从肺肠病理模型CCK8、CGRP、SP、VIP表达探讨“肺与大肠相表里”

目的通过肠病(便秘)、肺肠合病(过敏性哮喘合并便秘)模型大鼠五脏即心、肝、脾、肺、肾组织中CCK8、CGRP、SP、VIP表达探讨"肺与大肠相表里"理论。方法制备肠病和肺肠合病大鼠模型,免疫组织化学法观察五脏组织中CCK8、CGRP、SP、VIP的表达。结果虽然CCK8、CGRP、SP、VIP染色在五脏中均有一定程度的改变,但经统计发现,与空白对照组比较,肠病组大鼠肺组织中CCK8、VIP有差异(P<0.01),CGRP、SP有差异(P<0.05);与空白对照组比较,肺肠合病组大鼠肺组织中CCK8、CGRP、SP、VIP均有差异(P<0.01);与肠病组比较,肺肠合病组大鼠肺组织CCK8、CGRP、VIP均有差异(P<0.01),SP有差异(P<0.05);而心、肝、脾、肾各组之间比较CCK8、CGRP、SP、VIP表达无差异(P>0.05)。结论提示在肠病和肺肠合病情况下五脏中大肠与肺之间存在一定的联系,但与其它四脏并无直接联系,说明肺与大肠之间存在互相影响的特异性。

“肺肠合病”模型大鼠肺、肠CGRP与CCK8表达的实验研究

目的:通过观察模型大鼠肺、结肠组织中降钙素基因相关肽(CGRP)与八肽胆囊收缩素(CCK8)表达量的变化,从而探讨"肺与大肠相表里"的机制。方法:实验设空白对照组、肺肠合病组(过敏性哮喘合便秘)共两组。用免疫组化方法测定CGRP与CCK8的表达。结果:在肺肠合病状态下,与空白对照组比较,大鼠肺、结肠组织中CGRP与CCK8的表达呈显著性差异(P<0.01)。结论:在肺肠合病状态下,肺、结肠组织中CGRP与CCK8的表达均发生了变化,提示在上述病理模型情况下,说明在上述病理模型情况下肺与大肠之间存在一定的联系,提供了部分支持"肺与大肠相表里"的实验依据。

胆囊切除术后兔血清CCK8的变化及意义

Oddi括约肌（SO）生理运动在维持正常胆道动力学中起着重作用,其主受神经、体液因素调节。CCK作为胃肠肽类激素之一对SO的调节具有重作用1。在CCK家族中,缩胆囊素八肽（CCK8）生理作用最大。CCK可直接作用SO内的缩胆囊素A受体（CCKAR）发挥作用。

CCK8法检测杏丁联合THP对膀胱原代癌细胞增值抑制作用

目的：探讨银杏达莫注射液（杏丁）联合吡柔比星（THP）对原代膀胱癌细胞增值抑制作用，从而为杏丁在膀胱癌灌注治疗的临床应用提供理论依据。方法：使用不同浓度的杏丁、THP、杏丁＋THP三组药物分别处理原代膀胱癌细胞，用CellCounting Kit-8（简称CCK-8）法检测并描绘细胞生长曲线，评价其疗效。结果：杏丁和THP在各浓度及特定作用时间分别对膀胱癌细胞增殖有明显抑制作用且呈浓度依赖效应关系（P〈0．05），而杏丁联合THP抑制癌细胞增殖作用较单独应用杏丁和THP更加明显（P〈0．05）。结论：杏丁联合THP可增强THP对膀胱癌细胞增殖抑制作用，其结果优于单独应用THP，杏丁联合THP达到增效减毒目的。

胆囊收缩素（CCK8）对实验性神经细胞老化过程中脂褐素的影响

目的 观察CCK8对实验性神经细胞老化过程中脂褐素的影响。方法采用小鼠神经母细胞瘤细胞（NBA2）无血清培养建立神经细胞老化实验研究模型。以显微荧光分光光度术测定单个细胞内脂褐素自发荧光值作为细胞的老化指标，观察CCK8对这些指标的影响。结果在无血清培养条件下，细胞内脂褐素荧光值随培养时间的延长而累积性增加（P<0.01）。将CCK8加入无血清培养液，CCK8作用10天和15天都可显著降低细胞内脂褐素荧光值（P<0.01）。结论在无血清培养条件下，NBA2细胞由分裂增殖变为分化成熟老化，反映了神经细胞的老化过程，而CCK8可延缓细胞的老化过程。

