重组CC16蛋白质抑制香烟烟雾提取物诱导人支气管上皮细胞衰老的初步研究

目的探讨重组人CC16蛋白质(rhCC16)对香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)衰老的抑制作用及机制。方法CCK-8法检测CSE(0%、1%、2.5%、5%、7.5%和10%)及rhCC16(0、10、100、250和500 ng/mL)对HBECs细胞活力的影响;β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测对照组、CSE组以及CSE+rhCC16组细胞β-半乳糖苷酶活性;实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞P16、P21 mRNA表达水平;Western blot检测各组细胞P16、P21、p-P53、P38、p-P38、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平。结果与对照组相比,5%CSE刺激细胞72 h对HBECs细胞活力无显著影响;500 ng/mL及以下浓度rhCC16对HBECs细胞活力无显著影响;与对照组相比,5%CSE刺激HBECs细胞72 h致β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率明显升高(P<0.05),且P16和P21蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.05),p-P53、p-P38与p-ERK1/2蛋白表达量显著增加(P<0.05);与CSE组相比,250 ng/mL rhCC16干预下,HBECs细胞β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率显著下降(P<0.05),P16和P21蛋白和mRNA表达水平显著下降(P<0.05),p-P53、p-p38和p-ERK1/2的表达量降低(P<0.05)。结论rhCC16蛋白质抑制香烟烟雾诱导的HBECs衰老,抑制P38 MAPK和ERK1/2信号通路可能是其作用机制。

重组人CC16蛋白改善慢性阻塞性肺疾病模型小鼠肺功能及其机制

目的:探究重组人CC16蛋白(rhCC16)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠肺功能的改善作用及其机制。方法:40只BALB/c雄性小鼠随机均分为对照组、COPD模型组、COPD+PBS组和COPD+rhCC16组,每组10只。采用被动吸烟6月法制备COPD模型小鼠,从熏烟16周开始,在熏烟前2 h用2.5μg/g rhCC16或等体积PBS对熏烟小鼠进行滴鼻干预,制备COPD+rhCC16组或COPD+PBS组。造模及干预结束后检测各组小鼠肺功能;HE染色观察各组小鼠肺组织形态结构;RT-qPCR法检测各组小鼠肺组织P16和P21的mRNA表达;免疫组织化学法检测各组小鼠肺组织P16、P21、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)、p-P38及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达情况。结果:与对照组相比,COPD模型组小鼠0.3秒内用力呼气容积(FEV0.3)/用力肺活量(FVC)比值降低(P<0.05),气道阻力增加(P<0.05),肺顺应性降低(P<0.05);小鼠肺泡壁破裂塌陷,肺泡大小不均匀,多呈不规则扩大,管腔狭窄,管壁增厚;小鼠肺组织P16和P21的mRNA表达水平显著升高(P<0.05),小鼠肺组织P16、P21、SA-β-Gal、p-P38和p-ERK1/2蛋白表达量升高(P<0.05);与COPD模型组相比,rhCC16干预组小鼠各项肺功能指标均有缓解(P<0.05),肺组织病理损伤减轻,小鼠肺组织P16和P21 mRNA表达水平降低(P<0.05),小鼠肺组织P16、P21、SA-β-Gal、p-P38和p-ERK1/2蛋白表达量降低(P<0.05);PBS组各项指标与COPD组相似。结论:rhCC16可能通过P38 MAPK/ERK1/2信号通路减轻COPD小鼠肺组织衰老,进而改善COPD模型小鼠肺功能。

