CCK-8法与MTT法检测人前列腺癌PC3细胞活性的比较研究

目的探讨CCK-8法和MTT法的最佳实验条件。方法以人前列腺癌PC3细胞作为研究对象,采用CCK-8和MTT法检测抗肿瘤药物阿霉素(ADM)对PC3细胞增殖的影响。结果 CCK-8法的最佳检测波长为450 nm,最佳检测时间为加入CCK-8试剂后4 h,适宜细胞数量范围为8×102～1×105个。结论 CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测细胞增殖活性的方法。

中风星蒌通腑胶囊介导CCK-8调控IL-10/STAT3信号通路改善脑出血小鼠的炎症损伤

目的探讨中风星蒌通腑胶囊介导胆囊收缩素八肽(CCK-8)对白细胞介素10(IL-10)/信号转导与转录激活子3(STAT3)信号通路对脑出血小鼠的脑部炎症反应的调控作用及机制。方法将110只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组、脑出血组及中风星蒌通腑胶囊低、中、高剂量组,每组22只。采用胶原酶法建立脑出血模型,模型复制2 h后进行中风星蒌通腑胶囊混悬液灌胃(10 mL·kg^(-1)),假手术组与脑出血组灌以等量的生理盐水。记录小鼠的神经功能学评分及左转率;于术后72 h采用干湿质量法检测脑含水量;于术后72 h采用Western Blot法检测小鼠血肿周围肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)以及Janus激酶1(JAK-1)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)通路蛋白的相对表达水平;于术后第3、5天采用Elisa法检测小鼠CCK-8的相对表达水平;采用荧光定量PCR(qPCR)法检测IL-10、STAT3的mRNA的表达水平。结果与脑出血组比较,中风星蒌通腑胶囊低、中、高剂量组干预治疗后,第3天及第5天小鼠改良神经功能缺陷(NDS)评分明显降低(P<0.01),低剂量组第3天及第5天左转率降低(P<0.05),中剂量组第3天(P<0.05)及第5天(P<0.01)左转率降低,高剂量组第3天及第5天左转率明显降低(P<0.01)。低剂量组小鼠脑含水量减少(P<0.05),中、高剂量组小鼠脑含水量明显减少(P<0.01)。低剂量组促炎因子TNF-α、IL-6及JAK-1、STAT3、p-STAT3通路蛋白的表达均明显减少(P<0.01),IL-1β表达减少(P<0.05),抑炎因子IL-10表达明显增加(P<0.01);中、高剂量组促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6及JAK-1、STAT3、p-STAT3通路蛋白的表达均明显减少(P<0.01),抑炎因子IL-10表达明显增加(P<0.01)。低剂量组CCK-8的含量在用药后第3天增加(P<0.05),第5天含量明显增加(P<0.01);中、高剂量组CCK-8的含量在用药后第3天及第5天明显增加(P<0.01)。IL-10的mRNA相对表达水平在用药后均明显增高(P<0.01),STAT3 mRNA相对表达水平在用药后均明显降低(P<0.01)。结论中风星蒌通腑胶囊可以增加脑肠肽CCK-8的表达,调控IL-10/STAT3信号通路,从而减轻小鼠脑出血后的继发性炎症反应及细胞毒性脑水肿。

调脾增食颗粒对幼龄厌食大鼠血浆β-EP及CCK-8的影响

目的:探讨调脾增食颗粒对幼龄厌食大鼠血浆β-EP(β-内腓肽)及CCK-8(胆囊收缩素)的影响。方法:选取60只幼龄SD大鼠,随机分为6组,正常对照组,模型对照组,调脾增食颗粒高、中、低剂量组及阳性对照组,每组10只。除正常对照组喂饲常规鼠饲料外,其余各组均采用特制高蛋白高脂饲料喂养1周,建立幼龄厌食大鼠模型。正常对照组和模型对照组给予蒸馏水,调脾增食颗粒高、中、低剂量组按33.86、16.93、8.47 g/(kg·d)剂量给药,阳性组给予健胃消食片0.675 g/(kg·d),连续给药4周;记录各组大鼠进食量,应用放射免疫法测定大鼠血浆β-EP及CCK-8的含量。结果:调脾增食颗粒中、高剂量组第3周和第4周的进食量明显多于模型对照组(P<0.05,P<0.01)。调脾增食颗粒中、高剂量组大鼠血浆β-EP含量明显高于模型组(P<0.05,P<0.01),CCK-8含量明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论:调脾增食颗粒治疗厌食症与调节血β-EP及CCK-8的分泌与释放有关。