CCK8和PGE2对CVB体外攻击人外周血pDC的调控

目的:了解八肽胆囊收缩素(CCK8)是否参与柯萨奇病毒B(CVB)体外攻击人外周血浆细胞样树突状细胞(p DC)的调控。方法:RT-PCR和IF检测CCK受体的表达;FCM分析协同刺激分子的变化,用ELISA和RT-PCR检测IFN-α的分泌。结果:CVB体外攻击p DC,CCK1R和CCK2R的表达增加;CCK8可以抑制CD80、CD86和HLA-DR表达的增高,而PGE2可以进一步促进CD80、CD86和HLA-DR的表达;同时,CCK8抑制CVB攻击后IFN-α的分泌,而PGE2进一步促进IFN-α的分泌。结论:CCK8和PGE2可双向调控CVB体外攻击人外周血p DC的免疫应答。

盐酸小檗碱对人结肠癌细胞SW480增殖、迁移及侵袭的影响

目的探究盐酸小檗碱对人结肠癌细胞SW480增殖、迁移和侵袭过程的影响及可能的机制。方法将人结肠癌细胞SW480细胞分成实验组、对照组、空白组,用CCK8法测定不同浓度的盐酸小檗碱对SW480细胞增殖的作用,并计算出盐酸小檗碱不同浓度作用下SW480细胞的存活率;通过平板克隆形成、细胞划痕、Transwell等实验,明确盐酸小檗碱对SW480的克隆形成、迁移及侵袭的作用。结果盐酸小檗碱能明显地抑制SW480细胞的增殖,并表现出明显的时间和浓度依赖关系;盐酸小檗碱对SW480细胞的克隆形成、迁移及侵袭过程有显著的抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论盐酸小檗碱对细胞SW480的克隆形成、增殖、侵袭和迁移过程均有明显的抑制作用。

NEFA对奶牛肝细胞活力及形态的影响

基于非酯化脂肪酸(NEFA)对奶牛脂肪肝的致病作用,探究NEFA对奶牛肝细胞活力及形态的影响。试验使用CCK8法检测奶牛肝细胞活力,试验第一部分分组为空白对照组、0.3 mmol/L、0.6 mmol/L、1.2 mmol/L、2.4 mmol/L NEFA组,试验第二部分分组为空白对照组、1.2 mmol/L NEFA组、1.2 mmol/L NEFA+1 mg/m L LPS组。结果表明,对奶牛肝细胞处理不同时间的试验确定NEFA的最适处理时间为12 h,对奶牛肝细胞处理不同浓度的试验确定最适处理浓度为1.2 mmol/L。与对照组相比,1.2 mmol/L NEFA组奶牛肝细胞活力显著下降,差异极显著(P <0.0001);与1.2 mmol/L NEFA组相比,1.2 mmol/L NEFA+1μg/m L LPS组奶牛肝细胞活力显著下降,差异显著(P=0.004)。NEFA对奶牛肝细胞的活力有显著影响且存在脂毒性。

重组毒素rCCK8PE38的构建、表达及其细胞杀伤活性

目的在大肠埃希菌中表达重组毒素rCCK8PE38,并检测其对结肠癌细胞的杀伤活性。方法采用分子生物学技术将反向翻译的8肽胆囊收缩素(cholecystokinin8,CCK8)与绿脓杆菌外毒素(pseudomonas exotoxin,PE)38基因融合,构建重组表达质粒pET-rCCK8PE38,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。通过细胞杀伤试验检测表达的重组毒素rCCK8PE38对结肠癌细胞、其他癌细胞系和一些正常细胞的杀伤活性。结果重组表达质粒pET-rCCK8PE38经双酶切证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为40 000,表达量约占全菌总蛋白的40%;重组毒素rCCK8PE38对结肠癌细胞HCT-8有明显的杀伤效果,对其他癌细胞系和正常细胞无杀伤活性。结论成功在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达了重组毒素rCCK8PE38,其可高效特异地识别并杀伤结肠癌细胞HCT-8。

