敲低CCAAT/增强子结合蛋白β促进肝癌细胞的增殖和迁移

近年来已有研究表明,C/EBPβ在肝癌的发生发展中发挥重要的作用,但其具体分子调控机制尚不清楚。本研究通过分析GEO数据库和Kaplan-Meier Plotter数据库发现,C/EBPβmRNA在肝癌中低表达(P<0.05),且其低表达与肝癌患者预后密切相关。进一步,通过功能富集分析和TIMER数据库分析显示,C/EBPβ主要参与细胞周期、DNA转录等生物学过程,且C/EBPβ表达水平与CD4^(+)T细胞和巨噬细胞的免疫浸润具有较强的相关性(P<0.05)。为了进一步研究C/EBPβ对肝癌细胞增殖和迁移的影响。在肝癌细胞中瞬时转染C/EBPβsiRNA,将其分为si-NC组和siC/EBPβ组。通过qRT-PCR、Western印迹检测肝癌细胞中C/EBPβ在mRNA和蛋白质水平均显著降低(P<0.05);通过MTT检测、平板克隆形成实验和5-乙炔基-2-脱氧尿嘧啶核苷(Edu)实验证实,敲低C/EBPβ促进肝癌细胞的增殖(P<0.05);Transwell和划痕实验证实,敲低C/EBPβ促进肝癌细胞的迁移;Western印迹法检测敲低C/EBPβ对肝癌细胞内迁移相关蛋白质(E-cadherin、N-cadherin)以及Wnt/β-catenin信号通路蛋白质表达的影响,结果表明,敲低C/EBPβ促进肝癌细胞EMT上皮间质转化,并能激活Wnt/β-catenin信号通路的基因表达(P<0.05)。综上所述,C/EBPβ在肝癌组织中低表达且与患者生存预后成正相关。敲低C/EBPβ可能通过激活Wnt/β-catenin信号通络促进肝癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转化,为C/EBPβ在肝癌的发生发展中的作用提供了依据,可能是一个肝癌诊治过程中的潜在靶点。

腺苷预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白表达的影响

目的 观察腺苷预处理(AP)对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达的影响,探讨AP对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用机制。方法 将36只健康雄性Sprague Dawley大鼠按随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注(IR)组和AP组,每组12只。AP组大鼠术前3 d腹腔注射1.5 mg·kg^(-1)腺苷注射液,每日1次;假手术组和IR组大鼠术前3 d腹腔注射等量生理盐水,每日1次。IR组及AP组大鼠采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,并于栓塞2 h后拔出栓线恢复血供制备IR模型;假手术组大鼠不插入栓线,余处理同IR组及AP组。于再灌注24 h时,根据5分制神经行为学评分标准对3组大鼠进行神经功能缺损评分;然后,断头处死3组大鼠,取脑组织;应用苏木精-伊红染色法观察3组大鼠脑组织病理学改变,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测3组大鼠脑组织中CHOP mRNA相对表达量,免疫组织化学法检测3组大鼠脑组织中CHOP蛋白阳性表达情况,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测3组大鼠脑组织细胞凋亡情况。结果 3组大鼠神经功能缺损评分比较差异有统计学意义(F=157.923,P<0.05);IR组和AP组大鼠神经功能缺损评分显著高于假手术组(t=17.663、7.133,P<0.05),AP组大鼠神经功能缺损评分显著低于IR组(t=-10.530,P<0.05)。假手术组大鼠脑组织神经元形态结构正常,细胞核完整,间质无水肿;IR组大鼠脑组织神经元数目减少、细胞核溶解、出现空泡,间质水肿,组织疏松;AP组大鼠神经元损伤程度显著低于IR组。3组大鼠脑组织中CHOP mRNA相对表达量比较差异有统计学意义(F=2 989.751,P<0.05);IR组和AP组大鼠脑组织中CHOP mRNA相对表达量显著高于假手术组(t=75.514、23.502,P<0.05),AP组大鼠脑组织中CHOP mRNA相对表达量显著低于IR组(t=-52.171,P<0.05)。3组大鼠脑组织中CHOP蛋白阳性细胞表达率比较差异有统计学意义(F=2 257.096,P<0.05);IR组和AP组大鼠脑组织中CHOP蛋白阳性细胞表达率显著高于假手术组(t=65.927、21.744,P<0.05),AP组大鼠脑组织中CHOP蛋白阳性细胞表达率显著低于IR组(t=-44.183,P<0.05)。3组大鼠脑组织细胞凋亡率比较差异有统计学意义(F=1 519.372,P<0.05);IR组和AP组大鼠脑组织细胞凋亡率显著高于假手术组(t=5.512、2.693,P<0.05),AP组大鼠脑组织细胞凋亡率显著低于IR组(t=-2.818,P<0.05)。结论 AP可通过抑制CHOP的表达减轻脑缺血再灌注损伤。

