结直肠癌患者外周血中CCDC12检测的意义

目的检测CCDC12在结直肠癌患者外周血中的水平,对其临床意义进行探讨。方法 80例行结直肠癌根治术的患者为手术组,70例确诊的术后复发的患者为复发组,酶联免疫法(ELISA)检测手术组患者术前、术后2周及复发组患者外周血CCDC12、多配体蛋白聚糖-1(SDC-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的水平;同时检测同期体检的健康者50例为对照组,检测外周血CCDC12、SDC-1、MMP-9水平。免疫组化技术检测手术组、复发组肿瘤组织及癌旁正常结直肠黏膜中CCDC12、SDC-1、MMP-9的水平。结果手术组术前、复发组、对照组外周血CCDC12、SDC-1、MMP-9水平有显著差异,复发组水平最高,手术组术前次之,对照组最低(P<0.05);手术组术后CCDC12、SDC-1、MMP-9均比术前明显下降(P<0.05),与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示CCDC12、MMP-9在手术组、复发组肿瘤组织中阳性率差异无统计学意义(P>0.05),均高于正常结直肠黏膜(P<0.05);SDC-1在3组中阳性率存在明显差异,复发组最低、手术组次之,在正常结直肠黏膜中阳性率最高(P<0.05)。Spearman分析显示CCDC12、SDC-1在手术组肿瘤组织与术前外周血中存在正相关;手术组肿瘤组织中CCDC12与MMP-9呈正相关,在手术组术前外周血中CCDC12与SDC-1、CCDC12与MMP-9均呈正相关(P<0.05)。结论检测结直肠癌患者外周血CCDC12表达可能作为新的肿瘤标志物反映患者的病情,CCDC12可能与SDC-1、MMP-9协同作用参与了结直肠癌的进展。

CCDC12蛋白在结直肠癌组织表达情况与肿瘤化疗药物抵抗的关系

目的探讨结直肠癌组织中CCDC12蛋白表达与肿瘤细胞化疗效果的关系及意义。方法留取84例结直肠癌手术患者的肿瘤及癌旁正常肠黏膜的石蜡组织及新鲜组织,免疫组化技术检测CCDC12蛋白、多药耐药蛋白1(MRP-1)、P-糖蛋白(P-gp)、生存素(Survivin)、凋亡酶激活因子-1(Apaf-1)的表达情况;噻唑蓝(MTT)法检测氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(CDDP)、奥沙利铂(L-OHP)对肿瘤细胞的抑制作用。另取20例结直肠癌患者的肿瘤及癌旁正常肠黏膜新鲜标本,蛋白印迹法(Western blotting)检测CCDC12、MRP-1、P-gp、Survivin、Apaf-1的表达情况。结果免疫组化结果显示CCDC12、MRP-1、P-gp、Survivin在结直肠癌组织中表达均明显高于癌旁正常肠黏膜,Apaf-1在结直肠癌组织中表达降低(均P<0.05)。5-Fu、L-OHP对CCDC12阳性表达的结直肠癌细胞抑制率低于阴性表达者(均P<0.05),而CDDP对肿瘤细胞的抑制作用与CCDC12表达无明显关系(P>0.05)。5-Fu对结直肠癌细胞的抑制情况与MRP-1、P-gp表达有关;CDDP对肿瘤细胞的抑制情况与Survivin有关;L-OHP对肿瘤细胞的抑制作用与Survivin、Apaf-1有关(均P<0.05)。相关分析显示,结直肠癌组织中CCDC12蛋白与P-gp、Survivin均呈正相关,与Apaf-1呈负相关(均P<0.05)。Western blot结果与免疫组化相符。结论 CCDC12蛋白在结直肠癌组织中表达增高并与化疗药物的效果有关,CCDC12蛋白参与了结直肠癌的耐药形成并可能成为耐药性逆转的靶蛋白。

抑制CCDC12基因对结直肠癌细胞HCT116凋亡影响机制研究

目的卷曲螺旋结构域(coiled-coil domain containing,CCDC)结构基因家族与一部分肿瘤关系密切,但CCDC12与结直肠癌的关系还不明确。本研究探讨CCDC12基因对结直肠癌细胞HCT116凋亡的影响及其可能机制。方法 clone-67小干扰RNA(clone-67-siRNA)转染结肠癌细胞系HCT116抑制CCDC12表达;通过细胞计数法CCK-8检测细胞增殖情况;通过流式细胞术检测凋亡率;RT-qPCR和蛋白质印迹法检测对照组、con-siRNA组及转染组HCT116细胞CCDC12、PI3K、p-AKT和mTOR基因和蛋白表达。采用SPSS 17.0进行统计分析,分别采用t检验或单因素方差分析来比较各组间统计学差异。结果 clone-67-siRNA能有效沉默HCT116细胞CCDC12基因的表达,clone-67-siRNA沉默细胞中CCDC12基因后24h检测到CCDC12基因表达为(35.68±2.97)%,48h表达为(76.25±3.03)%,72h表达为(54.33±1.51)%。抑制HCT116细胞中CCDC12表达后,转染组细胞活性(74.52±11.46)%明显低于对照组(100±14.33)%和con-siRNA组(95.97±13.53)%,F=10.825,P<0.001;凋亡率clone-67-siRNA组为(26.30±3.57)%,明显高于对照组的(13.10±2.15)%和con-siRNA组的(11.66±1.77)%,F=28.640,P<0.001。clone-67-siRNA转染HCT116后细胞中CCDC12、PI3K、p-AKT和mTOR的表达均降低,RT-qPCR结果(FCCDC12=38.796,PCCDC12<0.001;FPI3 K=25.538,PPI3 K=0.001;FPI3 K=23.074,PPI3 K=0.002;FPI3 K=29.372,PPI3 K=0.001)和蛋白质印迹结果(FPI3 K=12.077,PPI3 K=0.008;FPI3 K=16.470,PPI3 K=0.004;FPI3 K=25.455,PPI3 K=0.001)符合。结论利用clone-67-siRNA抑制结直肠癌HCT116细胞CCDC12基因后可以显著抑制细胞活性,并增加细胞凋亡,其机制可能通过PI3K-AKT-mTOR信号通路途径影响。

