信号转导和转录激活因子3/CC趋化因子配体2信号通路对乳腺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响实验研究

目的:探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)/CC趋化因子配体2(CCL2)信号通路对乳腺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人乳腺癌细胞株(HCC1937、MCF-7、MDA-MB-231、ZR-75-1)和人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)。采用蛋白印迹法检测HCC1937、MCF-7、MDA-MB-231、ZR-75-1和MCF-10A细胞磷酸化STAT3(p-STAT3)、STAT3、CCL2蛋白表达。选取p-STAT3/STAT3蛋白比值、CCL2蛋白表达最高的人乳腺癌细胞进行后续实验。将MCF-7细胞分为对照组、STAT3抑制剂(WP1066)Ⅰ组(2μmol/L WP1066)、Ⅱ组(4μmol/L WP1066)、Ⅲ组(8μmol/L WP1066)。分别采用细胞计数试剂盒-8、划痕实验、Transwell实验检测MCF-7细胞活力、迁移率及侵袭能力。采用蛋白印迹法检测MCF-7细胞p-STAT3、STAT3、CCL2、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达。结果:与MCF-10A细胞比较,HCC1937、MCF-7、MDA-MB-231、ZR-75-1细胞p-STAT3/STAT3蛋白比值、CCL2蛋白表达升高(均P<0.05)。其中MCF-7细胞p-STAT3/STAT3蛋白比值、CCL2蛋白表达最高,因此选用MCF-7细胞进行后续实验。与对照组比较,STAT3抑制剂Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组MCF-7细胞活力、迁移率、侵袭数目依次降低(均P<0.05)。与对照组比较,STAT3抑制剂Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组MCF-7细胞p-STAT3/STAT3蛋白比值、CCL2、MMP-2及MMP-9蛋白表达依次降低(均P<0.05)。结论:乳腺癌细胞中STAT3/CCL2呈高表达,抑制STAT3/CCL2信号通路能够降低乳腺癌细胞活力,减少迁移和侵袭。

乌头碱调节C-C基序趋化因子配体2/C-C基序趋化因子受体2信号通路对膀胱癌细胞抗肿瘤活性及其作用机制研究

目的 探讨乌头碱调节C-C基序趋化因子配体2(CCL2)/C-C基序趋化因子受体2(CCR2)信号通路对膀胱癌细胞抗肿瘤活性及其作用机制研究。方法 研究起止时间为2021年12月至2022年10月。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测2.5、5.0、10.0、20.0、30.0μmol/L乌头碱处理后的人膀胱癌5637细胞存活率,筛选出合适的乌头碱作用浓度。将5637细胞分为对照组、乌头碱低剂量(10μmol/L)组、乌头碱高剂量(20μmol/L)组、乌头碱高剂量(20μmol/L)+空载组、乌头碱高剂量(20μmol/L)+CCL2过表达组,分组处理后,采用CCK-8法、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(Edu)染色法及Hoechst 33258染色分别检测各组5637细胞存活率、增殖率、凋亡率;采用Transwell实验及划痕实验分别检测各组5637细胞侵袭数、迁移率;采用免疫荧光染色检测各组5637细胞凋亡相关蛋白BCL2相关X蛋白(Bax)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达比值(Bax/Bcl-2);采用免疫印迹法检测各组5637细胞CCL2/CCR2信号通路相关蛋白及上皮间质转化标志蛋白[神经钙黏素(N-cadherin)、锌指E盒结合同源盒1(ZEB1)、紧密连接蛋白1(ZO-1)、上皮钙黏素(E-cadherin)]表达。结果 与对照组相比,乌头碱低剂量组、乌头碱高剂量组、乌头碱高剂量+空载组细胞CCL2(0.69±0.09、0.20±0.03、0.19±0.04比1.21±0.13),CCR2(0.78±0.12、0.26±0.06、0.27±0.07比1.33±0.20)、Ncadherin(0.65±0.06、0.12±0.02、0.11±0.03比1.24±0.12)与ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率均降低(P<0.05),Bax/Bcl-2、细胞ZO-1与E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05);乌头碱高剂量组、乌头碱高剂量+空载组细胞CCL2、CCR2、N-cadherin与ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率相比乌头碱低剂量组进一步降低(P<0.05),Bax/Bcl-2、细胞ZO-1与Ecadherin蛋白表达进一步升高(P<0.05)。与乌头碱高剂量组相比,乌头碱高剂量+CCL2过表达组细胞CCL2、CCR2、N-cadherin与ZEB1蛋白表达、存活率、增殖率、侵袭数、迁移率升高(P<0.05),Bax/Bcl-2、细胞ZO-1与E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论 乌头碱可通过CCL2/CCR2信号通路而抑制膀胱癌细胞存活、增殖及侵袭和迁移,促使其凋亡。

