ICBP90介导PI3K/AKT通路阻断剂LY294002抑制Jurkat T细胞增殖

目的:探讨磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路特异性抑制剂LY294002在Jurkat T细胞增殖中的作用。方法:以急性T细胞白血病细胞(Jurkat T细胞)为模型,PD98059和阿霉素为阳性对照,在倒置显微镜下观察LY294002对Jurkat T细胞的集落形成的影响,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测LY294002处理后Jurkat T细胞的增殖,流式细胞术检测LY294002处理后Jurkat T细胞周期的变化,Western blotting方法检测Jurkat T细胞中ICBP90蛋白的表达以确定其与LY294002抑制Jurkat T细胞增殖的关系。结果:LY294002能够显著抑制Jurkat T细胞的集落形成和增殖,使Jurkat T细胞停滞于G2/M期,导致Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达显著降低,LY294002与阿霉素联合用药可产生一定的协同效应。结论:LY294002通过下调Jur-kat T细胞ICBP90蛋白的表达,抑制Jurkat T细胞增殖。

染色盒同源物3对人结直肠癌细胞增殖的影响及其机制研究

目的探讨染色盒同源物3(CBX3)在结直肠癌组织和细胞中的表达,及其对结直肠癌细胞增殖能力的影响,并初步探讨其机制。方法运用生物信息学方法对CBX3的表达情况、生存期以及共表达网络进行分析。应用免疫组织化学染色法检测CBX3在结直肠癌组织和配对癌旁组织中的差异表达。应用Western blot检测正常结肠上皮细胞NCM460以及结直肠癌细胞HCT116、HT29、SW620中CBX3的表达水平。将CBX3过表达质粒和特异性小干扰分别转染至HCT116细胞中,采用磺酰罗丹明B(SRB)染色实验和克隆形成实验检测细胞的增殖能力。应用转录组测序技术检测差异表达基因。应用qRT-PCR及Western blot实验对差异基因进行验证。应用生物信息学方法对差异基因及CBX3进行相关性分析。结果生物信息学分析显示CBX3在结直肠癌组织中表达高于癌旁组织(P<0.001),CBX3高表达组患者无病生存期低于低表达组(P<0.05),CBX3对转录组的影响广泛且复杂。CBX3在结直肠癌组织中表达高于配对癌旁组织(P<0.0001)。CBX3在结直肠癌细胞中表达高于正常结肠上皮细胞(P<0.01)。SRB实验及克隆形成实验证实,过表达CBX3增强了HCT116细胞的增殖能力,敲低CBX3增殖能力降低(P<0.01)。转录组测序结果显示,敲低CBX3后,CCAAT/增强子结合蛋白delta(CEBPD)mRNA表达升高(P<0.001),蛋白表达相应升高(P<0.05),且两者存在负性相关(P<0.001,R=-0.2)。结论CBX3在结直肠癌组织及细胞中高表达,能够在体外促进细胞增殖。CBX3可能通过抑制CEBPD转录因子的表达来发挥促癌作用。

