CBX2蛋白在大肠癌中的表达及对CACO2细胞增殖、转移的作用机制

目的探究色素框同源蛋白2(chromobox protein homolog,CBX2)蛋白在大肠癌中的表达水平及对CACO2细胞增殖与转移的作用机制。方法对85例大肠癌患者及癌旁正常组织中的CBX2蛋白水平进行检测,并设置CACO2癌细胞组,CACO2-mimics组以及CACO2-inhibitor组,对各组细胞OD值、存活率水平、单克隆形成数目、细胞穿膜数、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1,cyc D1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平进行分析。结果大肠癌组CBX2蛋白水平显著高于癌旁正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。CBX2-mimics组OD值、存活率水平、克隆形成数目、细胞穿膜数、CBX2 mRNA、MMP-9、cyc D1、VEGF显著高于CBX2癌细胞组及CBX2-inhibitor组,差异有统计学意义(P<0.05),CBX2-inhibitor组OD值、存活率水平、克隆形成数目、细胞穿膜数、CBX2 mRNA、MMP-9、cyc D1、VEGF显著低于CBX2癌细胞组,差异有统计学意义(P<0.05);CBX2 mRNA与MMP-9、CycD1、VEGF蛋白呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大肠癌组织中CBX2蛋白表达水平升高,且CBX2高表达能促进CACO2细胞增殖、转移,其机制与CBX2诱导CACO2细胞高表达MMP-9、CycD1、VEGF有关。

GST-CBX2-1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

目的:构建GST标签的CBX2-1融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达,纯化出表达蛋白。方法:以CBX2-1全长为模板,构建3对引物,将CBX2-1PCR扩增成3段,通过XhoⅠ和NotⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-3载体中,并转化E.coli DH5ɑ,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序坚定正确后,转入E.coli BL21中,经IPTG大量诱导表达,SDSPAGE电泳和Western blot鉴定,运用GST pull down方法纯化3段蛋白。结果:酶切电泳及测序结果证明,原核表达质粒GST-CBX2-1 3个载体构建成功,用Western blot方法证实了GST-CBX2-1-1(1-288),GST-CBX2-1-2(259-600),GST-CBX2-1-3(601-1596)融合蛋白的表达,并成功纯化出3段蛋白。结论:成功构建了GST-CBX2-1-1,GST-CBX2-1-2,GST-CBX2-1-3原核表达载体,证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达与纯化,为进一步研究CBX2-1各结构域的功能提供了前提基础。