追赶生长大鼠胃泌素及内脏脂肪细胞CCK2R表达变化

24只Wistar大鼠分为正常对照组、限食组、追赶生长组,检测所有大鼠血糖、血脂、血清胃泌素,内脏脂肪体脂比、脂肪细胞CCK2R mRNA和蛋白水平.结果 显示限食组和正常组相比,血清胃泌素水平降低54%（P＜0.05）,内脏脂肪体脂比减少55%（P＜0.05）,脂肪细胞CCK2R mRNA和蛋白表达下降（2.19±0.18对3.2±0.24,0.11±0.03对0.15±0.04,P＜0.05）.追赶生长组血清胃泌素水平分别高于限食组72%和正常组31%（P＜0.05）,内脏脂肪体脂比高于限食组114%（P＜0.05）,达到正常对照组水平;同时脂肪细胞CCK2R mRNA和蛋白表达高于正常对照组（4.09±0.59对3.2±0.24,0.25±0.05对0.15±0.04,P＜0.05）.追赶生长大鼠内脏脂肪优先沉积的机制可能和胃泌素分泌增加及脂肪细胞CCK2R表达增加相关.

重组毒素rCCK8PE38的构建、表达及其细胞杀伤活性

目的在大肠埃希菌中表达重组毒素rCCK8PE38,并检测其对结肠癌细胞的杀伤活性。方法采用分子生物学技术将反向翻译的8肽胆囊收缩素(cholecystokinin8,CCK8)与绿脓杆菌外毒素(pseudomonas exotoxin,PE)38基因融合,构建重组表达质粒pET-rCCK8PE38,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。通过细胞杀伤试验检测表达的重组毒素rCCK8PE38对结肠癌细胞、其他癌细胞系和一些正常细胞的杀伤活性。结果重组表达质粒pET-rCCK8PE38经双酶切证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为40 000,表达量约占全菌总蛋白的40%;重组毒素rCCK8PE38对结肠癌细胞HCT-8有明显的杀伤效果,对其他癌细胞系和正常细胞无杀伤活性。结论成功在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达了重组毒素rCCK8PE38,其可高效特异地识别并杀伤结肠癌细胞HCT-8。