CC类趋化因子配体2对结核分枝杆菌感染人单核巨噬细胞THP-1自噬的影响及分子机制

目的探讨CC类趋化因子配体2(CCL2)对结核分枝杆菌感染人单核巨噬细胞THP-1自噬的影响及分子机制。方法采用结核分枝杆菌H37Rv株感染THP-1细胞,RT-PCR和Western blot检测CCL2的表达。在THP-1细胞中转染CCL2 siRNA,采用H37Rv感染下调CCL2的THP-1细胞,实验分为Mock组、H37Rv组、H37Rv+si-NC组和H37Rv+si-CCL2组,采用RT-PCR和Western blot分析CCL2的表达,菌落形成单位计数分析H37Rv胞内存活率,Western blot检测自噬相关蛋白及NF-κB信号通路中关键蛋白p65、IKK-α和IκB-α的表达。给予NF-κB信号通路激活剂佛波酯(PMA),探讨其对H37Rv感染THP-1细胞自噬的影响。结果H37Rv感染THP-1细胞6 h CCL2 mRNA和CCL2蛋白开始逐渐升高,随着感染时间延长CCL2 mRNA和CCL2蛋白持续升高,于24 h达到最高水平,48 h又有所降低。H37Rv感染THP-1细胞不同时间CCL2 mRNA和CCL2蛋白两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。与Mock组比较,H37Rv组和H37Rv+si-NC组H37Rv感染THP-1细胞中CCL2 mRNA、CCL2蛋白、LC3-Ⅰ、p62、p65、IKK-α和IκB-α表达升高,LC3-Ⅱ表达降低;与H37Rv组和H37Rv+si-NC组比较,H37Rv+si-CCL2组H37Rv感染THP-1细胞中CCL2 mRNA、CCL2蛋白、LC3-Ⅰ、p62、p65、IKK-α和IκB-α表达降低,LC3-Ⅱ表达升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。H37Rv组和H37Rv+si-NC组H37Rv胞内存活率明显高于H37Rv+si-CCL2组,差异有统计学意义(P<0.01)。与H37Rv+si-CCL2组比较,H37Rv+si-CCL2+PMA组H37Rv感染THP-1细胞中LC3-Ⅰ和p62表达升高,LC3-Ⅱ表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论H37Rv感染THP-1细胞能够升高CCL2的表达,降低CCL2的表达可通过阻断NF-κB信号通路抑制H37Rv感染THP-1细胞自噬。

甲基莲心碱通过调节CCL2-CCR2信号通路对缺血性脑卒中大鼠血脑屏障的影响

目的:探究甲基莲心碱(NEF)调节CC趋化因子配体2(CCL2)-趋化因子受体2(CCR2)信号通路对缺血性脑卒中(IS)大鼠血脑屏障的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为模型组(Model组)、低剂量NEF组(NEF-L组,25 mg/kg NEF)、高剂量NEF组(NEF-H组,50mg/kgNEF)和高剂量NEF+CCR2拮抗剂组(NEF-H+RS102895组,50mg/kgNEF+10mg/kg RS102895)和假手术组(Sham组),每组15只。比较各组大鼠神经功能评分。伊文思蓝(EB)渗透法评价各组大鼠血脑屏障通透性。采用干湿重法测定各组大鼠脑组织含水量。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定大鼠脑组织CCL2、CCR2 mRNA表达。Western blot检测大鼠脑组织CCL2、CCR2、ZO-1、Claudin-5蛋白表达。结果:与Sham组相比,Model组大鼠神经功能评分、右脑组织EB含量、含水量、脑组织CCL2、CCR2 mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.05),ZO-1、Claudin-5水平显著降低(P<0.05)。相较于Model组,NEF-H组神经功能评分、脑含水量、EB含量、CCL2、CCR2 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05),ZO-1、Claudin-5表达水平显著升高(P<0.05)。RS102895增强了NEF对IS大鼠血脑屏障的保护作用。结论:NEF可能通过抑制CCL2-CCR2信号通路对IS大鼠血脑屏障起保护作用。