重组大鼠CC16蛋白质对LPS诱导大鼠气道上皮细胞表达TNF-α、IL-6和IL-8的影响

目的:观察重组大鼠CC16蛋白质(r CC16)对脂多糖(LPS)诱导大鼠气道上皮(RTE)细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-8表达的影响及其可能机制。方法:体外培养RTE细胞,以不同剂量(0.5、1.0和2.0 mg/L)的r CC16预处理RTE细胞2 h,接着加入0.1 mg/L的LPS继续培养24 h。采用RT-q PCR测定各组细胞TNF-α、IL-6和IL-8的mRNA表达;采用ELISA测定细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-8的含量;采用Western blot法分析核因子(NF)-κB p65在细胞核中的分布。结果:LPS刺激RTE细胞可以显著上调TNF-α、IL-6和IL-8的mRNA及蛋白水平的表达,给予不同剂量rCC16干预后,LPS诱导的上述炎症介质的表达被抑制,且rCC16对IL-6和IL-8的抑制作用呈剂量依赖性,随着rCC16剂量的增加,抑制作用增强;而对TNF-α的抑制则没有剂量依赖关系。Western blot实验结果显示,rCC16可以抑制LPS诱导的NF-κB p65的核转移,且有剂量依赖性。结论:rCC16可能通过NF-κB信号通路抑制LPS诱导的RTE细胞TNF-α、IL-6和IL-8 mRNA及蛋白的表达。

哮喘患者血清CC16蛋白检测的临床价值研究

目的探求哮喘患者血清中Clara细胞蛋白CC16的临床检测价值。方法以双抗体夹心ELISA法检测62例哮喘患者血清中CC16蛋白的含量,以30例不吸咽的体检健康者为对照组,平行检测。结果1哮喘病人组血清CC16平均含量为5.48ng/ml,对照组血清CC16平均含量为17.6ng/ml。经t检验,哮喘组和对照组的血清CC16含量差异有显著意义(P<0.05);2哮喘组中病程较长(≥10y)的患者较病程较短者(≤10y)血清中CC16含量进一步降低,分别为4.32ng/ml和7.41ng/ml,经t检验,二者差异亦有显著意义(P<0.05)。结论血清中Clara细胞蛋白CC16显著降低是哮喘病患者的临床检测特征之一;Clara细胞合成CC16可能是气道慢性炎症的下调因子,其减少导致气道高反应性,可加重哮喘,延长病程,应引起临床的足够重视。

不同病程支气管哮喘患者CC16蛋白检测的分析

目的通过检测不同病程支气管哮喘患者CC16蛋白的含量,了解CC16蛋白含量变化在支气管哮喘的诊断治疗中的作用。方法双抗体夹心ELISA法。结果正常对照组CC16蛋白含量均值为20.1ng/ml,哮喘病程>5年,患者CC16蛋白含量均值为4.30ng/ml,哮喘病程<5年,患者CC16蛋白含量均值为7.38ng/ml,两组差异有统计学意义。结论随着病程的迁延,CC16蛋白水平明显降低。

重组CC16蛋白对慢性阻塞性肺疾病小鼠肺组织结构及MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的研究重组大鼠CC16(rCC16)蛋白质对减轻慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)小鼠模型肺组织损伤的作用,及对肺组织中基质金属蛋白酶(MMP)-9和基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1表达的调节作用。方法将40只清洁级C57BL/6小鼠随机分为4组,分别为空白组、COPD模型组、rCC16剂量组1和剂量组2。除空白组外,其余小鼠均采用吸烟3月法制备COPD模型,从第3月开始空白组和模型组给予PBS滴鼻,rCC16剂量组1和剂量组2分别给予1μg/g体重和2.5μg/g体重的rCC16滴鼻干预。观察各组小鼠精神状态、饮食情况、体重变化及大小便情况等,H&E染色观察各组小鼠肺组织形态结构变化,荧光定量聚合酶链式反应、免疫组织化学法检测MMP-9和TIMP-1信使RMA(mRNA)和蛋白质的表达变化。结果空白组小鼠体重随饲养周期增大,COPD组小鼠体重较空白组明显减轻,rCC16干预组后,干预组2小鼠体重逐周增大,但干预组1小鼠体重增加较缓慢,差异均有统计学意义(P<0.05);COPD模型组小鼠肺组织结构明显破坏,肺泡间隔增宽,部分形成肺气肿,rCC16干预组后,小鼠肺部的肺泡结构趋于完整,肺大泡的形成也减少;COPD模型组小鼠肺组织MMP-9和TIMP-1的表达均明显高于空白组(P<0.05);rCC16干预后,均可降低MMP-9和TIMP-1的表达,差异均有统计学意义(P<0.05),rCC16对MMP-9的降低作用具有剂量依赖性,而对TIMP-1的调节不呈剂量依赖性。结论 rCC16滴鼻干预可以减轻COPD小鼠肺组织的损伤,降低肺组织中MMP-9和TIMP-1的表达,对COPD的治疗具有积极意义。

