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人源CBX7功能结构域的重组表达与纯化
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作者 胡温温 ALTAF Simair +3 位作者 吕缜一 陈婷 张云龙 陆昌瑞 《生命科学研究》 CAS CSCD 2019年第2期92-99,共8页
CBX7(chromobox 7)在细胞寿命延长和癌症发生中起着重要的调控作用。然而,获取足量的全长CBX7蛋白并用于结构研究极为艰难。实验阐述了CBX7功能结构域CBX7(aa 145~227)重组表达载体构建的详细过程。同时,通过Ni-NTA亲和层析对融合目的... CBX7(chromobox 7)在细胞寿命延长和癌症发生中起着重要的调控作用。然而,获取足量的全长CBX7蛋白并用于结构研究极为艰难。实验阐述了CBX7功能结构域CBX7(aa 145~227)重组表达载体构建的详细过程。同时,通过Ni-NTA亲和层析对融合目的蛋白进行了纯化,并利用SDS-PAGE及Western-blot进行了鉴定分析。纯化后的融合蛋白样品通过离子交换和分子筛层析进一步分离剩余杂质。本实验得到的高浓度CBX7蛋白可用于结晶,为后续CBX7的结构和功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人源cbx7 功能结构域 蛋白质表达 蛋白质纯化 肿瘤抑制
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CBX7蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及意义 被引量:2
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作者 陈敏 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2015年第2A期185-188,共4页
目的探讨CBX7蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义。方法收集江夏区人民医院病理科2009-2013年手术切除及活检的甲状腺乳头状癌标本40例和癌旁组织标本20例。采用免疫组织化学方法检测各组组织中CBX7蛋白的表达。并对各组免... 目的探讨CBX7蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床意义。方法收集江夏区人民医院病理科2009-2013年手术切除及活检的甲状腺乳头状癌标本40例和癌旁组织标本20例。采用免疫组织化学方法检测各组组织中CBX7蛋白的表达。并对各组免疫组织化学反应的平均光密度和平均阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验,检验水准α为0.05。结果 CBX7蛋白在癌旁组织中呈高表达,甲状腺乳头状癌中呈低表达,统计分析显示,CBX7蛋白在癌旁组织中的表达显著高于甲状腺乳头状癌(P<0.05)。结论 CBX7蛋白在甲状腺乳头状癌中呈低表达,可能与甲状腺乳头状癌的发生和发展密切相关。 展开更多
关键词 甲状腺乳头状癌 cbx7蛋白 免疫组织化学
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人源CBX7全长及部分片段的表达纯化及单体结构研究 被引量:1
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作者 吕缜一 陆昌瑞 《生物化工》 2018年第1期1-4,共4页
本实验通过构建人源色素框同源蛋白7(chromobox protein homolog 7,CBX7)全长及部分片段的大肠杆菌pp SUMO表达载体,经过Ni柱亲和纯化、离子交换纯化以及分子筛纯化等方法,获得较纯的CBX7(Full-Length)蛋白及达到蛋白质结晶条件的CBX7(1... 本实验通过构建人源色素框同源蛋白7(chromobox protein homolog 7,CBX7)全长及部分片段的大肠杆菌pp SUMO表达载体,经过Ni柱亲和纯化、离子交换纯化以及分子筛纯化等方法,获得较纯的CBX7(Full-Length)蛋白及达到蛋白质结晶条件的CBX7(13-65aa)蛋白。证实了人源CBX7中间区域存在大量疏水基团,该区域对CBX7蛋白的稳定性有一定影响。人源CBX7蛋白质的纯化及疏水区域的发现为后续相关结构及功能的研究提供了途径。 展开更多
关键词 cbx7蛋白 融合蛋白的构建 蛋白质表达 蛋白质纯化 ppSUMO表达载体
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铜离子对牙髓组织再生能力的影响及其机制初探 被引量:1
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作者 伍玉 杨磊婷 +2 位作者 江飞 周芷萱 沈铭 《口腔医学》 CAS 2023年第5期407-414,共8页