家兔中脑导水管周围灰质(PAG)中八肽胆囊收缩素(CCK-8)对吗啡镇痛和电针镇痛的拮抗作用

CCK-8是目前所知作用最强的一种抗阿片肽。我们曾经报告，只要向大鼠脑室注射1-4ng的CCK-8即可显著对抗吗啡镇痛和电针镇痛。为探讨CCK-8的中枢抗阿片作用部位及种属特异性，我们将CCK-8注入家兔PAG，观察其对吗啡镇痛和电针镇痛的影响。

亚甲蓝对人髓核细胞毒性的CCK-8法检测

背景:亚甲蓝在腰椎椎间孔镜手术中具有鉴别及显影退变椎间盘的作用,但是很多专家学者提出亚甲蓝会加速椎间盘的退变,然而国外文献研究发现亚甲蓝具有嗜酸性,推测对具有酸性环境的退变椎间盘具有治疗作用。因此,亚甲蓝对椎间盘是否具有毒性作用一直存在争议。目的:使用CCK-8法测定亚甲蓝对髓核细胞是否具有毒性作用。方法:选取2例椎间盘突出患者的废弃髓核组织,消化后提取髓核细胞,培养至细胞长满培养皿80%后消化细胞并制作细胞悬液,分6组接种到96孔板,一组为空白对照(只有培养基、CCK-8溶液而没有细胞),一组为0加药对照组(只有培养基、细胞和CCK-8溶液),其余分别加入1%,2%,3%,4%浓度的亚甲蓝干预细胞生长繁殖。在培养24,48,72,96 h后使用CCK-8法测定吸光度,计算细胞活力并观察每一组颜色变化。结果与结论:0加药对照组颜色最深,亚甲蓝各浓度组随着亚甲蓝浓度升高浓度变浅,细胞活力0加药组活力最强,随着亚甲蓝浓度增高,活力下降。推测亚甲蓝对人髓核细胞具有一定的细胞毒性。

CCK-8在胆石症患者血浆中的水平变化及其临床意义

目的 :研究CCK - 8在胆石症患者血浆中水平的变化及临床意义。方法 :应用放射免疫分析了 6 0例胆石症患者组术前CCK - 8水平与对照组 (30例无胆囊结石 )患者血浆中CCK - 8水平 ;患者组术前及术后2周CCK - 8水平的比较。结果 :患者组血浆CCK - 8水平为 (4 2 91± 2 88) pmol/L ,显著地高于对照组 (31 5 0± 1 6 2 ) pmol/L ,P <0 0 5 ;患者组术前血浆CCK - 8水平为 (4 2 91± 2 88) pmol/L ,显著地高于术后 (34 2 1±2 5 6 )pmol/L ,P <0 0 5。结论 :胆石症血浆中CCK - 8术前水平为 (4 2 91± 2 88)pmol/L ,显著高于对照组(31 5 0± 1 6 2 ) pmol/L(P <0 0 5 ) ,可作为胆石症诊断指标之一。

cAMP-PKA信号通路在CCK-8抑制LPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞NF-κB活化中的作用

目的:探讨cAMP-PKA信号通路对八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapetide,CCK-8)抑制LPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞(pulmonary interstitial macrophages,PIMs)核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)活性的影响.