急性呼吸窘迫综合征患者血清Cc16蛋白和miRNA-122表达及其临床意义

目的:探讨急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血清Cc16蛋白、miRNA-122的表达水平及其与预后的关系。方法:回顾性分析68例ARDS患者的临床资料,其中死亡组53例,存活组15例,另选取同期健康体检者45例为对照组。采用Kaplan-Meier法分析患者的生存期,应用Logistic分析影响患者预后的因素。结果:ARDS存活组与死亡组平均肺动脉压、平均气道压、肺损伤评分、C反应蛋白、降钙素原、丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素、Cc16蛋白和miRNA-122表达水平显著高于对照组,且死亡组C反应蛋白、降钙素原、ALT、AST、总胆红素、Cc16蛋白及miRNA高于存活组(均P <0. 05)。Kaplan-Meier分析显示Cc16蛋白低表达组总体生存率显著高于高表达组(51. 85%vs 18. 15%,P <0. 01),miRNA-122低表达组生存率显著高于高表达组(60. 92%vs20. 13%,P <0. 05);Logistic单因素分析显示ARDS预后与C反应蛋白、降钙素原、ALT、AST、总胆红素、Cc16、miRNA-122相关;Logistic多因素分析显示ALT、Cc16、miRNA-122是影响ARDS预后的独立危险因素。结论:ARDS患者血清Cc16蛋白和miRNA-122表达量异常增高与预后不良密切相关。

急性呼吸窘迫综合征患者TXB2、S100A12及Cc16蛋白的表达及临床意义

目的分析急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者血栓素B2(TXB2)、S100A12及Cc16蛋白的表达及临床意义。方法将2019年1月—2020年3月收治的ARDS 73例作为观察组,根据病情分为轻度组16例、中度组29例、重度组28例。另选取同期健康体检志愿者66例作为对照组。对比不同人群TXB2、S100A12及Cc16蛋白表达水平,并分析影响ARDS预后的危险因素。结果观察组TXB2、S100A12及Cc16蛋白表达水平均高于对照组(P<0.01)。TXB2、S100A12及Cc16蛋白表达水平重度组高于轻度和中度组,且中度组高于轻度组(P<0.05)。动脉氧分压/吸入氧浓度<200 mmHg、急性生理学和慢性健康状况评分系统Ⅱ评分≥20分、TXB2、S100A12、Cc16升高是导致ARDS预后不良的独立危险因素(P<0.01)。结论TXB2、S100A12及Cc16蛋白在ARDS患者中均高表达,与患者病情严重程度关系密切,且是影响预后的独立危险因素。

社区获得性肺炎患者血清CC16和CRP蛋白检测及临床意义

目的检测社区获得性肺炎(CAP)患者血清CC16蛋白和C-反应蛋白(CRP)浓度,探讨CC16和CRP蛋白在社区获得性肺炎中的临床意义。方法将46例符合诊断标准的社区获得性肺炎患者作为病例组,28例健康体检者作为对照组,病例组根据PSI评分和CURB-65评分,分为低危组、中危组和高危组,分别采用酶联免疫吸附法和速率散射免疫比浊法检测CAP患者血清中CC16和CRP浓度。结果 1.社区获得性肺炎组的血清CC16浓度显著低于健康对照组,且CC16下降的程度和患者病情的严重程度显著相关。2.社区获得性肺炎组的血清CRP浓度显著高于对照组,且CRP增高的程度与患者病情的严重程度显著相关。3.患者血清中CC16和CAP的浓度呈负相关。4.PSI和CURB-65评分系统均可有效判断社区获得性肺炎患者的病情严重程度。结论 CC16和CRP和社区获得性肺炎的发生、发展密切相关,结合利用PSI和CURB-65评分系统,对病情判断和治疗具有重要的指导意义。