外周血CCDC12基因甲基化在乳腺癌早期体外诊断中的价值

目的探究外周血CCDC12基因甲基化水平在乳腺癌早期诊断中的价值。方法采用接近1∶1配比的病例对照研究。收集中国医学科学院肿瘤医院、四川大学华西医院、郑州大学第一附属医院3个中心2018年4月至2022年12月乳腺癌患者和健康对照人群的外周血样本,采用飞行时间质谱法测定外周血CCDC12甲基化水平,通过logistic回归分析其与早期乳腺癌的相关性,非参数检验比较乳腺癌的各分子亚型和对照组的甲基化水平,受试者工作特征(ROC)曲线下面积评估该基因甲基化诊断乳腺癌的效能。结果最终纳入289例中位数年龄为50.0岁(42~56岁)的女性乳腺癌病例及320例中位数年龄为46.0岁(40~55岁)的健康女性对照。逻辑回归分析结果显示,CCDC12_CpG_6、CCDC12_CpG_7、CCDC12_CpG_10、CCDC12_CpG_11四个位点的高甲基化与乳腺癌密切相关(OR分别为1.26、1.18、1.20,P<0.02),按50岁年龄分层得到相似的结果;即使在早期乳腺癌中该基因的甲基化水平也显著升高(CCDC12_CpG_6、CCDC12_CpG_7、CCDC12_CpG_10、CCDC12_CpG_11,OR:1.16~1.21,P<0.05);与对照组相比,以上四个位点的甲基化水平在人表皮生长因子受体2(HER2)扩增型乳腺癌患者中显著升高(P<0.002)。结论CCDC12基因高甲基化与乳腺癌的发生密切相关,可作为乳腺癌早期诊断的一个指标。

苍术酮对结直肠癌细胞HT29凋亡的机制

目的探讨苍术酮对结直肠癌细胞HT29细胞的凋亡作用及其可能的相关机制。方法应用细胞计数-8(cell counting kit-8,CCK-8)试剂盒法观察1、3、10、30、100 mmol/L苍术酮对结直肠癌细胞HT29的抑制作用,并应用流式细胞术AV-PI法检测苍术酮介导细胞的凋亡作用;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测苍术酮作用HT29细胞后卷曲螺旋结构域12(CCDC12)基因和蛋白表达,RT-q PCR和蛋白印迹(Western blot)检测苍术酮作用HT29细胞后磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3 K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)基因和蛋白表达变化。结果苍术酮能抑制HT29细胞的增殖作用,并呈现剂量依赖性。苍术酮介导的凋亡率与对照组相比显著增加。苍术酮作用后HT29细胞的CCDC12基因表达下降,而PI3K、p-AKT和m TOR基因和蛋白表达下降(P<0.05)。结论苍术酮抑制结直肠癌HT29细胞的增殖,并能介导凋亡,其机制可能通过降低CCDC12和PI3K、p-AKT和m TOR表达来介导的。

结直肠癌组织中卷曲螺旋结构域12蛋白表达与肿瘤生长侵袭的关系

目的观察结直肠癌组织中卷曲螺旋结构域12(CCDC12)蛋白的表达情况,并探讨CCDC12蛋白与肿瘤生长侵袭的关系。方法免疫组织化学SP法检测94例结直肠癌组织及癌旁正常肠黏膜组织中CCDC12蛋白的表达,同时检测与肿瘤生长侵袭有关的蛋白质Cyclin D1、P21、MMP-9及TIMP-1蛋白表达。记录患者肿瘤生物学特征,分析CCDC12蛋白与结直肠癌生物学特征及Cyclin D1、P21、MMP-9及TIMP-1蛋白的关系。结果 CCDC12、Cyclin D1、MMP-9及TIMP-1蛋白在结直肠癌组织中阳性表达率均高于癌旁正常肠黏膜组织(χ~2=38.480、30.312、38.368及7.667,均P<0.01),P21蛋白在两种组织中差异无统计学意义(χ~2=0.862,P=0.353)。在结直肠癌组织中CCDC12蛋白阳性表达与肿瘤细胞分化、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(χ~2=5.130、5.902、9.760及4.458,P=0.024、0.015、0.002及0.035)。Spearman相关性分析发现,CCDC12与Cyclin D1、MMP-9蛋白表达呈正相关(r=0.302和0.365,P=0.003和0.001),CCDC12与P21表达呈负相关(r=-0.287,P=0.005)。结论结直肠癌中存在CCDC12蛋白表达增高现象,CCDC12可能通过与Cyclin D1、P21及MMP-9蛋白的相互作用参与了结直肠癌的生长及侵袭过程。