酶催化法合成CCK-8的一个四肽片段

用酶催化法合成了缩胆囊素 ( CCK-8)的 1个四肽片段 ( Phac-Met-Gly-Trp-Met-OEt) .该四肽片段是依次通过 Phac-Met-OEt与 Gly-OMe· HCl,Trp-OMe和 Met-OEt偶合得到的 ,这 3步偶合反应分别用α-糜蛋白酶、木瓜蛋白酶和α-糜蛋白酶作为催化剂 ,并对影响反应的因素进行了研究 ,反应中间体和产物均经质谱 ( FAB-MS)

CCK-8对内毒素休克大鼠肺脏细胞因子的抑制效应

观察八肽胆囊收缩素 (cholecystokinin octapeptide,CCK 8)改善脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)引起的大鼠内毒素性休克 (endotoxicshock ,ES)过程中血清及肺脏细胞因子的变化 ,探讨p38丝裂素活化蛋白激酶 (p38mitogen acti vatedproteinkinase ,p38MAPK)的信号转导作用。用生理多道记录仪观察尾静脉注入LPS (8mg/kgi v )复制的SD大鼠ES模型、LPS注入前 10min尾静脉注入CCK 8(40 μg/kgi v )、单独注入CCK 8(40 μg/kgi v )或生理盐水 (对照 )的四组大鼠平均动脉血压 (MAP)的改变 ,应用ELISA试剂盒检测血清和肺脏中炎性细胞因子 (TNF α、IL 1β和IL 6 )的变化。用Westernblot检测肺脏p38MAPK的表达。结果显示 :CCK 8可改善LPS引起的大鼠MAP的下降。与对照组相比 ,LPS可显著增加血清和肺脏TNF α、IL 1β和IL 6含量 ;CCK 8可显著抑制LPS诱导的血清和肺脏TNF α、IL 1β和IL 6的增加。CCK 8可增加ES大鼠肺脏磷酸化p38MAPK的表达。结果提示CCK 8可改善ES大鼠MAP的降低 ,并对肺脏促炎性细胞因子过量产生有抑制作用 。

c-fos在CCK-8抗LPS所致的肺动脉平滑肌细胞损伤中的变化

目的 :观察c -fos在八肽胆囊收缩素 (CCK - 8)减轻脂多糖 (LPS)所致的肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)损伤中的变化。方法 :贴块法培养大鼠PASMC。应用电镜技术和生化方法 ,观察细胞形态和测定细胞丙二醛 (MDA)含量及乳酸脱氢酶 (LDH)释放率 ;台盼蓝染色法记录PASMC蓝染率的变化 ;免疫细胞化学技术检测细胞内c -fos蛋白的表达情况。结果 :CCK - 8可减轻LPS引起的细胞超微结构损伤 ;CCK - 8可降低LPS引起的细胞台盼蓝摄取率、MDA含量与LDH释放率的增高 ;LPS可轻微上调PASMC内c-fos蛋白表达 ,CCK - 8可使该上调作用显著上升。结论 :CCK - 8可减轻LPS所致的PASMC损伤 ;CCK - 8可能通过使c -fos蛋白表达上调来发挥其抗损伤作用。

CCK-8法定量检测亚甲蓝对人髓核细胞的毒性

背景:前期细胞实验研究发现亚甲蓝确实对人髓核细胞具有毒性作用,且与药物浓度呈正相关,但是其毒性的临界范围未进行研究。目的:使用CCK-8法定量测定亚甲蓝对髓核细胞毒性作用的临界范围值。方法:选取1例椎间盘突出症患者的术后废弃髓核组织,提取髓核细胞,培养1代后制作细胞悬液,分9组接种到96孔板,空白对照只有培养基、CCK-8溶液而没有细胞;0加药对照组只有培养基、细胞和CCK-8溶液;其余7个加药组分别加入1%,0.5%,0.1%,0.05%,0.01%,0.005%,0.001%浓度的亚甲蓝干预细胞生长繁殖。在培养24,48,72,96 h后使用CCK-8法测定吸光度,计算细胞活力并观察每一组颜色变化。结果与结论:(1)颜色变化:0加药对照组颜色最深,加药组颜色与药物浓度负相关,且0.05%、0.01%、0.005%、0.001%组颜色较深并与0加药组颜色接近;(2)各组吸光度值均数及细胞活力:与0加药组相比,1%组吸光度减小(P<0.05),1%与0.5%组比较差异均无显著性意义(P>0.05),0.1%组吸光度及细胞活力显著高于0.5%组,0.05%组显著高于0.1%组;(3)结论:亚甲蓝对人髓核细胞具有细胞毒性,毒性临界值在0.1%-0.05%之间且靠近0.05%,确切值还有待于进一步研究。