Clara细胞分泌蛋白CC16与支气管哮喘的关系

CC16(Clara细胞分泌蛋白-16)是Clara细胞主要的分泌物,具有抗炎、抗氧化、调节免疫及抑制肿瘤的生成和转移等多种生物活性。我国近年来研究显示CC16与支气管哮喘的发病机制、诊断及治疗有密切关系,其中CC16与Th1/Th2失衡的关系成为一研究热点。现就CC16与支气管哮喘的关系作一综述,为以后进一步深入研究作铺垫。

Clara细胞分泌蛋白CC16在急性肺损伤中的作用

Clara细胞分泌蛋白(CC16)具有抗炎、抗氧化及抑制肿瘤细胞生成和转移等多种生物学功能。最新研究显示CC16与急性肺损伤(ALI)的发生密切相关,且CC16与sPLA2表达失衡在ALI发生中的作用成为目前研究的热点。因此,揭示CC16的生物活性,探讨CC16在ALI发生中的作用,有望为ALI的防治提供新的思路及理论依据。

N-乙酰半胱氨酸对COPD大鼠Clara细胞及CC16的影响

目的:观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预对大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型Clara细胞数量及其分泌蛋白CC16表达的影响。方法:单纯熏香烟法建立Wistar大鼠COPD模型。将大鼠随机分为对照组、COPD组和NAC干预组,每组10只。应用透射电镜观察COPD大鼠肺组织Clara细胞超微结构的变化。免疫组织化学方法检测各组大鼠肺组织Clara细胞数量。酶联免疫吸附法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清中CC16含量。RT-PCR法检测肺组织中CC16mRNA的含量。结果:COPD组大鼠终末细支气管上皮Clara细胞占上皮细胞的百分比明显低于对照组(P<0.01);NAC干预组明显高于COPD组(P<0.01)。COPD组大鼠BALF和血清中CC16蛋白水平明显低于对照组(P<0.01);NAC干预组明显高于COPD组(P<0.05)。COPD组大鼠肺组织中CC16mRNA的含量明显低于对照组和NAC干预组(均P<0.01)。结论:COPD大鼠的气道炎症可导致Clara细胞数量及CC16的合成及分泌量减少,抗氧化剂NAC可通过促进CC16的合成和分泌抑制气道炎症反应。

Clara细胞蛋白16和E-选择素与婴幼儿支气管哮喘及其相关性的临床研究

目的探求支气管哮喘患儿血清中Clara细胞蛋白16(CC16蛋白)和可溶性E-选择素(sE-selectin,sE-SLT)在支气管哮喘中的作用机制及临床检测价值。方法血清CC16蛋白和sE-SLT检测采用双抗体夹心ELISA法,对30例发作期和25例缓解期支气管哮喘患儿采血进行CC16蛋白和sE-SLT定量检测,同时以36名健康体检儿童为对照(NC)组。并进行相关性及曲线分析。结果(1)支气管哮喘患儿发作期、缓解期血清CC16蛋白水平显著低于对照组,血清sE-SLT水平显著高于对照组(P<0.01);发作期血清CC16蛋白水平显著低于缓解期,血清sE-SLT水平显著高于缓解期;发作期支气管哮喘患儿血清CC16蛋白和sE-SLT异常率显著高于缓解期(P<0.01)。(2)支气管哮喘患儿血清sE-SLT与CC16蛋白的相关方程y=-0.493x+18.168,相关系数r=-0.8758,R2=0.767。(3)在ROC曲线上,支气管哮喘患儿血清CC16蛋白和sE-SLT的最佳临界值(cut off point)分别为10ng/ml、22.5 g/L。敏感性分别为80%(24/30)、70%(21/30),特异性分别为80%(20/25)、80%(20/25),阳性预测值分别为82.8%(24/29)8、0.8%(21/26),阴性预测值分别为76.9%(20/26)、69%(20/29),准确度分别为80%(44/55)、74.5%(41/55)。结论CC16蛋白可能是支气管哮喘气道炎症的下调因子,sE-SLT可能是支气管哮喘气道炎症的上调因子。测定血清CC16蛋白和sE-SLT水平可作为支气管哮喘患儿病情判定和疗效评价的良好指标。