CCAAT增强子结合蛋白β在骨关节炎中对基质金属蛋白酶表达调控的研究进展

骨关节炎是一种常见的关节退行性疾病,其发生机制复杂,目前尚未明确。研究发现,基质金属蛋白酶(Matrixmetallo proteinases,MMPs)的增多可引起骨关节炎中软骨细胞外基质降解进而导致进行性关节软骨受损,MMPs是诱导骨关节炎发病进程的主要因素,MMPs的表达受到多种因素调控。研究表明,CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer-binding protein-beta,C/EBPβ)作为一种转录因子在调控MMPs表达的过程中发挥着重要作用。本文就骨关节炎中C/EBPβ对基质金属蛋白酶家族的表达调控进行综述,以期为骨关节炎的防治提供新的研究思路。

转录因子增强子结合蛋白-4基因沉默对子宫内膜癌细胞凋亡的影响

目的观察内源性转录因子增强子结合蛋白-4(AP-4)沉默对子宫内膜癌细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将人子宫内膜癌细胞(HEC-1-A和RL95-2)分为NC组、si#1组、si#2组,si#1组转染siTFAP4片段1,si#2组转染si-TFAP4片段2,NC组转染对照siRNA。采用Hoechest 33258染色观察凋亡核形态,采用Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术测算细胞凋亡率,采用real-time PCR技术检测存活素(Survivin)mRNA表达,采用生物信息学分析预测Survivin编码基因BIRC5的启动子区域内是否存在AP-4的结合位点,采用染色体免疫共沉淀技术验证AP-4是否结合到BIRC5的启动子区域,采用双荧光素酶报告系统检测BIRC5的启动子转录激活情况。结果在HEC-1-A、RL95-2细胞中,与NC组相比,si#1组、si#2组凋亡核型细胞数均增加,细胞凋亡率均增加,Survivin mRNA相对表达量均减少(P均<0.05)。BIRC5的启动子区域内存在一个高置信度的AP-4结合位点,沉默HEC-1-A、RL95-2细胞内源性AP-4后能降低AP-4对BIRC5启动子区域的结合并抑制其转录激活状态。结论沉默内源性AP-4能诱导子宫内膜癌细胞凋亡,其机制可能为降低了AP-4对Survivin的转录激活,从而诱导了肿瘤细胞的凋亡。

幽门螺杆菌对CCAAT增强子结合蛋白α和Cx43表达的影响及其在胃癌发生中的作用

目的:探讨CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding proteinα,C/EBPα)和间隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)表达改变在H.pylori致胃癌中的作用。方法:扩大培养不同胃黏膜上皮细胞株(GES-1细胞、AGS细胞、SGC-7901细胞);胃镜下采集H.pylori感染慢性非萎缩性胃炎患者6例、胃癌前病变和胃癌患者各12例胃黏膜组织;采用realtime PCR法检测上述细胞和组织中C/EBPα和Cx43 mRNA的表达;同时将东亚型Cag A+H.pylori与GES-1细胞共培养24和48 h为实验组,以不加H.pylori的GES-1细胞株为对照组,培养24和48 h;采用real-time PCR法和Western印迹检测C/EBPα和Cx43 m RNA和蛋白的表达。结果:C/EBPα和Cx43 m RNA在AGS细胞、SGC-7901细胞中的表达均显著低于GES-1细胞(均P<0.05),且两者在SGC-7901细胞中的表达量较AGS细胞更低(均P<0.05);C/EBPα和Cx43 m RNA在胃癌胃黏膜组织中的表达明显低于慢性非萎缩性胃炎(均P<0.05)和胃癌前病变(均P<0.05),C/EBPα与Cx43表达呈正相关(胃癌前病变:r=0.679;胃癌:r=0.792,均P<0.05);实验组24,48 h的C/EBPα和CX43表达量在转录及蛋白水平均低于对照组(均P<0.05),且48 h表达量均低于24 h(均P<0.05)。结论:H.pylori感染可下调胃黏膜上皮细胞C/EBPα和CX43的表达,这可能与胃癌发生有关。