木犀草素对神经性疼痛模型大鼠MCP-1/CCR2信号轴的影响

目的:探讨木犀草素调节单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/CC趋化因子受体2(CCR2)信号轴,对神经性疼痛(NP)模型大鼠神经胶质细胞激活和免疫炎症的影响。方法:采用坐骨神经慢性压迫损伤法构建大鼠NP模型。将大鼠按随机数字表法分为模型组、阿魏酸钠组及木犀草素低、中、高剂量组,每组12只;另选择同期12只大鼠为假手术组。各组大鼠腹腔注射及灌胃相应药物,每天1次,连续14 d。测定大鼠机械性缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL);实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫组织化学法检测脊髓中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及小胶质细胞标志物离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)mRNA及蛋白表达;流式细胞仪检测大鼠外周血中CD4^(+)、CD8^(+)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脊髓病理损伤情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊髓中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;蛋白质印迹法(Western blotting)检测脊髓中MCP-1、CCR2蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠MWT、TWL、CD4^(+)T细胞比例及CD4^(+)/CD8^(+)比值降低,Iba-1、GFAP mRNA及蛋白表达、CD8^(+)T细胞比例、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、TNF-α)、MCP-1及CCR2蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,木犀草素低、中、高剂量组及阿魏酸钠组大鼠MWT、TWL、CD4^(+)T细胞比例及CD4^(+)/CD8^(+)比值升高,Iba-1、GFAP mRNA及蛋白表达、CD8^(+)T细胞比例、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、TNF-α)、MCP-1及CCR2蛋白表达降低,且木犀草素作用效果呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:木犀草素具有抗炎、增强免疫、抑制胶质细胞活化,缓解NP的作用,其作用机制可能与抑制MCP-1/CCR2信号轴的激活有关。

扁蒴藤素调节CCL2-CCR2信号轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的 探究扁蒴藤素(PT)调节CC趋化因子配体2(CCL2)-CC趋化因子受体2(CCR2)信号轴对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法 常规培养肺泡上皮细胞A549,将其随机分为Control组(正常培养)、LPS组(10μg/mL LPS处理)、PT-L组(1μmol/L PT)、PT-H组(2μmol/L PT)和PT-H+RS504393组(2μmol/L PT+50 ng/mL CCL2抑制剂RS504393)。采用CCK-8法检测细胞活力;采用EdU实验测定细胞增殖情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;采用Western Blot检测各组细胞中CCL2、CCR2和凋亡相关蛋白表达水平。结果 与Control组比较,LPS组A549细胞吸光度(A)450(48、72 h)、细胞增殖率、Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,CCL2、CCR2、Bax蛋白表达水平上升(P<0.05)。与LPS组比较,PT-L组、PT-H组A549细胞A450(48、72 h)、细胞增殖率、Bcl-2蛋白表达水平上升(P<0.05),细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,CCL2、CCR2、Bax蛋白表达水平下降(P<0.05)。CCL2抑制剂RS504393促进了PT对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的改善作用。结论 PT可能通过下调CCL2-CCR2信号轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤具有改善作用。

根皮素调节CCL2-CCR2信号轴对肺癌细胞恶性进展的影响

目的:探讨根皮素调节CC趋化因子配体2(CCL2)-CC趋化因子受体2(CCR2)信号轴对肺癌细胞恶性进展的影响。方法:将A549细胞分为对照组(未进行任何处理的A549细胞)、低剂量根皮素组(500μmoL/L根皮素处理A549细胞)、中剂量根皮素组(750μmoL/L根皮素处理A549细胞)、高剂量根皮素组(1000μmoL/L根皮素处理A549细胞)、高剂量根皮素+GW0742组(1000μmoL/L根皮素与1.0μmoL/L CCL2-CCR2信号通路激活剂GW0742处理A549细胞)。CCK-8法和流式细胞术分别检测A549细胞增殖及凋亡;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;Western blot测定CCL2-CCR2信号轴相关蛋白表达。结果:低、中、高剂量根皮素组细胞OD450值、迁移及侵袭数量、CCL2、CCR2蛋白表达均低于对照组(P<0.05),细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),且呈剂量依赖性。高剂量根皮素+GW0742组细胞OD450值、迁移及侵袭数量、CCL2、CCR2蛋白表达均高于高剂量根皮素组(P<0.05),细胞凋亡率低于对照组(P<0.05)。结论:根皮素可能通过调节CCL2-CCR2信号轴介导的免疫反应进而抑制肺癌细胞的恶性进展。

