羌活水提物预先给药对CCI大鼠神经病理性疼痛的预防作用及机制研究

目的探讨羌活水提物预先给药对神经慢性结扎损伤(CCI)大鼠神经病理性疼痛的预防作用及机制研究。方法将50只SD大鼠按随机数字表分为假手术组、模型组、羌活低剂量组、羌活中剂量组和羌活高剂量组,制备CCI大鼠模型,假手术组只暴露神经不进行结扎。羌活各剂量组给予不同剂量羌活水提物,假手术组和模型组给予等量生理盐水。术后14 d,大鼠进行机械痛阈测定后处死,取脊髓腰膨大L4～L6节段,检测并比较不同组大鼠脊髓组织中三叉神经节嘌呤能P2X4受体(P2X4R)、转录因子-κB(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果与假手术组比较,术后其余各组机械痛阈均降低,脊髓组织中P2X4R、NF-κB、IL-1β和TNF-α表达水平均增高,差异具有统计学意义(P <0.05);与模型组比较,术后羌活各剂量组机械痛阈均增加,脊髓组织中P2X4R、NF-κB、IL-1β和TNF-α表达水平均降低,差异具有统计学意义(P <0.05);羌活各剂量组机械痛阈随羌活剂量的增加而增加,脊髓组织中P2X4R、NF-κB、IL-1β和TNF-α表达水平随羌活剂量的增加而均降低,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论羌活水提物能缓解大鼠神经病理性疼痛,其作用机制可能与抑制脊髓中P2X4R的表达,降低了NF-κB和促炎因子水平有关。

CCI模型大鼠疼痛行为学观察

目的:探讨CCI(Chronic constrictive injury)模型大鼠一般行为学及痛阈变化。方法:SD(Sprague-Dawley)大鼠48只,6～8周龄,雄性,体重180～200g。随机分为三组,即正常对照组(Nave组:n=16,分7、14d亚组,每亚组8只)、假手术组(Sham组,n=16,分7、14d亚组,每亚组8只)以及CCI组(n=16,分7、14d亚组,每亚组8只)。按Bennet和Xie方法制作CCI模型,通过von Frey测定大鼠神经结扎侧(左侧)及对侧(右侧)后足缩足反射阈值(Mechanical withdrawal threshold,MWT)。结果:与假手术组和正常对照组比较,CCI组大鼠术侧痛阈在术后第3、6、8、10、13天明显降低,且低于术前基础值。结论:CCI大鼠行为学的改变与痛阈的变化有一定联系。

环氧合酶-2抑制药塞来昔布对CCI模型大鼠疼痛及PI3K/AKT通路的影响

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制药塞来昔布对坐骨神经慢性结扎损伤(CCI)模型大鼠疼痛及正磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)通路的影响。方法:制备CCI大鼠模型,随机分为模型组、塞来昔布低(20 mg·kg^-1)、中(40 mg·kg^-1)、高(60 mg·kg^-1)剂量组、加巴喷丁(100 mg·kg^-1)组,每组12只;另取12只设为假手术组。以机械性疼痛刺激实验、热敏实验、神经传导速率实验分别检测各组大鼠缩爪阈值、热敏潜伏期、神经传导速度;以酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒检测血清中白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;免疫印迹实验检测脊髓组织中PI3K/AKT通路蛋白(PI3K、pPI3K、AKT、p-AKT)表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠缩爪阈值、热敏潜伏期、神经传导速度明显降低(P<0.05),IL-6及TNF-α水平、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT明显增高(P<0.05);与模型组比较,塞来昔布低、中、高剂量组及加巴喷丁组大鼠缩爪阈值、热敏潜伏期、神经传导速度明显升高(P<0.05),IL-6及TNF-α水平、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT明显降低(P<0.05),塞来昔布各组呈剂量依赖性(P<0.05);塞来昔布高剂量组与加巴喷丁组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:COX-2抑制药塞来昔布可降低CCI模型大鼠炎症反应,减轻疼痛,改善其临床症状,可能是通过下调PI3K/AKT通路实现的。