枯草芽孢杆菌肽聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)表达的影响

为了探究来源于枯草芽孢杆菌细胞壁的肽聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞(ORECs)中β-防御素-1(SBD-1)表达的影响,本试验使用30μg/mL肽聚糖刺激ORECs不同时间(2、4、6、8、10和12 h),采用荧光定量PCR(qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别检测SBD-1的mRNA和蛋白表达量,确定最佳刺激时间;再使用不同浓度的肽聚糖(0、10、20、30、40和50μg/mL)刺激ORECs 2 h,采用qPCR和ELISA方法检测SBD-1的mRNA和蛋白表达量,确定最佳刺激浓度。结果显示:(1)使用30μg/mL肽聚糖刺激ORECs不同时间时,SBD-1的mRNA和蛋白表达量随着时间的增加呈先下降后升高的趋势,2 h时表达量最多并极显著高于对照组(P<0.001)。(2)使用不同浓度肽聚糖刺激ORECs 2 h时,SBD-1的mRNA和蛋白表达量随着肽聚糖浓度的升高呈现先升高后降低的趋势,在20μg/mL时表达量最多并极显著高于对照组(P<0.001)。(3)不同时间刺激试验和不同浓度刺激试验均不会对ORECs产生细胞毒性作用。结果表明,来源于枯草芽孢杆菌的肽聚糖能够诱导ORECs表达SBD-1,最佳刺激条件为20μg/mL枯草芽孢杆菌肽聚糖刺激ORECs 2 h。

补骨脂酚在抗皱眼霜中的应用

评估补骨脂酚用于抗皱眼部产品的功效、刺激性和安全性。采用鸡胚绒毛尿囊膜实验评估补骨脂酚和含补骨脂酚的抗皱眼霜的刺激性与安全性,CCK8法评估补骨脂酚对细胞的毒性,采用封闭型斑贴试验和人体功效测试进行含补骨脂酚眼霜的安全性及抗皱功效评估。结果表明,补骨脂酚具有无/轻度眼部刺激性,角质形成细胞(HaCaT)和成纤维细胞(HSF)活性测定发现质量浓度1 g/L及其以下的补骨脂酚无细胞毒性,含0.5%补骨脂酚的抗皱眼霜对人体皮肤无不良反应,且有显著提高含水量的功效(P<0.05),同时和对照组眼霜对比含补骨脂酚的眼霜可在一定程度上改善眼周皮肤纹理,具有抗皱功效。

七个苊并[1,2-b]喹喔啉类化合物合成及细胞毒性

喹喔啉是一类具有广泛生物活性的含氮六元杂环化合物。通过Suzuki偶联反应在9-溴苊并[1,2-b]喹喔啉上引入各种芳香取代基合成了7个苊并[1,2-b]喹喔啉类化合物,其中6个为尚未见报道。并通过核磁、质谱对其结构进行确证。体外活性研究结果表明化合物5D对于MCF-7、HepG2的IC_(50)分别为11.39±0.04、6.46±0.28μM,结果表明其具有发展为抗肿瘤药物的前景。

氟对体外培养大鼠成釉细胞HAT-7细胞活性和对细胞内Ca^(2+)浓度的影响

目的:观察氟对体外培养的大鼠成釉细胞HAT-7细胞活性及细胞内Ca2+浓度的影响。方法:取对数生长期的HAT-7细胞,分别加入不同浓度的Na F培养液,培养24、48、72 h后,用CCK-8检测细胞的活性;流式细胞术分析氟对细胞凋亡的影响;激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子的浓度。结果:Na F浓度为0.4、0.8 mmol/L时,促进成釉细胞增殖;当Na F浓度大于1.6 mmol/L时,促进成釉细胞凋亡,Na F浓度为1.6 mmol/L时,细胞早期凋亡数量增加,激光共聚焦显微镜检测证实,1.6mmol/L Na F可以诱导大鼠成釉细胞内Ca2+浓度升高,Na F对HAT-7细胞的上述作用与浓度和作用时间呈正相关。结论:低浓度氟促进HAT-7细胞增殖,高浓度则抑制其增殖。Na F浓度超过1.6 mmol/L时,可诱导成釉细胞凋亡,并诱导成釉细胞内Ca2+浓度增加。