miR-124通过抑制TLR4/NF-κB/CCL2对脑梗死大鼠神经元凋亡的影响

目的探讨微小RNA(miR)-124通过抑制Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB/CC类趋化因子配体(CCL)2对脑梗死(CI)大鼠神经元凋亡的影响。方法通过线栓闭塞大脑中动脉法建立CI大鼠模型60只,以随机数表法平均分为5组:模型组、miR-124激活剂(miR-124 agomir)组、TLR4过表达质粒组、miR-124 agomir阴性对照+空载质粒组、miR-124 agomir+TLR4过表达质粒组,另取12只大鼠只分离颈动脉,作为假手术组。分组干预后,评测大鼠神经功能缺损情况,比较各组神经功能缺损评分;采用三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠CI情况,比较各组CI面积;采用TUNEL染色检测海马神经元凋亡情况,比较各组海马神经元凋亡率;采用试剂盒测量各组血清活性氧(ROS)及炎症因子环氧合酶(COX)-2、白细胞介素(IL)-17水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)实验检测各组脑组织miR-124表达;采用Western印迹实验检测各组脑组织凋亡及TLR4/NF-κB/CCL2通路蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组、miR-124 agomir阴性对照+空载质粒组、miR-124 agomir+TLR4过表达质粒组脑组织miR-124与B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P<0.05),神经功能缺损评分、CI面积、海马神经元凋亡率、血清ROS及炎症因子COX-2、IL-17水平、脑组织Bcl-2相关X蛋白(Bax)、TLR4、核内NF-κB p65、CCL2蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组、miR-124 agomir+TLR4过表达质粒组分别比较,miR-124 agomir组脑组织miR-124与Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),神经功能缺损评分、CI面积、海马神经元凋亡率、血清ROS及炎症因子COX-2、IL-17水平、脑组织Bax、TLR4、核内NF-κB p65、CCL2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),而TLR4过表达质粒组脑组织miR-124与Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),神经功能缺损评分、CI面积、海马神经元凋亡率、血清ROS及炎症因子COX-2、IL-17水平、脑组织Bax、TLR4、核内NF-κB p65、CCL2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组相比,miR-124 agomir阴性对照+空载质粒组各指标水平无显著变化(P>0.05)。结论miR-124可通过下调TLR4/NF-κB/CCL2通路蛋白表达,抑制炎症,减轻脑组织梗死及海马神经元凋亡,修复CI大鼠神经功能。

鸦胆子苦醇通过CC趋化因子配体2-C-C趋化因子受体2信号通路对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:探讨鸦胆子苦醇(BRU)调节CC趋化因子配体2(CCL2)-C-C趋化因子受体2(CCR2)信号通路对骨肉瘤(OS)细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:将骨肉瘤细胞系MG-63分为MG-63组(未处理的MG-63细胞)、L-BRU组(25 nmol/L鸦胆子苦醇处理MG-63细胞)、M-BRU组(50 nmol/L鸦胆子苦醇处理MG-63细胞)、H-BRU组(75 nmol/L鸦胆子苦醇处理MG-63细胞)、GW0742组(1μmol/L CCL2-CCR2信号通路激活剂GW0742处理MG-63细胞)、H-BRU+GW0742组(1μmol/L GW0742和75 nmol/L鸦胆子苦醇处理MG-63细胞),MTT法检测鸦胆子苦醇对正常人成骨细胞系hFOB1.19细胞的毒性,CCK8法检测MG-63细胞增殖,流式细胞仪检测MG-63细胞、CD8+T细胞凋亡,ELISA法检测外周血单个核细胞(PBMC)上清液IFN-γ、TNF-α水平,Western Blot法检测CCL2-CCR2通路蛋白以及凋亡相关蛋白水平。结果:0~500 nmol/L鸦胆子苦醇对hFOB1.19细胞无明显毒性影响;与MG-63组相比,L-BRU组、M-BRU组、H-BRU组光密度(OD)值,Bcl-2、CCL2、CCR2、PD-L1蛋白水平及CD8+T细胞的凋亡率均显著降低(P<0.05),凋亡率,IFN-γ、TNF-α水平及Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白水平均显著升高(P<0.05),而GW0742组以上指标趋势相反;与H-BRU组相比,H-BRU+GW0742组光密度值,Bcl-2、CCL2、CCR2、PD-L1蛋白水平及CD8+T细胞的凋亡率均显著增加(P<0.05),凋亡率,IFN-γ、TNF-α水平及Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白水平均显著降低(P<0.05)。结论:鸦胆子苦醇可能通过抑制CCL2-CCR2信号通路对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和免疫逃逸产生影响。

