-Plotter在线分析工具,阐明CBX1高表达与胃癌患者病理参数及患者生存率之间的关系;利用GEPIA数据库寻找与CBX1有紧密作用关系的蛋白,利用STRING数据库,构建蛋白质互作(PPI)网络,Scytoscape软件对PPI可视化,并利用Metascape网站进行基因本体富集分析,Starbase网站进行京都基因与基因组百科全书通路富集分析。结果CBX1在胃瘤中高表达,且与胃瘤的肿瘤分级、分期相关;生存分析结果显示CBX1高表达与胃癌患者生存率密切相关;富集分析结果显示与CBX1相互作用的蛋白主要发挥组蛋白修饰、mRNA组装功能。结论CBX1在胃瘤中呈高表达,并与胃瘤多个病理性指标相关。

GST-CBX2-1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

目的:构建GST标签的CBX2-1融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达,纯化出表达蛋白。方法:以CBX2-1全长为模板,构建3对引物,将CBX2-1PCR扩增成3段,通过XhoⅠ和NotⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-3载体中,并转化E.coli DH5ɑ,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序坚定正确后,转入E.coli BL21中,经IPTG大量诱导表达,SDSPAGE电泳和Western blot鉴定,运用GST pull down方法纯化3段蛋白。结果:酶切电泳及测序结果证明,原核表达质粒GST-CBX2-1 3个载体构建成功,用Western blot方法证实了GST-CBX2-1-1(1-288),GST-CBX2-1-2(259-600),GST-CBX2-1-3(601-1596)融合蛋白的表达,并成功纯化出3段蛋白。结论:成功构建了GST-CBX2-1-1,GST-CBX2-1-2,GST-CBX2-1-3原核表达载体,证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达与纯化,为进一步研究CBX2-1各结构域的功能提供了前提基础。

CBX2-1与p53相互作用的机制

目的:检测CBX2-1与p53是否存在相互作用,并一步检测CBX2-1与p53发生相互作用的结构域。方法:在大肠杆菌中表达GST-CBX2-1融合蛋白,GST pull down纯化出蛋白与细胞裂解液混合,Western blot检测两个蛋白相互作用。同样的方法进一步检测CBX2-1与p53发生相互作用的结构域。结果:Western blot结果显示CBX2-1与p53存在直接相互作用,相互作用的结构域是CBX2-1蛋白N端1-288肽段和259-600肽段及p53蛋白的98-292肽段。结论:CBX2-1蛋白通过N端1-288肽段和259-600肽段与p53蛋白98-292肽段相互作用,为进一步研究研究CBX2-1参与神经性列腺癌的机制提供了一定的理论基础。