不同浓度雾化吸入海风藤对急性肺损伤新生大鼠CC16的影响

目的探讨不同浓度雾化吸人海风藤对急性肺损伤（Au）新生大鼠Clara细胞蛋白（CC16）的影响。方法150只健康新生SD大鼠注射内毒素（LPS）后随机分为未治疗组（对照组）、海风藤治疗低浓度组（治疗1组）和海风藤治疗高浓度组（治疗2组）。按组别采集肺组织行病理学观察及测肺湿／干质量（W／D）比值，同时收集血清及支气管肺泡灌洗液（BALF），用双抗体夹心ELISA法检测分析CCl6含量。结果①鼠肺外观LPS注射48h后同一时间点，与对照组及治疗1组相比，治疗2组水肿程度轻、出血肺叶面积少。光镜下对照组及治疗1组肺组织切片可见大量红细胞，治疗2组为少量红细胞渗出。②对照组及治疗1、2组肺W／D比值均升高，治疗2组在24h～7d，各亚组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。③各组血清CC16含量均呈先升后降的趋势，治疗2组在24h～7d，各亚组与对照组比较均差异有统计学意义，治疗1组与对照组除72h亚组P〈0．05外，其余差异均无统计学意义（P〉0．05）。各组BALF中CC16水平均迅速下降，48h后逐渐回升，治疗2组在8～72h亚组与对照组比较（P〈0．01），治疗1组在48、72h时间点与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论雾化吸入高浓度海风藤可减轻Au新生鼠的肺水肿及肺出血程度，海风藤还能减少Clara细胞受损，促进肺微血管对水肿吸收，可能对血管内皮完整性有一定的保护作用。

肺挫伤患者血清CC16的变化及临床意义

目的:探讨肺挫伤患者血清人克拉拉细胞蛋白(Clara cell protein,CC16)水平变化及临床意义。方法:应用ELISA方法检测42例肺挫伤患者(实验Ⅰ组:轻-中度肺挫伤患者24例;实验Ⅱ组:重度肺挫伤患者18例)伤后24 h内及治疗后1 d、3d、7 d、14 d血清CC16水平变化,并与16例健康体检者(对照组)血清CC16水平进行比较。结果:实验组各个时间点血清CC16水平均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。伤后24 h内和治疗后1 d、3 d、7 d、14 d血清CC16水平之间均有差异(P<0.01),且有逐渐下降趋势。实验Ⅱ组各个时间点血清CC16水平均较实验Ⅰ组同时间点偏高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:肺挫伤患者伤后早期血清CC16水平明显上升,且随治疗进程逐渐下降。血清CC16水平上升与肺挫伤程度有密切关系。血清CC16水平变化可能为肺挫伤早期诊断提供生物学指标。