毛兰素调节CCL2⁃CCR2轴对关节软骨细胞炎性损伤的影响

目的探讨毛兰素调节CC趋化因子配体2(CCL2)/CC趋化因子受体2(CCR2)轴对关节软骨细胞炎性损伤的影响。方法将人关节软骨细胞分为control组(正常培养)、LPS组、毛兰素低(10 nmol/L)、中(25 nmol/L)、高(50 nmol/L)剂量组、pcDNA组(转染pcDNA3.1)、pcDNA⁃CCL2组(转染pcDNA3.1⁃CCL2),实时荧光定量PCR(qRT⁃PCR)检测细胞中CCL2、CCR2 mRNA表达水平;MTT法、平板克隆实验与流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡情况;qRT⁃PCR和ELISA检测IL⁃6、IL⁃1β、TNF⁃α水平;Western blot法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞抗凋亡因子B细胞淋巴瘤蛋白2(Bcl⁃2)、Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)及CCL2/CCR2通路蛋白表达。结果与control组比较,LPS组细胞凋亡率、IL⁃6、IL⁃1β、TNF⁃αmRNA表达水平、CCL2、CCR2 mRNA及Bax、CCL2、CCR2蛋白表达水平显著升高,OD490值、集落形成数、PCNA、Bcl⁃2蛋白表达水平降低(P<0.05);与LPS组比较,毛兰素低、中、高剂量组细胞凋亡率、IL⁃6、IL⁃1β、TNF⁃αmRNA表达水平、CCL2、CCR2 mRNA及Bax、CCL2、CCR2蛋白表达水平逐渐降低,OD490值、集落形成数、PCNA、Bcl⁃2蛋白表达水平逐渐升高(P<0.05);过表达CCL2减弱了毛兰素对LPS诱导的关节软骨细胞的影响(P<0.05)。结论毛兰素可抑制LPS诱导的关节软骨细胞凋亡和炎症反应,其机制可能与抑制CCL2/CCR2通路有关。

基于MCP-1/CCR2通路研究miR-28-5p对老龄自发性高血压大鼠的干预作用

目的研究基于单核细胞趋化蛋白(MCP)-1/CC趋化因子受体(CCR)2通路微小核糖核酸-28-5p(miR-28-5p)对老龄自发性高血压大鼠的干预作用。方法选取SPF级雄性Wistar大鼠6只设为正常组,自发性高血压大鼠18只分为模型组、对照组、miR-28-5p组各6只,miR-28-5p水平检测采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法,检测肺功能相关指标,采用酶联免疫法检测炎症因子白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,Western印迹检测MCP-1及CCR2通路相关蛋白表达。结果与正常组相比,模型组、对照组、miR-28-5p组miR-28-5p表达及左室收缩压(LVSP)水平明显较高,左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)水平明显较低(P<0.05);与模型组相比,对照组、miR-28-5p组miR-28-5p表达及LVEDP水平明显较低,LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax水平明显较高(P<0.05);与对照组相比,miR-28-5p组miR-28-5p表达及LVEDP水平明显较低,LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax水平明显较高(P<0.05)。与正常组相比,模型组、对照组、miR-28-5p组IL-1、IL-6、TNF-α水平及MCP-1、CCR2水平明显较高(P<0.05);与模型组相比,对照组、miR-28-5p组IL-1、IL-6、TNF-α水平及MCP-1、CCR2水平明显较低(P<0.05);与对照组相比,miR-28-5p组IL-1、IL-6、TNF-α水平及MCP-1、CCR2水平明显较低(P<0.05)。结论miR-28-5p可通过调控MCP-1、CCR2通路蛋白水平改善老龄自发性高血压大鼠的心功能,干预抑制炎性反应。