胆囊收缩素主动免疫产蛋鸡的营养生理效应研究

用胆囊收缩素(CCK)主动免疫产蛋鸡,研究产蛋鸡血清和卵黄中CCK特异性抗体的产生规律及不同CCK免疫剂量对产蛋鸡生产性能和胰腺、胆囊发育及内分泌激素的影响。结果显示:用CCK 8 主动免疫产蛋鸡,可以提高血清和卵黄CCK抗体水平,降低血液中CCK水平;CCK抗体的产生量在第1 次加强免疫后即可接近高峰,第2、第3次加强免疫可维持较高的抗体水平。CCK主动免疫产蛋鸡后,对蛋鸡胰腺、胆囊发育、胰蛋白含量以及蛋鸡体内的生长激素、胰岛素和瘦素水平均没有显著影响,同时对蛋鸡采食量和料蛋比等生产性能也没有显著影响。用CCK主动免疫产蛋鸡,在不影响蛋鸡正常生理功能的同时,可以获得含特异性CCK抗体的卵黄。

5-氟尿嘧啶对人舌鳞癌Tca8113中肿瘤干细胞的富集作用

背景:肿瘤对于化疗药物具有耐药性,而耐药性产生又与肿瘤干细胞密切相关。因此,如何靶向杀伤肿瘤干细胞,将成为口腔鳞癌治疗的关键。目的:探讨5-氟尿嘧啶对舌鳞癌Tca8113肿瘤细胞生物学特性的影响。方法:利用CCK-8实验检测不同质量浓度5-氟尿嘧啶对Tca8113细胞活性的影响,筛选相对较好的药物质量浓度和作用时间进行后续实验,以不添加5-氟尿嘧啶为对照组,流式细胞仪检测细胞周期及肿瘤细胞中侧群细胞比例的变化,划痕实验检测肿瘤细胞迁移能力变化。结果与结论:CCK-8检测显示:5-氟尿嘧啶对舌鳞癌Tca8113细胞系细胞的活性抑制呈时间及药物浓度的正相关关系,50 mg/L 5-氟尿嘧啶作用48 h时,细胞活性抑制效果相对较好。流式细胞仪细胞周期检测显示:实验组G0/G1期细胞比例较对照组明显升高(P=0.01),S期细胞较对照组下降(P=0.244),实验组G2/M期细胞完全消失(P=0.00)。5-氟尿嘧啶处理后侧群细胞比例较处理前明显升高(P=0.00)。细胞划痕实验显示实验组划痕愈合能力较对照组增强。结果表明5-氟尿嘧啶药物筛选人舌鳞癌Tca8113细胞可以作为富集类肿瘤干细胞的方法之一。

CCK-8与内源性阿片系统在吗啡依赖中的相互作用

目的通过观察不同剂量的CCK-8对吗啡依赖SH-SY5Y细胞模型内源性阿片系统的影响,初步探讨CCK-8与内源性阿片系统在吗啡依赖过程的相互作用及其机制。方法建立吗啡慢性依赖SH-SY5Y细胞模型,应用放射配基结合技术观察μ阿片受体(MOR)结合特征,应用Real-Time PCR技术检测前脑啡肽原(PENK)、前阿黑皮质素原(POMC)基因的表达,并观察CCK-8对上述指标的影响。结果①10μmol·L-1吗啡作用于全反式维甲酸(RA)分化6d的SH-SY5Y细胞48h,成功建立了慢性吗啡依赖模型;②CCK-8可剂量依赖性地抑制MOR的结合,并且此抑制作用可被CCK1及CCK2受体拮抗剂(L-364,718,LY-288,513)翻转;③10-7、10-6mol·L-1CCK-8使PENK、POMC的表达较正常组分别增加(5.81±0.84)、(7.26±1.55)倍和(4.55±0.73)、(5.16±0.82)倍。吗啡依赖后,PENK、POMC表达较正常组下降(0.43±0.10)倍和(0.37±0.07)倍,10-8、10-7、10-6mol·L-1CCK-8使下调的PENK、POMC表达增加,PENK与正常组的相对表达值为(0.63±0.10)、(0.86±0.21)、(1.17±0.19),POMC与正常组的相对表达值为(0.46±0.10)、(0.60±0.11)、(0.96±0.11)。10-10、10-9mol·L-1CCK-8对PENK、POMC表达无影响。结论低剂量(10-10、10-9mol·L-1)CCK-8可通过激活CCK受体抑制MOR的结合力,对PENK、POMC的表达无影响;高剂量(10-8～10-6mol·L-1)的CCK-8可使PENK、POMC基因表达增加,促进内源性阿片肽的生成,并可改善吗啡依赖后内源性阿片系统的失衡。