不同材料制备大鼠神经病理性疼痛CCI模型的比较

目的比较肠线、丝线、PE套管3种材料制备的CCI模型的造模效果。方法用肠线、丝线4道轻结扎大鼠坐骨神经干,或用PE90套管造成大鼠坐骨神经干慢性压迫性损伤,测定伤足底热痛阈和机械痛阈评定模型的效果。结果3种材料造模后d9和d15测定热痛阈和机械痛阈,比造模前均下降,其中肠线CCI模型对热痛阈的影响强于丝线或PE管CCI模型(d9,P<0·05;d15,P<0·01)。3种材料制备的CCI模型间机械痛阈差异无显著性。结论3种材料均可造成满意的CCI模型,但肠线造模的效果优于丝线和PE管。

手法对CCI模型大鼠局部镇痛作用及其机制的实验研究

目的:探讨手法对神经病理性疼痛模型大鼠局部镇痛作用效果及其作用机制,为手法镇痛提供理论依据。方法:将32只SPF级雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组、手法组,每组8只。除假手术组外,其他各组建立坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)大鼠模型。建模成功后,针刺组给予针刺治疗,手法组给予手法治疗。观察手法对大鼠疼痛阈值的影响及手法治疗后施术局部β-内啡肽的含量。结果:大鼠造模后,表现出跛行、抬足、舔足等痛觉过敏表现,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。手法能明显提高神经病理性疼痛大鼠的疼痛阈值(P<0.05);给予手术大鼠手法治疗后,针刺组和手法组大鼠病灶局部β-内啡肽含量明显升高,与假手术组及模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。手法组和针刺组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:手法对CCI模型大鼠局部镇痛效果显著,其作用机制可能是通过升高施术局部β-内啡肽的含量而达到镇痛效果。

跑台训练促进可控性皮质损伤大鼠髓鞘再生

目的:研究跑台训练对可控性皮质损伤(CCI)大鼠髓鞘再生的影响。方法:通过撞击法制备CCI大鼠模型,进行8周跑台训练,采用改良的神经功能严重程度评分法检测神经功能缺损,利用平衡木实验检测大鼠的运动功能,使用酶联免疫吸附试验(ELISA)和RT-qPCR方法检测运动皮质中(BDNF)的表达,利用Western Blot方法检测胼胝体中髓鞘碱性蛋白(MBP)、髓鞘少突胶质细胞糖化蛋白(MOG)和髓鞘蛋白脂蛋白(PLP)的表达。结果:跑台训练改善了CCI损伤大鼠的神经功能评分和运动功能,增加了运动皮质中BDNF的表达,同时MBP、MOG和PLP表达上调。结论:跑台训练通过上调BDNF促进髓鞘修复,从而改善CCI损伤引起的神经功能缺损。

丝线、羊肠线及结扎道数对大鼠CCI疼痛模型的影响

通过比较丝线、羊肠线2种不同材料和不同结扎道数对大鼠CCI疼痛模型痛阈值的影响,优化筛选出更易在实验过程中普及的技术方法 .将42只SD雄性大鼠随机分成7组,包括结扎丝线4道、3道与2道3个组;结扎羊肠线4道、3道与2道3个组和1个假手术组,每组6只大鼠.铬制羊肠线和丝线分别结扎大鼠左侧坐骨神经2道、3道、4道;假手术组只暴露左侧坐骨神经,不进行结扎处理.建模成功后测量各组大鼠的机械性缩足反应阈值(MWT),发现丝线3道、4道组和羊肠线2道、3道、4道组与假手术组和自身基础的MWT有极显著差异(P<0.01);假手术对照组、丝线2道组与各组自身基础的MWT之间没有差异(P>0.05),结扎手术前后的MWT之间差异显著,结扎后第7天、14天和21天的MWT之间没有差异.羊肠线3组之间没有显著性差异(P>0.05).由此可得出结论:羊肠线2道、3道、4道组,以及丝线3道、4道组均能产生稳定的神经痛,根据MWT的数值大小和是否出现自噬现象可认为,以羊肠线结扎2道组最好,不但MWT的数值小,且操作简便又节省时间,可作为大鼠CCI建模的首选方法 .