布托啡诺调节CCL2-CCR2轴对食管癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的 探讨布托啡诺对食管癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其对CCL2-CCR2轴的调节作用。方法 使用0~400 ng/ml梯度浓度布托啡诺处理人食管癌KYSE30细胞,MTT法检测细胞增殖能力;将KYSE30细胞分为对照组、布托啡诺L组、布托啡诺M组、布托啡诺H组和布托啡诺H+CCL2组,EdU法检测细胞增殖能力;Hoechst法检细胞凋亡;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell法检测细胞侵袭;Western blot技术验证CC类趋化因子配体2(CCL2)、CC类趋化因子受体2(CCR2)蛋白表达。结果 50 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml、400 ng/ml浓度布托啡诺能显著抑制KYSE30细胞增殖;与对照组相比,布托啡诺L、M、H组和布托啡诺H+CCL2组KYSE30细胞增殖、迁移、侵袭能力以及CCL2、CCR2蛋白表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);与布托啡诺H组相比,布托啡诺H+CCL2组细胞增殖、迁移、侵袭能力以及CCL2、CCR2蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 布托啡诺能够显著抑制食管癌KYSE30细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,这可能与其抑制CCL2-CCR2轴有关。

RS102895通过阻断CCL2/CCR2通路抑制PC-3前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的探讨RS102895特异性拮抗CC趋化因子受体2(CCR2),对不同恶性程度前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法体外培养非雄激素依赖性PC-3前列腺癌细胞和雄激素依赖性22RV1前列腺癌细胞,设立空白对照组、重组CC趋化因子配体2(rCCL2)处理组、rCCL2联合RS102895处理组。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell^(TM)法检测细胞侵袭和迁移能力,实时定量PCR检测细胞KI-67抗原(ki67)与基质金属蛋白酶2(MMP2)的mRNA表达水平,Western blot法检测细胞ki67、MMP2的蛋白表达水平。结果与对照组相比,rCCL2处理能够显著增强PC-3细胞的增殖、侵袭及迁移能力,对22RV1细胞的增殖能力具有显著增强作用;同时,rCCL2处理可显著上调PC-3细胞中ki67和MMP2的mRNA及蛋白表达水平。RS102895处理后,可逆转rCCL2的以上作用。结论RS102895可通过特异性阻断PC-3前列腺癌细胞中CCL2/CCR2通路,下调ki67及MMP2的表达,抑制细胞的增殖、侵袭和迁移。

CCR2和CCL2与缺氧缺血性脑损伤的相关性研究进展

缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)是指由于外力作用造成的脑皮质浅层出血而软脑膜完整的一种脑部损伤。近年来的研究表明,多种免疫细胞及细胞因子参与了HIBD的发生。CC趋化因子受体2(CC chemokine receptor 2,CCR2)是CC型趋化因子的代表受体,广泛分布于脑组织内神经元、星形胶质细胞及小胶质细胞,是脑组织中主要的趋化因子受体。CC趋化因子配体2(CC chemokine ligand 2,CCL2)为碱性蛋白,是CCR2的配体,在炎症反应中发挥重要的作用。本文对CCR2和CCL2的生物学特性进行介绍,并对CCR2和CCL2与HIBD的关系进行阐述,以期为HIBD的相关研究提供线索。

阿维A对寻常性银屑病患者CCL2和CCR2水平的影响

目的探讨阿维A治疗对寻常性银屑病患者血清CC趋化因子配体2(CCL2)、CC趋化因子受体2(CCR2)浓度及皮损CCR2 mRNA表达的影响,进一步阐明阿维A对寻常性寻常性性银屑病的作用机制。方法采集30例健康人(正常对照组)及80例阿维A治疗前、后寻常性寻常性银屑病患者(进展期48例,稳定期32例)的外周血和皮肤组织样本,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清CCL2和CCR2浓度,通过荧光实时定量PCR检测正常皮肤和皮损CCR2 mRNA表达。治疗前及治疗后8周根据皮损面积及严重度指数(PASI)评分观察阿维A疗效,并对治疗前寻常性银屑病患者血清CCL2和CCR2浓度与PASI评分进行相关性分析。结果阿维A治疗寻常性银屑病有效率为78.75%。银屑病组治疗前处于稳定期、进展期的患者血清CCL2,CCR2浓度及皮损CCR2 mRNA表达均显著高于正常对照组(P<0.01),进展期患者血清CCL2,CCR2浓度及皮损CCR2 mRNA表达稳定期患者升高(P<0.01)。银屑病组治疗前血清CCL2,CCR2浓度与PASI评分呈正相关(P<0.05)。银屑病组治疗后4和8周时血清CCL2,CCR2浓度及皮损CCR2 mRNA表达明显低于其治疗前(P<0.01),且治疗后8周时血时清CCL2,CCR2浓度及皮损CCR2 mRNA表达较治疗后4周时降低(P<0.05)。结论 CCL2,CCR2与寻常性性银屑病发生发展密切相关,降低CCL2,CCR2表达可能是阿维A治疗寻常性银屑病的重要机制。