胆囊收缩素对实验性神经细胞老化过程中微突起影响的超微结构研究

目的 探讨胆囊收缩素 (CCK8)对实验性神经细胞老化过程中细胞微突起超微结构的影响。方法 采用 NBA2 细胞无血清培养建立神经细胞老化实验模型。以扫描电子显微镜观察的细胞表面结节状物的大小以及微突起数目作为细胞老化指标 ,观察 CCK8对细胞老化过程的影响。结果 1使细胞表面结节状物变小。 2增加细胞突起终末的微突起数量。结论 CCK8可以延缓实验性神经细胞的老化进程值得进一步研究。

氟对体外培养大鼠成釉细胞活性和细胞凋亡的影响

目的:观察氟对体外培养的大鼠成釉细胞活性的影响,为探讨氟斑牙的形成机制提供依据。方法 :取对数生长期的大鼠成釉细胞,在培养液中加入浓度为0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mmol/L的NaF溶液,培养24、48、72 h后,采用CCK-8检测各组细胞的活性。荧光显微镜下观察成釉细胞核形态的变化,流式细胞术分析氟对细胞凋亡的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:1NaF浓度为0.4、0.8 mmol/L时,对成釉细胞有促增殖作用;NaF浓度为1.6、3.2、6.4 mmol/L时,对成釉细胞的活性有抑制作用,随着NaF浓度的增加,对细胞的抑制作用也逐渐增强,并且这种双向调节作用呈时间依赖性。2NaF浓度为0.4、0.8 mmol/L时,鲜见核破碎;NaF浓度为1.6、3.2 mmol/L时,存在核破碎,并且随着浓度的提高,核破碎的数量随之增加,即1.6 mmol/L浓度的NaF可引起成釉细胞凋亡,随着浓度的增加,细胞凋亡的数量随之增加。结论:1氟对体外培养成釉细胞的增殖具有双向调节作用,即低浓度促进,高浓度抑制。2浓度超过1.6 mmol/L时,NaF诱导成釉细胞凋亡。

胆囊收缩素对实验性神经细胞老化过程中脂褐素的影响

目的 观察 CCK8对实验性神经细胞老化过程中脂褐素的影响。方法 采用 NBA2 细胞无血清培养建立神经细胞老化实验模型 ,以显微荧光分光光度仪测定单个细胞内脂褐素自发荧光值作为细胞老化指标 ,观察 CCK8对细胞老化过程的影响。结果 在无血清培养条件下 ,细胞内脂褐素荧光值随培养时间的延长而累积性增加 (P<0 .0 1 )。将 CCK8加入无血清培养液 ,CCK8作用 1 0 d和 1 5 d都可显著降低细胞内脂褐素荧光值 (P<0 .0 1 )。结论 在无血清培养条件下 ,NBA2 细胞由分裂增殖变为分化成熟老化 ,反映了神经细胞的老化过程。而 CCK8可以延缓细胞的老化进程。