维拉帕米增强氯胺酮对神经病理性疼痛的拮抗作用

目的探讨钙通道拮抗剂维拉帕米对静脉全麻药氯胺酮拮抗神经病理性疼痛的影响。方法 48只健康♂大鼠随机分为正常对照组(N)、假手术组(S)、疼痛模型组(M)、氯胺酮给药组(K)、维拉帕米给药组(V)以及维拉帕米和氯胺酮联合给药组(V+K)共6组,通过大鼠坐骨神经松扎制备坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)神经病理性疼痛模型。各组大鼠从手术后d1～14每天腹腔注射相应不同的药物,N、S和M组大鼠给予生理盐水,K组大鼠给予10μg.g-1的氯胺酮溶液,V组大鼠给予5μg.g-1的维拉帕米溶液,V+K组先给予维拉帕米(5μg.g-1)溶液,20 min后再给予氯胺酮溶液。在手术前1 d和手术后1、3、7、11 d和14 d给药后10 min分别用Hargreaves法测量热缩足潜伏期,VonFrey细丝测量机械刺激缩足反射阈值。结果在手术前各组之间的痛觉无差异,在手术和给药后各时间点模型组大鼠的热缩足潜伏期和机械刺激缩足反射阈值均降低,而氯胺酮改善了CCI大鼠的热痛觉过敏和机械痛觉超敏,维拉帕米单独给药对CCI大鼠的痛觉无影响,但联合用药时维拉帕米增强了氯胺酮的镇痛效应。结论维拉帕米能够增强氯胺酮拮抗CCI大鼠神经病理性疼痛的作用。

川芎嗪对慢性压迫性损伤大鼠神经病理痛行为学的影响

目的探讨川芎嗪对慢性压迫性损伤(CCI)大鼠行为学的影响。方法建立大鼠坐骨神经CCI神经病理痛模型,取40只雄性大鼠随机分成4组,Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ组为假手术组,Ⅲ组为CCI+川芎嗪治疗组,Ⅲ组在术后第1天开始腹腔注射100 mg/kg川芎嗪注射液,Ⅳ组为CCI手术组。分别于术前(0 d)及术后1、3、5、7、91、1、14 d以von Frey细丝法和热辐射法测定机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL),观察CCI大鼠神经病理痛的行为学变化。结果术后14 d,Ⅳ组和I、Ⅱ、Ⅲ组相比较,大鼠后爪的机械和热痛敏阈值明显降低(P<0.01);I、Ⅱ、Ⅲ组之间相比,大鼠后爪的机械和热痛敏阈值差异没有显著性(P>0.05)。结论川芎嗪可以缓解CCI大鼠的慢性神经病理痛行为学表现。

不同电压脉冲射频对慢性坐骨神经压迫损伤大鼠模型下丘脑β-内啡肽的影响

目的:观察不同电压脉冲射频(pulsed radiofrequency,PRF)对慢性坐骨神经压迫损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠模型下丘脑β-内啡肽含量的影响,探讨脉冲射频的镇痛机制。方法:雄性SD大鼠72只建立CCI疼痛模型后,随机分为4组(n=18):假刺激组H0、PRF低电压组H1(45 V)、PRF中电压组H2(55 V),PRF高电压组H3(65 V)。PRF组:制模后7 d对其坐骨神经结扎近端行PRF,脉宽20 ms,频率500 k Hz,脉冲频率2 Hz,持续时间2 min,治疗电压分别为45 V、55 V、65 V。假刺激组:制模后7 d在相同位置放置射频电极,但无脉冲治疗,持续时间2 min。制模前、制模后7 d、PRF后1、7和14 d测定大鼠疼痛行为学变化。PRF后1、7和14 d,每组各处死6只大鼠,测定不同时间点大鼠下丘脑中β-内啡肽表达量。结果:脉冲射频组在治疗后1天、7天和14天,与假刺激组比较,热痛阈均明显提高(P<0.01)。其中术后第7日,中、高电压组明显高于低电压组,差异具有统计学意义(P<0.01);在实验结束时,与假刺激组大鼠比较,术后第1天,7天和14天,低、中、高电压组大鼠下丘脑β-内啡肽含量明显升高(P<0.01);术后第7、14天,与低电压组相比,中、高组大鼠下丘脑β-内啡肽含量明显升高(P<0.01);术后第14日,高电压组与中电压组相比,存在显著差异(P<0.01)。结论:电压45 V、55 V、65 V的2 Hz脉冲射频均可引起CCI大鼠热痛阈的升高,可能与其增加下丘脑β-内啡肽的含量有关;脉冲射频电压大于55 V时,治疗效果没有进一步改善。