三黄益肾胶囊调控NF-κB信号通路减轻糖尿病肾病大鼠炎症反应的机制研究

目的:旨在探究三黄益肾胶囊治疗糖尿病肾病(DN)可能的炎症反应机制。方法:按照随机数字表法将60只大鼠分为正常组、模型组、厄贝沙坦组及三黄益肾低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)注射建立DN模型。正常组和模型组给予生理盐水2 mL灌胃;厄贝沙坦组给予厄贝沙坦11.51 mg/kg灌胃;三黄益肾低、中、高剂量组分别给予三黄益肾胶囊0.41、0.81、1.62 g/kg灌胃。各组大鼠均1次/d,连续给药4周。比较各组大鼠空腹血糖(FBG)、体质量、24 h尿白蛋白、肾功能指标、肾组织病理学变化、肾组织抗氧化相关指标(SOD、GSH-Px活性及MDA水平)、肾组织炎症介质[白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]、肾组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肾组织CD68、CC趋化因子受体2(CCR2)表达、肾组织CC趋化因子配体2(CCL2)、NF-κB P65、p-NF-κB P65、IκB、p-IκB表达。结果:与模型组比较,各三黄益肾胶囊组大鼠体质量高,FBG、血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及24 h尿蛋白水平低,肾脏组织病理变化减轻,三肾组织中SOD、GSH-Px活性高,MDA水平低,IL-6、IL-1β、TNF-α水平低,肾组织中iNOS水平低,肾组织CCR2与CD68共定位水平低,CCL2、p-NF-κB P65、p-IκB蛋白表达低。结论:三黄益肾胶囊治疗DN的机制可能与抑制肾组织中NF-κB信号通路激活,减轻肾脏氧化应激及炎症反应有关。

选择性ER调节剂对骨肉瘤细胞增殖及CCL2表达的抑制作用研究

目的探讨选择性ER调节剂他莫昔芬对骨肉瘤细胞增殖及CC趋化因子配体(CCL)2表达的影响。方法检测骨肉瘤细胞(143B和U-2OS)及成骨细胞(hFOB1.19)中雌激素受体(ER)的表达量。采用细胞增殖实验和平板克隆形成实验观察他莫昔芬对骨肉瘤细胞增殖的影响。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测骨肉瘤细胞中炎症因子IL-6、IL-8、TGF-β、CCL2和CCL5基因的相对表达量。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测他莫昔芬对骨肉瘤细胞CCL2表达的影响。结果2种骨肉瘤细胞(143B和U-2OS)的ER mRNA相对表达量均显著低于成骨细胞(hFOB1.19);他莫昔芬可显著抑制骨肉瘤细胞的增殖及炎症因子IL-6、IL-8、TGF-β、CCL2和CCL5基因的表达,其中对CCL2表达的抑制作用最为显著。结论他莫昔芬可抑制骨肉瘤细胞的增殖及CCL2的表达,提示其或可作为骨肉瘤的辅助化疗药物。