慢性HBV感染者外周血白细胞GRP78、CHOP和XBP1 mRNA水平变化

目的探讨慢性HBV感染者外周血白细胞内质网应激相关基因糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）和X盒结合蛋白l（XBP1）m RNA水平及其与临床指标的相关性。方法采用实时荧光定量PCR技术检测40例正常人（NC）、43例慢性无症状HBV携带者（ASC）、47例慢性乙型肝炎（CHB）、41例乙型肝炎肝硬化（LC）和35例乙型肝炎相关肝细胞癌（HCC）患者外周血白细胞GRP78、CHOP和XBP1 m RNA水平,分析其与病毒学和生化学指标的相关性。结果 ASC、CHB、LC和HCC患者外周血白细胞GRP78 m RNA水平和XBP1 m RNA水平分别为（0.58±0.53）和（0.76±0.57）、（0.59±0.67）和（0.50±0.64）、（1.07±1.09）和（1.44±1.00）和（1.17±1.69）和（0.90±1.33）,均显著高于健康人[分别为（0.01±0.61）和（0.01±0.97）,P〈0.01和P〈0.05];在HBs Ag〈1500IU/ml、1500-20000IU/ml和〉20000IU/ml组患者,GRP78 m RNA水平分别为（0.48±0.59）、（0.76±0.56）和（0.74±0.56）,三组间差异有统计学意义（P〈0.05）;HBV DNA水平为1×10^3-10^5copies/ml组XBP1 m RNA水平为（0.86±1.13）,显著低于HBV DNA〉1×105copies/ml组[（1.44±1.31）,P〈0.05];在不同转氨酶水平间、HBe Ag阳性与阴性组间和胆红素正常与升高组间,以上三种基因m RNA水平差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论内质网应激可能与慢性HBV感染后的疾病进展相关。

γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制Jurkat T细胞增殖

目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT在体外对人T淋巴细胞白血病JurkatT细胞株增殖的抑制作用及其某些机制。方法:通过倒置显微镜和MTT法检测DAPT对Jurkat T细胞聚集的影响和对其增殖的抑制作用;利用碘化丙锭染色结合流式细胞术检测DAPT对Jurkat T细胞周期的影响;藉免疫印迹法检测DAPT对Jurkat T细胞周期蛋白ICBP90表达的影响。结果:DAPT能显著影响Jurkat T细胞的聚集,抑制Jurkat T细胞的增殖,使其细胞周期停滞于S期,且周期蛋白ICBP90的表达下调。结论:γ-分泌酶抑制剂DAPT能够抑制Jurkat T细胞的增殖和细胞周期的进行,其抑制作用可能与ICBP90蛋白表达的下调有关。

姜黄素对大鼠视网膜缺血/再灌注损伤时内质网应激的影响

目的:探讨姜黄素对大鼠视网膜缺血/再灌注损伤(RIRI)时内质网应激(ERS)的影响。方法:选取清洁级SpragueDawley(SD)雄性大鼠96只,采用随机数字表法分为3组(n=32):对照组(C组)、缺血/再灌注组(I/R组)和姜黄素组(CUR组)。I/R组和CUR组采用前房灌注法使眼内压升高而制备大鼠RIRI模型,缺血60 min,再灌注24 h后结束实验。于缺血前60 min时,CUR组腹腔注射姜黄素100 mg/kg,C组和I/R组腹腔注射等容量生理盐水。各组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取视网膜组织,光镜下观察病理学改变;采用TUNEL法检测视网膜组织细胞凋亡情况并计算凋亡指数(AI)。3组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取视网膜组织,电镜下观察大鼠视网膜组织超微结构改变。3组于再灌注24h时处死8只大鼠,取视网膜组织,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠视网膜组织中CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)、活化的转录因子4(ATF4)和X-盒结合蛋白-1(XBP1)mRNA表达。3组于再灌注24 h时处死8只大鼠,取视网膜组织,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠视网膜组织中、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)的蛋白表达,计算Bcl-2/Bax比值。结果:与C组比较,I/R组大鼠视网膜组织XBP-1、ATF4和CHOP mRNA表达明显上调(P<0.05);与I/R组比较,CUR组大鼠视网膜组织XBP-1、ATF4和CHOP mRNA表达明显下调(P<0.05)。与C组比较,I/R组大鼠视网膜组织CHOP、Bax和caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值均下降,与C组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),CUR组大鼠视网膜组织CHOP、Bax和caspase-3蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值均升高,与I/R组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。与C组比较,I/R组大鼠视网膜组织出现形态结构及超微结构损伤,AI值升高(P<0.05)。与I/R组比较,CUR组大鼠视网膜组织形态结构及超微结构损伤均减轻,AI值降低(P<0.05)。结论:姜黄素可减轻大鼠RIRI,其机制可能与抑制ERS介导的细胞凋亡有关。