C/EBPα参与小鼠胰岛β细胞囊泡谷氨酰胺转运子2基因表达的调控

目的:探讨转录调节因子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在小鼠胰岛β细胞株MIN6的囊泡谷氨酰胺转运子2(VGLUT2)基因表达过程中的调控作用。方法:克隆小鼠VLGUT2基因的启动子区,并对其中C/EBPα的结合位点进行了核酸定点突变,以荧光素酶活力方法观察突变后的启动子活性改变情况。通过电泳迁移率实验(EMSA)检测C/EBPα与含有小鼠VGLUT2启动子区核酸序列的核苷核探针的结合能力,以CEBPαsiRNA特异性抑制转录调控因子C/EBPα的基因表达,通过荧光素酶,RT-PCR和Western blotting方法观察抑制C/EBPα基因表达后小鼠VGLUT2的基因表达情况。结果:在对小鼠VGLUT2启动子区C/EBPα结合位点进行核酸定点突变后,小鼠VGLUT2启动子活性下降约50%,EMSA实验表明C/EBPα可与小鼠VGLUT2启动子区结合,当以C/EBPαsiRNA特异性地下调C/EBPα的表达时,小鼠VGLUT2的启动子活性、mRNA和蛋白水平也相应各自下降约60%、40%及45%。结论:C/EBPα参与了小鼠VGLUT2的基因表达调控。

CHOP/GADD153在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义,并分析其与临床病理特征的关系。方法食管鳞状细胞癌组织及距癌组织5 cm以上的手术远端切缘的食管鳞状上皮组织各87例,应用组织芯片、免疫组化法及Western blot法检测CHOP/GADD153蛋白的表达,并分析其表达与患者性别、年龄、分化程度、浸润深度、病理分期及淋巴转移等临床病理特征之间的关系。结果食管鳞状细胞癌组织中CHOP/GADD153的表达在蛋白水平明显高于食管正常鳞状上皮组织(P<0.01),且其高表达与食管鳞状细胞癌的浸润深度、分化程度、病理分期及淋巴转移密切相关(P<0.01),而与患者性别及年龄无关。结论 CHOP/GADD153参与食管鳞状细胞癌的发生、发展,其表达水平随着食管鳞状细胞癌组织恶性程度的增高而增高,可能作为衡量食管鳞状细胞癌恶性程度的一种有潜在价值的分子标志物。

女贞子对去卵巢小鼠脂肪生成的抑制作用及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 研究女贞子对去卵巢小鼠脂代谢的影响及其可能的作用机制。方法 采用切除双侧卵巢法建立小鼠骨质疏松模型,以女贞子水提液(3.5 g/kg)或戊酸雌二醇(0.1 mg/kg)连续干预去卵巢小鼠12周。采用苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色法观察各组小鼠内脏脂肪组织的病理变化;利用生化法测定血清中高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、总胆固醇(total cholesterol,TC)和三酰甘油(triglyceride,TG)水平;采用Western blotting法检测内脏脂肪组织中无翅型MMTV整合位点家族/β-连环蛋白(wingless type MMTV integration site family/β-catenin,Wnt/β-catenin)信号通路和脂肪生成相关蛋白的表达。结果 女贞子水提液能够显著抑制去卵巢小鼠体质量和体脂相对比率的增加(P<0.05),降低血清中TC、TG和LDL-C水平(P<0.05),减轻内脏脂肪组织细胞肥大(P<0.05)。同时,女贞子水提液可明显提高去卵巢小鼠内脏脂肪组织中Wnt 10b蛋白表达水平(P<0.05),降低p-β-catenin/β-catenin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)和CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteins α,C/EBPα)蛋白表达水平(P<0.05)。结论 女贞子水提液能够抑制去卵巢小鼠的脂肪生成,改善脂代谢,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。