猪CCAR1基因细胞定位、表达特性及对细胞增殖的影响

旨在获得猪CCAR1基因的完整CDS序列,研究其亚细胞定位和表达特性,探究其对细胞增殖的影响和作用机制。本研究以1日龄马身猪肾组织cDNA为模板,采用RT-PCR技术分段扩增猪CCAR1基因的CDS区,通过测序和序列拼接获得完整CDS区;采用细胞免疫荧光技术检测CCAR1在PK15细胞中的定位;采用qRT-PCR技术检测猪CCAR1基因的时空表达规律;采用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除PK15细胞的CCAR1基因,通过qRT-PCR、Western blot以及CCK8(cell counting kit 8)技术检测CCAR1基因敲除对细胞增殖能力及细胞增殖和凋亡相关基因表达的影响。结果表明,猪CCAR1基因的完整CDS区长3459 bp(MH301308.1),在PK15细胞的细胞质和细胞核中均有表达。大白猪和马身猪不同组织CCAR1的表达谱基本相似,在所检测的组织中均有表达,均表现为在肾和小肠中表达量最高,在脾、肝、小脑和肌肉中呈中度表达,在心和皮下脂肪中低表达;CCAR1基因在大白猪和马身猪初生、3月龄和6月龄3个年龄阶段的两种骨骼肌中也均有表达。CRISPR/Cas9基因编辑系统能有效降低CCAR1的表达,在转染48 h后,相比于对照组,试验组都对细胞增殖产生极显著抑制(P<0.01);CCAR1基因敲除后,细胞增殖标记基因Mki67表达水平显著下降(P<0.05),Wnt通路下游靶基因C-myc表达量显著下降(P<0.05),Wnt通路核心蛋白β-catenin和凋亡标记基因Caspase3的表达量无显著差异。CCAR1基因在猪不同组织和不同发育阶段均有表达,可能通过调控细胞增殖基因Mki67和Wnt通路下游靶基因C-myc的表达而影响细胞增殖,在猪的生长发育过程中起重要作用。

凋亡相关因子CCAR1、Par-4在胃腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨胃腺癌组织细胞周期与细胞凋亡调控蛋白1(CCAR1)、前列腺凋亡反应基因-4(Par-4)的表达情况及临床意义。方法:应用免疫组化SP法检测60例胃腺癌组织和40例癌旁正常胃黏膜中CCAR1蛋白、Par-4蛋白的表达情况,分析二者与胃腺癌临床病理参数的关系及胃腺癌组织二者表达的相关性。结果:CCAR1蛋白在胃腺癌组织中的阳性表达率明显高于正常胃黏膜,Par-4蛋白在胃腺癌组织中的阳性表达率明显低于正常胃黏膜,差异有统计学意义(P<0.05)。胃腺癌组织中CCAR1蛋白的表达与分化程度有关(P<0.05),Par-4蛋白的表达与胃腺癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。Spearman相关分析显示,胃腺癌组织CCAR1蛋白和Par-4蛋白表达无明显相关性(r=-0.08,P>0.05)。结论:Par-4与CCAR1均参与了胃腺癌的发生和进展过程,但二者在胃腺癌的发生过程中可能受不同机制的调控。

反推力装置适航符合性验证思路研究

适航条款CCAR25.933要求限制反推力装置的任何不利影响。本文研究了采用等效安全来表明对适航规章CCAR25.933(a)(1)符合性的验证思路。结合某机型的符合性验证实例,研究了进行条款等效安全判定的定性和定量安全性分析要求,考虑发动机非包容性转子损坏特定风险,并进行了特殊风险分析。