转录因子CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)的研究进展

CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer binding protein,C/EBPβ)是CCAAT增强子结合蛋白家族的一员。该家族是碱性亮氨酸拉链大家族的一个亚家族,在细胞分化、能量代谢、生长发育等多个进程中发挥作用。文章就C/EBPβ的结构、表达调控和生物学功能做一综述,并对研究应用进行了展望。

CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白在高血压全脑缺血大鼠海马区的表达

目的观察血压正常大鼠和自发性高血压大鼠全脑缺血后海马区CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)的表达变化,探讨其在高血压加重脑缺血神经损伤中的作用。方法分别取血压正常大鼠和自发性高血压大鼠,应用改良的Pulsineli 4血管阻断(4-VO)法制作全脑缺血再灌注模型。分别在脑缺血6、24、48h应用HE染色观察海马区神经细胞形态变化、免疫组织化学法和免疫印迹法检测海马区CHOP表达;在48h应用八臂迷宫检测动物行为学的变化。结果与血压正常脑缺血组比较,高血压脑缺血组各时间点存活神经细胞数量减少,6h和24hCHOP表达增多,48h减少;八臂迷宫检测动物总错误次数、参考记忆错误次数和工作记忆错误次数增多。结论高血压可加重脑缺血后神经损伤,其机制与加重CHOP表达增加有关。

小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化过程中过氧化物酶增殖物激活受体γ与CCAAT/增强子结合蛋白α的表达

背景:目前关于脂肪细胞分化的分子作用机制的研究较少。过氧化物酶增殖物激活受体和CCAAT/增强子结合蛋白家族的转录调控因子可诱导前脂肪细胞表达促进其分化成熟的多个转录因子,但其作用机制却罕见报道。目的:观察小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞过程中过氧化物酶增殖物激活受体γ和CCAAT/增强子结合蛋白α的表达,以及在脂肪细胞分化过程中的变化。方法:体外培养3T3-L1前脂肪细胞,采用经典激素鸡尾酒诱导法诱导细胞分化,诱导剂为1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、地塞米松和胰岛素。诱导后0,2,4,6和8d,用油红O染色和染色比色法分析脂肪细胞的分化程度,采用实时PCR和Western blot技术检测不同时间点的过氧化物酶增殖物激活受体γ和CCAAT/增强子结合蛋白α的表达。结果与结论:在前体脂肪细胞的分化过程中,随时间的延长相对脂肪含量、过氧化物酶增殖物激活受体γ与CCAAT/增强子结合蛋白α表达水平均明显升高(P<0.01)。说明在小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞过程中,过氧化物酶增殖物激活受体γ与CCAAT/增强子结合蛋白α对细胞分化可能起促进作用。

内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78及增强子结合蛋白同源蛋白在高血压大鼠全脑缺血海马区的表达变化

目的：观察血压正常大鼠和高血压大鼠全脑缺血再灌注后海马区CAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的表达变化，探讨内质网应激在高血压增加脑缺血再灌注神经易损性中的作用。方法：60只雄性血压正常Wistar-Kyoto（WKY）大鼠随机分为假手术组（Sham）和全脑缺血再灌注组（I／R）；另取30只雄性自发性高血压大鼠为高血压全脑缺血再灌注组（SHR＋I／R）。应用改良的Pulsineli 4血管阻断（4-VO）法制作全脑缺血再灌注模型。各组分别在术后6、24、48h，H-E染色观察海马区神经细胞形态变化；免疫组织化学和免疫印迹检测海马区CHOP、GRP78的表达；48h八臂迷宫检测动物行为学变化。结果：与Sham组比较，I／R组各时间点存活神经元数量降低；GRP78表达增高，24h达高峰CHOP表达增高，24h达高峰，高表达持续至48h；与I／R组比较，SHR＋IR组各时间点存活神经细胞数量降低GPR78表达6h增高，24、48h显著减少；6、24hCHOP表达增高，48h明显减少；八臂迷宫结果显示SHR＋I／R组与I／R组比较，各检测指标变化差异有统计学意义。结论：高血压可增加脑缺血再灌注神经易损性，与加重缺血再灌注后GRP78表达下降、CHOP活体表达增高有关。