拨法对坐骨神经慢性压榨性损伤模型大鼠感觉功能的影响

目的:探讨拨法对坐骨神经慢性压榨性损伤(CCI)模型大鼠感觉功能的影响。方法:SD雄性大鼠48只随机分为正常组、假手术组、模型组和拨法组,每组12只,采用CCI制作实验性坐骨神经慢性压迫性损伤模型,拨法组大鼠进行推拿拨法治疗,其余组不做处理。造模后7 d和28 d对所有大鼠进行光热耐痛阈实验,神经电生理检测坐骨神经运动传导速度(MCV)和感觉传导速度(SCV),取材做坐骨神经HE染色。结果:造模后7 d,拨法组的光热耐痛阈数值和坐骨神经MCV、SCV均与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05);28 d后,拨法组的光热耐痛阈数值和坐骨神经MCV、SCV均高于模型组(P<0.05),且逐渐接近正常组水平。结论:拨法可明显促进CCI模型大鼠坐骨神经感觉功能的恢复,加快神经传导速度,升高光热耐痛阈值,缓解痛觉功能障碍。

脑皮质撞击法致创伤性脑损伤大鼠模型的构建

目的通过脑皮质撞击法构建不同损伤程度创伤性脑损伤大鼠模型,以探讨脑皮质撞击仪参数的选取,为创伤性脑损伤的研究提供实验基础。方法雌性SD大鼠48只,随机等分为6组:即T1模型组、T2模型组、T3模型组、T4模型组、T5模型组(打击深度分别为1、2、3、4、5 mm)和正常对照组。模型组应用皮质和打击仪,通过设定共同的打击速率(5 m/s)、共同的打击最低点持续时间(200 ms)和不同的打击深度,造成不同程度的创伤性脑损伤,对照组不进行任何操作。术后24 h进行神经功能损伤评分(m NSS)、网屏实验评分和旷场试验评分。结果各TBI模型组的m NSS评分与对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05),随着打击深度的增加,评分依次增高,但T1组与T2组差异无统计学意义(P<0.05);T2组、T3组、T4组和T5组的网屏实验评分与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);旷场试验中,各TBI模型组仅T3组垂直得分与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。水平得分和大便粒数两项指标,各组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论以5 m/s为打击速率,200 ms为打击最低点持续时间,打击深度分别为1、3、4 mm可有效构建模拟轻、中、重度创伤性脑损伤的大鼠模型。

痛必定冻干粉针对脊髓中枢的镇痛作用及其机制

目的:研究痛必定冻干粉针对慢性结扎损伤(CCI)模型活体大鼠脊髓在体WDR神经元的作用,阐明痛必定的脊髓中枢镇痛机理,从细胞水平研究痛必定是否具有药物依赖性。方法:采用电生理细胞外记录技术,在CCI活体大鼠的脊髓腰膨大节段,寻找并记录给予痛必定20mg·kg-1前以及给药后不同时间段同一活体WDR神经元的电活动:观察给药前以及给药后2、4、8和10min同一活体WDR神经元的C反应放电数;观察给药前及给药后1、2、4和6min同一活体细胞的自发放电数;观察wind-up现象。结果:C反应放电数共记录到8个细胞,给药后2、4、8和10min与给药前平均C反应放电数比较差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。观察细胞的自发放电数共记录到12个细胞,其中6个在给药后立即停止自发放电,6个在给药后6min以内放电停止,给药后2和4min与给药前平均自发放电数比较差异有显著性(P<0.01)。实验共观察到5次wind-up现象,给药后此现象均被抑制。结论:痛必定冻干粉针的脊髓中枢镇痛是通过对WDR神经元的作用来完成的,本研究从细胞水平证实痛必定无药物依赖性。

依那西普对慢性坐骨神经损伤大鼠机械性痛阈的影响

目的观察依那西普对大鼠坐骨神经结扎(CCI)模型机械性痛阈影响和肿瘤坏死因子TNF-α表达变化,探讨治疗神经病理性疼痛的可能方法。方法通过结扎大鼠一侧坐骨神经建立坐骨神经损伤的神经病理性疼痛模型,随机分为依那西普实验组和生理盐水对照组,腹腔给予1 mg依那西普或等量生理盐水对照,观察术前和术后1、3、7、14 d大鼠机械性痛阈变化即机械缩足反射阈值(MWT),采用酶联免疫法(ELISA)定量测量CCI大鼠损伤坐骨神经TNF-α表达变化。结果依那西普组CCI大鼠在第1、3和7天的损伤坐骨神经TNF-α表达明显低于对照组,在第7、14天的机械缩足反射阈值明显高于对照组(P<0.05或0.01)。结论依那西普抑制CCI大鼠损伤坐骨神经结扎TNF-α表达,减轻神经病理性疼痛模型CCI大鼠的机械性痛阈。