复尔康注射液诱导肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的：研究青蒿油制剂复尔康注射液对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法：CCK8试剂盒（cell counting kit-8）检测复尔康注射液对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用；Hoechst33258荧光染色观察HepG2细胞凋亡的形态学改变；流式细胞仪AnnexinV／PI双染法检测HepG2细胞的凋亡率。结果：复尔康注射液可抑制HepG2细胞的增殖，IC50值为29．63±1．22μg／ml；复尔康注射液0．3125-10μg／ml作用48h后，Hoechst33258荧光染色均可见HepG2细胞出现核浓缩、核碎裂等细胞凋亡形态学改变，且呈现出一定的剂量依赖性；AnnexinV／PI双染法检测显示，不同浓度的复尔康注射液均可诱导HepG2细胞凋亡，凋亡率分别为4．71％±0．71％、10．05％±0．67％、15．08％±1．16％、23．59％±1．65％、32．30％±1．87％、42．09％±1．43％。结论：复尔康注射液可抑制HepG2细胞的增殖，诱导其凋亡。

八肽胆囊收缩素对大鼠大脑皮质细胞钙调素活性的影响

为了探讨胆囊收缩素 (CCK)受体在中枢神经系统中的信号传递机制 ,观察了CCK8和CCKA 受体拮抗剂L 36 4,718、CCKB 受体拮抗剂L 36 5 ,2 6 0对大鼠大脑皮质钙调素 (CaM )活性的影响 .结果表明 :a CCK8对CaM活性的影响具有时间依赖性 ,15min达到最高点后逐渐下降 ;b CCK8在 10 -12 ～ 10 -7mol/L范围内可刺激CaM活性的增加 ,超过 10 -7mol/L后 ,逐渐趋于饱和 .c CCKA 受体拮抗剂L 36 4,718、CCKB 受体拮抗剂L 36 5 ,2 6 0均可抑制 10 -7mol/LCCK8引起的CaM活性的增加 ,但两者IC50 相差 40倍 ,L 36 5 ,2 6 0在较低浓度时即能明显拮抗CCK8引起的CaM活性变化 .研究结果提示CCK8可能通过CCKB 受体引起CaM活性变化 ,而CaM可能是CCKB

白藜芦醇对大鼠CBRH-7919肝癌细胞凋亡的影响

目的:观察白藜芦醇对大鼠CBRH-7919肝癌细胞的影响.方法:不同浓度的白藜芦醇处理大鼠CBRH-7919肝癌细胞24、48 h和72h,倒置显微镜和电镜观察细胞变化,CCK8法观测其存活率,免疫印迹检测细胞中Bcl-2、Erk蛋白变化.结果:细胞存活率,具有药物浓度和时间依赖性;随药物浓度的增加,细胞数量减少,悬浮死亡细胞增多;Bcl-2、Erk蛋白随药物浓度的增加,蛋白表达量降低.结论:白黎芦醇对大鼠CBRH-7919肝癌细胞增殖具有明显的抑制作用,可能与其抑制Bcl-2和Erk的表达而诱导细胞凋亡有关.

致肝损伤毒物四氯化碳体外染毒剂量的选择

目的探讨四氯化碳(CCl4)致肝脏损伤体外实验模型的染毒剂量。方法以不同浓度CCl4作用于正常人二倍体肝细胞HL-7702细胞,使其终浓度分别为0(阴性对照),5,10,20,30 mmol/L和40 mmol/L。采用CCK8法检测不同浓度CCl4对肝细胞活性的影响,采用生化分析法检测染毒后肝细胞培养上清中谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT),乳酸脱氢酶(LDH),碱性磷酸酶(AKP)的水平。结果①染毒24 h后,肝细胞活性呈剂量依赖性降低,其中20-40 mmol/L CCl4对肝细胞活性有明显抑制作用,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。②染毒24 h后,随着CCl4染毒剂量的增加,各染毒组肝细胞培养上清中AST的活性有逐渐升高的趋势,其中40 mmol/L CCl4染毒组与阴性对照组比较有统计学差异(P<0.05);各染毒组肝细胞培养上清中ALT的活性逐渐增加,其中10-30 mmol/L CCl4染毒组与阴性对照组相比显著升高(P<0.05);各染毒组肝细胞培养上清中AKP和LDH的活性与阴性对照组相比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 10 mmol/L CCl4在对HL-7702肝细胞活性无明显影响的情况即可引起肝细胞培养上清中ALT的活性升高,对肝细胞膜造成一定的损伤,可作为其肝损伤机制研究的体外染毒剂量。