CCAAT/增强子结合蛋白α对K562细胞分化和凋亡的影响及其机制

目的:研究CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein-alpha,C/EBPα)对K562细胞株分化和凋亡的影响及对相关基因的调控,为慢性粒细胞白血病的治疗提供新的治疗靶点。方法:将C/EBPα表达质粒pEGFP-C/EBPα及空载体对照质粒pEGFP分别经阳离子脂质体2000介导转染K562细胞,用G418筛选出C/EBPα稳定表达细胞株。Wright-Giemsa染色观察细胞形态学变化,FCM分析细胞表面分化抗原CD11b的表达、细胞周期及细胞凋亡,电子显微镜观察细胞凋亡,RT-PCR和Western印迹法检测细胞中相关基因Per2、cyclin B1和C-myc的表达。结果:筛选得到稳定表达C/EBPα的细胞株pEGFP-C/EBPα-K562。与空载体转染组及对照组细胞相比,转染组K562细胞分化明显,同时粒系细胞表面分化抗原CD11b表达增加;细胞周期分析发现,转染组细胞中G2期细胞增多,与空载体组和对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),同时出现细胞凋亡峰。细胞凋亡检测结果显示,转染组细胞凋亡明显增加(21.1%),与空载体组(6.0%)和对照组(4.2%)比较,差异有统计学意义(P<0.05);电子显微镜观察发现,转染组细胞中出现染色质浓集、断裂和核固缩等现象,并见凋亡小体;RT-PCR和Western印迹法检测发现,C/EBPα明显上调Per2 mRNA和蛋白表达,抑制cyclinB1、C-myc mRNA和蛋白的表达。结论:C/EBPα能促进K562细胞分化,并诱导细胞凋亡,其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控来实现的。

噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒增强子Ⅰ结合蛋白的研究

目的 通过筛选乙型肝炎病毒 (HBV)增强子Ⅰ (Enhl)结合蛋白 ,为HBV复制机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体展示技术 ,以HBV的增强子Ⅰ的聚合酶链反应 (PCR)产物DNA作为固相筛选分子 ,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 4轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,经噬斑的PCR扩增后 ,构建克隆载体 ,最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索。结果 噬菌体经富集后 ,从随机筛选的 12个克隆中得到 6个阳性克隆 ,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索 ,确定了和HBV增强子Ⅰ结合的肝细胞蛋白 ,共编码 3种蛋白。分别为 3 磷脂酰肌醇激酶相关蛋白激酶、人类血清白蛋白、核膜孔复合体相互作用蛋白。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了与HBV增强子Ⅰ结合的蛋白 ,分析了该蛋白的编码基因 ,可能是作用于增强子Ⅰ的反式作用因子 ,但它们对HBV增强子Ⅰ是否有转录调控作用还需进行进一步的研究证实。

胰岛素增强子结合蛋白1在小鼠胚胎心的时空分布

目的观察转录因子胰岛素增强子结合蛋白1（ISL1）在小鼠胚胎心的表达与心、第二生心区及前肠内胚层的发育。方法胚龄8~13d小鼠胚胎心共18个,连续石蜡切片,用抗心肌肌球蛋白重链（MHC）、抗ISL1、抗增殖细胞核抗原（PCNA）和抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）抗体进行免疫组织化学染色、免疫荧光染色和Western blotting检测。结果胚龄9d,ISL1阳性心前体细胞进入流出道远端。胚龄10d,ISL1阳性细胞延伸入流出道近端及静脉窦心肌。胚龄11~12d,心内ISL1表达量逐渐增多并达高峰,动脉端ISL1阳性细胞分布于流出道远端壁、心包内主肺动脉壁及主肺动脉隔,静脉端ISL1阳性细胞主要限于窦房结和静脉瓣。动脉端前肠内胚层细胞索增至最长,周围前生心区ISL1阳性细胞密度也达高峰,并且明显多于后生心区。胚龄13d,心内及第二生心区ISL1阳性细胞显著减少,内胚层细胞索趋于消失。结论 ISL1阳性细胞在小鼠胚胎心的表达主要集中在胚龄9~13d,其表达模式与第二生心区及前肠内胚层的发育密切相关。