汉黄芩素调节MCP-1/CCR2信号通路对妊娠高血压大鼠心脏炎症的影响

目的探讨汉黄芩素调节单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/CC类趋化因子受体2(CCR2)信号通路对妊娠高血压大鼠心脏炎症的影响。方法通过灌胃亚硝基左旋精氨酸甲酯构建妊娠高血压大鼠模型。将大鼠随机分为对照组(等量0.9%NaCl)、模型组(等量0.9%NaCl)和低、高剂量实验组(灌胃3.33、13.32 mg·kg^(-1)汉黄芩素)及硫酸镁组(腹腔注射100 mg·kg^(-1)硫酸镁)、重组大鼠MCP-1蛋白(rRMCP-1)组(腹腔注射0.026 mg·kg^(-1)rRMCP-1)、高剂量+rRMCP-1组(灌胃13.32 mg·kg^(-1)汉黄芩素+0.026 mg·kg^(-1)rRMCP-1),每组12只。各组给药1天1次,持续7 d。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;用免疫荧光染色检测大鼠心肌组织中M1、M2型巨噬细胞表达;用蛋白质印迹法检测大鼠心肌组织中MCP-1蛋白表达。结果对照组、模型组和低、高剂量实验组及硫酸镁组、rRMCP-1组、高剂量+rRMCP-1组的血清TNF-α水平分别为(10.06±0.41)、(23.39±0.57)、(19.89±0.62)、(13.64±0.51)、(12.97±0.48)、(28.84±1.05)和(17.15±0.69)pg·mL^(-1);M1型巨噬细胞表达的荧光强度分别为32.26±1.43、58.84±2.11、50.66±1.89、36.69±1.57、35.87±1.59、67.73±2.01和48.53±1.86;M2型巨噬细胞表达的荧光强度分别为31.15±1.20、46.56±1.03、51.92±1.04、59.11±0.82、59.26±0.83、40.26±1.12和45.53±1.65;MCP-1蛋白表达水平分别为0.58±0.03、1.86±0.11、1.62±0.09、0.76±0.07、0.78±0.06、2.16±0.13和1.34±0.12。模型组上述指标与对照组比较,低、高剂量实验组和硫酸镁组、rRMCP-1组上述指标与模型组比较,高剂量实验组上述指标与高剂量+rRMCP-1组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论汉黄芩素可能通过抑制MCP-1/CCR2信号通路抑制妊娠高血压大鼠心脏炎症反应。

S100A14通过调控CCL2/CXCL5通路对肺腺癌增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨S100钙结合蛋白(S100)A14对肺腺癌(LUAD)增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 取A549细胞分为空白组(细胞未转染)、pLVX-IRES-Neo组、S100A14组、S100A14+IgG2B组、S100A14+CC族趋化因子配体(CCL)2中和抗体组、S100A14+CXC趋化因子配体(CXCL)5中和抗体组,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、S100A14、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达;CCK-8法检测各组细胞增殖;Transwell实验检测各组细胞迁移与侵袭;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞上清中CCL2、CXCL5水平。结果 与人肺上皮细胞株BEAS-2B比较,人肺腺癌A549、H1650、H1299、PC9细胞中S100A14蛋白均显著高表达(P<0.05);S100A14组A549细胞中S100A14蛋白表达水平、24、48 h的OD450值、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白及细胞上清中CCL2、CXCL5水平显著高于空白组、pLVX-IRES-Neo组(P<0.05);与S100A14组、S100A14+IgG2B组比较,S100A14+CCL2中和抗体组、S100A14+CXCL5中和抗体组A549细胞在24、48 h的OD450值、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白及细胞上清中CCL2、CXCL5水平显著降低(P<0.05)。结论 S100A14在LUAD细胞中高表达,过表达S100A14通过激活CCL2/CXCL5通路促进LUAD细胞增殖、迁移及侵袭。

外伤性脑损伤后神经细胞保护因子表达的变化

外伤性脑损伤(traumatic brain injuries,TBI)是指外力作用于颅骨所致的头皮、颅骨、硬脑膜和脑组织与外界相通,并由此引发脑组织一系列病理生理学改变的疾病。脑组织损伤后导致神经细胞缺血缺氧,脑血管通透性增加并引发一系列炎性细胞分泌增加,在促进炎症发生的同时改变多种细胞保护因子的表达,如低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible-1,HIF-1)、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,GLUT-1)、小泛素样修饰蛋白-1(small ubiquitin-like modifier,SUMO-1)、CC趋化因子配体2(CC chemokines ligand 2,CCL2)、瞬时受体电位阳离子通道1(transient receptor potential channel 1,TRPC1)等蛋白质的表达产生一系列应激反应来应对缺氧,进而保护神经细胞免受进一步损伤。本文将围绕脑组织损伤后的神经细胞保护因子改变进行综述。