CCK-8及损毁MFB对腹侧被盖区和伏核多巴胺、CCK-8含量的影响

应用荧光分光光度法和放射免疫法，在以6-羟基多巴胺(6-OHDA)单侧损毁内侧前脑束(MFB)制备的偏侧帕金森病(PD)大鼠模型身上，测定了腹侧被盖区(VTA)和伏核(Acb)中多巴胺(DA)和八肽胆囊收缩素(CCK-8)的含量，并观察了VTA和Acb区微量注射CCK-8对正常大鼠DA含量的影响。结果如下：PD大鼠模型损毁侧VTA和Acb的DA和CCK-8的含量与健侧及对照组相比均减少(P<0．01)

台盼蓝拒染法、MTT法、CCK-8法在研究As_2O_3细胞毒性作用中的意义

目的筛选三氧化二砷（As203）对HL一60细胞毒性的有效剂量及作用时间的检测方法，并对其结果进行分析。方法采用台盼蓝拒染法、M1Tr法、CCK～8法测定不同浓度的As203，体外作用HL一60细胞株的细胞存活率．采用单因素方差分析其与剂量一时间依赖反应的关系。结果4．0、8．0μmol／L作用48、72h及8．0μmol／L作用24h被染细胞小于5％，其余均未观察到蓝染细胞。MTY法检测在1．0～8．0μmol／LAs20，剂量范围内培养24、48、72h（P〈0．05），各组均能够抑制HL-60细胞活性。CCK-8法检测在0．5～8．0μmol／LAs203剂量范嗣内培养24、48、72h（P〈0．05），各组均能够抑制HL-60细胞活性。HL-60细胞在不同时间、不同浓度均能出现细胞存活率明显降低，As20，的毒副作用呈现明显的剂量-时间依赖反应。结论在研究As203的细胞毒性时，用CCK-8法优于M11’法，均比台盼蓝法更为灵敏。

CCK-8及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠额叶皮质、尾壳核、海马μ阿片受体的影响

目的通过观察CCK-8及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠额叶皮质、尾壳核、海马μ阿片受体的影响,初步探讨CCK-8对吗啡戒断症状的影响及其受体机制。方法建立大鼠吗啡慢性依赖及纳络酮催促戒断模型,观察CCK-8及CCK1受体拮抗剂L-364,718、CCK2受体拮抗剂LY-288,513慢性干预对戒断症状的影响,并采用放射配基结合法测定额叶皮质、尾壳核、海马μ阿片受体的结合活性,即受体数量(Bmax)及结合力(Kd)。结果①给予吗啡前腹腔注射CCK-8及CCK受体拮抗剂慢性干预均可减轻吗啡戒断症状;②慢性吗啡作用后,额叶皮质和海马μ阿片受体数量及结合力下降,而尾壳核μ阿片受体数量无变化,仅结合力降低;戒断后,额叶皮质、尾壳核μ阿片受体数量及结合力升高,而海马μ阿片受体数量无变化,仅结合力升高;③CCK-8及其受体拮抗剂慢性干预后,使吗啡戒断大鼠尾壳核μ阿片受体结合力降低、海马μ阿片受体数量增加,但是对额叶皮质μ阿片受体的结合活性无影响。结论 CCK-8及其受体拮抗剂可通过调节μ阿片受体减轻吗啡戒断症状,并具有脑区特异性。