鲤CCAAT增强子结合蛋白α基因的克隆与时空表达特征

CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)是脂肪细胞分化中起重要调控作用的转录因子。本研究利用逆转录PCR和RACE技术获得了体质量200~250 g鲤Cyprinus carpio C/EBPα基因全长cDNA序列为1463 bp,开放阅读框861 bp,编码286个氨基酸。C/EBPα蛋白质相对分子量32.5 KD,理论等电点(PI)为7.02。氨基酸同源性分析结果显示,鲤C/EBPα基因与斑马鱼Danio rerio同源性最高为93.36%,与小鼠同源性仅为52.47%。系统进化树结果显示,鲤C/EBPα氨基酸序列与鲫Carassius auratus聚为一支,同源性最高。实时荧光定量PCR检测表明,C/EBPα基因在成体鲤腹腔脂肪组织中表达量最高,肠组织次之,腹部肌肉中表达量最低;胚胎发育期,C/EBPα基因在心跳期表达量最高,七体节期次之,八细胞期最低。鲤C/EBPα基因序列的获得及表达特征研究为进一步深入研究鲤脂肪细胞分化及脂肪发育分子调控机制奠定了基础。

音猬因子与胰岛素增强子结合蛋白在小鼠胚胎呼吸系统的早期表达

目的探讨音猬因子信号通路成员与胰岛素增强子结合蛋白在呼吸系统的早期表达与其发育的联系。方法胚龄9.0~13d小鼠胚胎呼吸系统各年龄段不小于3个,连续石蜡切片,用抗音猬因子（Shh）、抗patched1（Ptcl）、抗smoothened（Smo）、抗胰岛素增强子结合蛋白（ISL1）和抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）抗体进行免疫组织化学染色。结果胚龄10d,Shh表达在前肠内胚层腹侧壁。胚龄11~12d,Ptc1表达在气管、支气管和肺内分支上皮。胚龄13d,Ptc1只表达在肺内分支上皮。胚龄9d,ISL1表达在前肠内胚层腹侧壁。胚龄10~12d,ISL1表达在前肠（气管）腹侧壁和支气管侧壁上皮及邻近的间充质内。胚龄13d,ISL1表达减弱,始终未见在肺内有阳性表达。胎龄12~13d,与气管后壁、支气管内侧壁上皮Ptc1表达减弱处相邻的间充质出现α-SMA阳性平滑肌细胞,其与对侧间充质ISL1阳性细胞的分布呈背-腹侧或内-外侧模式。气管腹侧及肺芽外侧间充质中可见ISL1与Smo共表达细胞。结论 ISL1在气管及肺芽的发育中可能与Shh信号系统协同发挥作用。

肺癌组织中CCAAT/增强子结合蛋白-α的表达变化及意义

目的观察转录因子CCAAT/增强子结合蛋白-α(C/EBPα)在肺癌中的表达变化,并探讨其意义。方法采用PV-9000免疫组织化学法,检测30例肺癌患者肺癌组织及其正常肺组织中C/EBPα的表达水平。结果 C/EBPα在肺癌组织中的表达较正常肺组织表达下调(χ2=28.71,P<0.05)。C/EBPα表达与肿瘤大小和肿瘤分化程度有关(P<0.05)。C/EBPα表达是肺癌患者5年总体生存率的独立预后影响因素,低表达患者平均生存期明显短于高表达患者。结论 C/EBPα在肺癌组织中低表达,与肺癌的大小、分化程度关系密切,可作为评估肺癌患者预后的有价值指标。

Sonic Hedgehog信号通路分子及胰岛素增强子结合蛋白在小鼠胚胎心流出道发育的早期表达

目的探讨胰岛素增强子结合蛋白(ISL-1)及音速波状蛋白(Sonic Hedgehog,Shh)信号通路分子在小鼠胚胎心流出道的早期表达特点与其发育的关系。方法取胚龄8-13 d小鼠胚胎心脏40例制作连续石蜡切片,应用抗音速波状蛋白(Shh)、抗Smoothened(Smo)、抗Patched(Ptc1)、抗Patched 2(Ptc2)、抗ISL-1、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体进行免疫组织化学及免疫荧光化学染色。结果胚龄8-9 d,Shh阳性表达于前肠腹侧内胚层,Ptc1和Ptc2在心管心肌呈较强阳性表达,ISL-1阳性细胞自心包腔背侧壁、前肠两侧间充质延伸至心管动脉端。胚龄10-13 d,前肠内胚层向腹侧延伸形成喉气管沟,并呈Ptc1和Ptc2强阳性表达,ISL-1和Smo双阳性细胞围绕喉气管沟形成对称的锥体形结构,其顶端突入动脉囊腔,形成主肺动脉隔,随发育进行,主肺动脉隔由ISL-1阳性表达逐渐转为α-SMA强阳性表达,并将动脉囊分隔为MHC阴性的心包内升主动脉和肺动脉干。结论 Shh信号通路与ISL-1阳性细胞共同参与小鼠胚胎心流出道的正常形态发生。