CC16在慢性气道疾病发病机制中的作用及临床应用前景

克拉拉细胞分泌蛋白16(clara cell secretory protein-16,CC16)是呼吸道上皮的club细胞分泌的一种蛋白质,又被称为CC10、子宫珠蛋白、club细胞分泌蛋白(club cell secretory protein,CCSP)、尿蛋白1和人类蛋白1,其主要存在于气道、肺部、血液中。研究表明CC16具有抗炎效应,在慢性气道疾病的发病机制中起到重要作用,还可能是慢性气道疾病的潜在生物标志物和治疗靶点。本文主要对CC16结构、抑制炎症的细胞和分子机制进行总结,并就其作为临床上判断慢性气道疾病的生物标志物和治疗靶点的应用前景作一综述。

克拉拉细胞蛋白16对急性呼吸衰竭患者使用无创通气模式失败的预测价值

目的探讨血清克拉拉细胞蛋白16（claracell protein16，Cc16）对急性呼吸衰竭患者使用无创通气失败的预测价值。方法49例入重症医学科24h内接受无创通气的急性呼吸衰竭患者，维持无创通气24h以上为无创通气成功组（A组），无创通气24h内需改为有创通气者为无创通气失败组（B组）。记录相关资料并收集入科时血清Cc16水平。结果两组7d病死率及28d病死率差异有统计学意义，B组死亡数目为7例（30．4％）及10例（43．5％），高于A组的0例（0）及4例（15．4％）。入科时B组血清Cc16水平高于A组，二项式Logistic回归分析证实入科时血清Cc16水平对无创通气失败的评估具有预测价值，采用受试者工作特征（ROC）曲线计算人科时血清Cc16水平的预测参考阈值为Cc16〉31．8ng／mL。结论急性呼吸衰竭患者可根据入科时血清Cc16水平决定是否尝试使用无创通气治疗。

矽肺早期诊断的生物标志物CC16和SP-D

矽肺是由于在生产过程中长期吸入含有游离二氧化硅粉尘而引起以肺组织纤维化为主的全身性疾病,是尘肺中危害最严重的职业病之一。其病理演化过程为与炎性有关的纤维化反应。近几年一些学者在研究矽肺的致病机制过程中发现CC16、SP-D的抗炎及抗纤维化等作用在矽肺发生发展过程中起到重要作用,并可能成为矽肺早期诊断的生物标志物。本文就它们在矽肺诊断中的价值作一简单介绍。

矽肺大鼠血清和支气管灌洗液CC16及SP-D的变化

目的探讨不同剂量的矽尘和不同染尘时间对大鼠血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中克拉拉细胞蛋白(Clara cell protein,CC16)和肺泡表面活性蛋白D(surfactant protein D,SP-D)表达水平的影响,探讨矽肺的早期诊断新指标。方法制作矽尘致大鼠肺纤维化模型,矽尘剂量和染尘时间各组不同,测定大鼠BALF中羟脯氨酸(HYP)含量、BALF和血清中CC16及SP-D含量以及肺组织中CC16表达的免疫组化染色分析。结果 BALF中CC16的含量在染尘后第3天(49.65 ng/mg)、第7天(47.10 ng/mg)、第14天(46.15 ng/mg)、第21天(41.63 ng/mg)、第28天(38.02 ng/mg),均较对照组(分别为61.27 ng/mg,60.67 ng/mg,61.20 ng/mg,60.61 ng/mg,56.76 ng/mg)显著降低(P<0.05),并出现下降趋势;血清中CC16的含量在第7天(9.8 ng/ml)、第14天(9.36 ng/ml)、第21天(9.0 ng/ml)、第28天(8.78 ng/ml)也较对照组(11.04 ng/ml,10.84 ng/ml,10.88 ng/ml,10.96 ng/ml)显著降低(P<0.05)。大鼠血清中SP-D的含量较对照组显著下降(P<0.05),BALF中SP-D含量随染尘时间变化出现抛物线趋势。肺组织CC16免疫组化显示Clara细胞损伤严重,CC16表达降低。只有50 mg/ml染尘组BALF的HYP高于对照组(P<0.05)。结论在矽尘引起肺组织病变过程中CC16和SP-D具有肺组织特异性,可能作为矽肺的一个早期标志物。