目的 研究铜离子对牙髓干细胞(dental pulp stem cells, DPSCs)的牙髓组织再生能力的影响及其机制。方法 用不同浓度的铜离子刺激DPSCs, CCK-8检测铜离子对细胞的增殖和毒性作用;活死染色检测水凝胶毒性;Western blotting和qPCR检测低... 目的 研究铜离子对牙髓干细胞(dental pulp stem cells, DPSCs)的牙髓组织再生能力的影响及其机制。方法 用不同浓度的铜离子刺激DPSCs, CCK-8检测铜离子对细胞的增殖和毒性作用;活死染色检测水凝胶毒性;Western blotting和qPCR检测低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)、色素框同源蛋白7(chromobox protein homolog 7, CBX7)以及干细胞特性相关指标的蛋白和mRNA表达情况;人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)成管和迁移实验观察血管新生表型;制备负载DPSCs的含铜离子水凝胶并注射至裸鼠皮下,于术后14 d取材,应用苏木素-伊红和免疫组织化学染色观察细胞在裸鼠皮下的自我更新和血管新生情况。结果 体外结果显示5、25、50μmol/L铜离子能促进DPSCs增殖,对DPSCs无显著毒性作用;Western blotting和qPCR结果显示25μmol/L铜离子组的HIF-1α、CBX7、Sox-2、Oct-4和Nanog的蛋白和mRNA的表达水平显著高于对照组;在HUVECs成管和迁移实验中25μmol/L铜离子能促进HUVECs的成管和迁移。体内结果显示负载DPSCs的含铜离子水凝胶可以在裸鼠皮下诱导新生血管样组织,显著增加Sox-2阳性细胞的比例。结论 铜离子能刺激DPSCs活化乏氧信号HIF-1α,增加CBX7表达,进而上调Sox-2、Oct-4、Nanog,维持DPSCs干细胞特性,同时能诱导血管新生,从而为实现牙髓组织再生提供理论依据和实验基础。 展开更多
关键词 铜离子 牙髓干细胞 牙髓再生 cbx7
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miR-454-3p调控肺癌细胞活性及对CBX7蛋白表达的影响 被引量:1
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作者 王志丹 赵倩 何婷婷 《中国医师杂志》 CAS 2022年第1期84-89,共6页
目的探究miR-454-3p对肺癌细胞活性的调控及对CBX7蛋白表达的影响。方法体外培养正常肺上皮细胞293T细胞和人肺癌细胞A549细胞,把肺癌A549细胞分为三组,空白组、miR-NC组(转染miR-NC)和miR-454-3p组(转染miR-454-3p mimics),用CCK-8法... 目的探究miR-454-3p对肺癌细胞活性的调控及对CBX7蛋白表达的影响。方法体外培养正常肺上皮细胞293T细胞和人肺癌细胞A549细胞,把肺癌A549细胞分为三组,空白组、miR-NC组(转染miR-NC)和miR-454-3p组(转染miR-454-3p mimics),用CCK-8法检测三组细胞增殖情况;用Transwell检测三组细胞的侵袭数目,用流式细胞仪检测细胞的凋亡率;用蛋白质印迹对肺癌细胞中CBX7蛋白的表达进行检测并比较。结果和正常肺上皮293T细胞相比较,肺癌A549细胞中miR-454-3p mRNA表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。空白组和miR-NC组细胞中CBX7蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-454-3p组细胞中CBX7蛋白表达明显高于空白组及miR-NC组,差异有统计学意义(均P<0.05)。CCK-8结果发现,miR-454-3p组的A值明显低于空白组及miR-NC组(均P<0.05);空白组和miR-NC组肺癌细胞A值比较差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell小室实验结果表明,和空白组及miR-NC组相比较,miR-454-3p组细胞的侵袭数量明显减少,肺癌细胞的侵袭能力明显减弱(均P<0.05);空白组和miR-NC组肺癌细胞的侵袭能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪检测结果显示,空白组和miR-NC组细胞的凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05);和空白组及miR-NC组相比,miR-454-3p组肺癌细胞的凋亡率明显增加(均P<0.05)。结论在肺癌细胞中miR-454-3p呈低表达,过表达miR-454-3p能有效地调控肺癌细胞的生物活性,抑制肺癌细胞的增殖和侵袭,导致细胞的凋亡,其作用机制可能与miR-454-3p促进CBX7蛋白表达有关。 展开更多
关键词 肺肿瘤 A549细胞 cbx7蛋白 miRNA-454-3p
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