CCAAT/增强子结合蛋白α抑制人肝癌细胞内的肝刺激因子表达

目的探讨CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)对人肝癌细胞内肝刺激因子(hepatic stimulator substance,HSS)表达的影响及其在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)抑制HSS表达过程中的作用。方法采用凝胶迁移电泳实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)研究C/EBPα与HSS启动子的体外相互作用,real-time PCR和Western blotting的方法测定hHSS mRNA和蛋白质表达情况。结果 EMSA实验证实C/EBPα可以与hHSS启动子-343/-330区域内的C/EBPα结合位点结合,对hHSS表达具有负性调节作用,C/EBPαsiRNA转染入HepG2细胞后,hHSS mRNA和蛋白质表达均升高。但C/EBPα表达下降并不影响EGF对hHSS表达,而EGF不改变C/EBPα的活性和表达。结论 C/EBPα可通过C/EBP位点抑制hHSS的表达,但不参与EGF对hHSS的转录调节过程。

增强子结合蛋白家庭的一个新基因HP8定位于人19号染色体长臂13.1-13.2区带

目的:探讨增强子结合蛋白(C/EBP)家族一个新基因HP8的人染色体定位.方法:按常规方法制备分裂期人淋巴细胞切片,用生物素标记HP8基因 3’-端 2.1kb cDNA作探针,进行荧光原位杂交(FISH).对FISH信号及染色体上DAPI结合条带同时拍照,二者重迭信号进行计数,结果:100个有丝分裂图中,有72个显示阳性信号位于同一对染色体,并且无其他非特异性杂交带,杂交效率约为70%.参照DAPI结合条带,阳性信号位于人19号染色体长臂13.1-13.2区带.结论:HP8基因定位于人19号染色体长臂 13.1-13.2区带.

人CCAAT增强子结合蛋白β抑制骨肉瘤细胞增殖

目的:构建带Myc标签的CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)的真核表达载体,并检测其对骨肉瘤细胞增殖的影响。方法:应用PCR技术从人乳腺文库中扩增C/EBPβ全长编码区基因,并克隆到pXJ-40载体中;将重组质粒转染人胚胎肾293T细胞,采用SDS-PAGE和Western印迹鉴定蛋白表达;另将重组C/EBPβ质粒转染入骨肉瘤细胞系U20S,生长实验检测其对肿瘤细胞增殖的影响。结果:基因测序和双酶切鉴定表明,Myc-C/EBPβ真核表达质粒构建成功;SDS-PAGE和Western印迹结果显示,Myc-C/EBPβ转染人胚胎肾293T细胞后获得表达;生长实验证明C/EBPβ具有抑制骨肉瘤细胞增殖的功能。结论:构建了Myc-C/EBPβ的真核表达载体,为全面了解C/EBPβ的生物学功能及调控机理奠定了基础。

内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白在甲亢性肌病中的作用

目的:探讨内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)在甲亢性肌病中的作用。方法:选取2020年2月至2021年6月在南宁市第一人民医院初次诊断的急性甲亢性肌病患者21例,单纯甲亢患者30例,同时选取健康者25例作为正常对照组。比较3组血清促甲状腺素(TSH)、游离甲状腺素(FT_(4))、游离三碘甲状腺原氨酸(FT_(3))和促甲状腺受体抗体(TRAb)水平,提取外周静脉血RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测PERK、CHOP mRNA的表达水平。结果:与单纯甲亢组比较,TRAb、FT_(4)、FT_(3)、PERK、CHOP mRNA水平在急性甲亢性肌病组中增高(P<0.01)。在急性甲亢性肌病中,TRAb与PERK、CHOP mRNA表达水平呈正相关关系(r=0.898,P<0.01;r=0.897,P<0.01)。结论:内质网应激PERK、CHOP可能在急性甲亢性肌病发病的过程中起着重要的作用,TRAb结合PERK、CHOP有利于早期判断急性甲亢性肌病。