前脑特异性CCKR-2双转基因小鼠的繁育及基因鉴定

目的:繁殖及鉴定可调控前脑特异性胆囊收缩素受体2(Cholecystokinin receptor-2,CCKR-2)双转基因小鼠(tTA/tetO-CCKR-2 double transgenic,简称dtg),为进一步研究CCKR-2在焦虑相关疾病,如焦虑症、恐惧行为、创伤后应激障碍等发病过程中的作用及分子机制提供实验模型。方法:(1)利用α-CaMKII/tTA单转基因小鼠与tetO/CCKR-2单转基因小鼠杂交,所得子代尽可能远亲繁殖获得dtg小鼠,提取子代鼠尾基因组DNA,采用PCR法及琼脂糖凝胶电泳法鉴定PCR产物以确定其基因型;(2)采用原位杂交方法验证CCKR-2双转基因前脑特异性表达,筛选CCKR-2双转基因型及前脑特异性表达者作为继代种鼠和实验用鼠。结果:(1)PCR凝胶电泳图显示清晰的tTA(350 bp)和CCKR-2(550 bp)条带,野生型无条带显示,表明琼脂糖凝胶电泳结果与dtg模型预期基因片段大小相符;(2)原位杂交结果显示dtg小鼠前脑区域有强烈的CCKR-2表达而野生型小鼠不明显。此结果表明dtg双转基因小鼠在本实验室的成功建立与繁殖及继代,同时繁殖出更多的dtg小鼠。结论:通过正确的饲养繁育和基因鉴定方法能成功获得dtg双转基因小鼠,为本实验室进行后续相关研究奠定了基础。

脾阳虚大鼠下丘脑和小肠缩胆囊素信号转导途径的变化研究

目的：通过检测下丘脑和小肠组织缩胆囊素（Cholecystokinin,CCK）信号转导途径的变化,研究脾阳虚的发生机制。方法：16只SD大鼠随机分为对照组和脾阳虚组（模型组）,每组8只; ELISA法检测下丘脑和小肠组织CCK-8、环-磷酸腺苷（cycle monophosphate,c AMP）和蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）含量;免疫组化法检测下丘脑CCK2受体（CCK 2 receptor,CCK2R）和小肠CCK1R表达。结果：与对照组相比,下丘脑和小肠CCK-8水平明显升高,而下丘脑的CCKR2表达、c AMP和PKA水平以及小肠CCKR1表达和c AMP水平均显著下降,但小肠PKA水平没有明显变化。结论：脾阳虚的发生与下丘脑和小肠组织中CCK过度释放有关。

高脂饮食抑制胰岛素受体和胆囊收缩素受体在小鼠肝脏中的表达

目的:在高脂饮食(HFD)小鼠中研究肝脏中胰岛素受体(IR)、胆囊收缩素(CCK)受体(CCKR)的表达和胰腺中胰岛素的储量。方法:用含15%和30%脂肪的两种HFD和对照餐(5%脂肪)喂养3组小鼠(15~16只/组)12周,用蛋白印迹法检测IR和CCKR在肝脏中的表达;用免疫组化和ELISA测定胰腺中β细胞群落和胰岛素含量;测定门静脉和外周血CCK和胰岛素水平。结果:15%和30%HFD使肝IR、CCKR的表达水平均下降(均P<0.05)。HFD还使胰岛β细胞面积增加(对照组:54.57±2.72;15%HFD:68.74±1.72;30%HFD:71.61±2.32;均P<0.05)。此外,30%HFD还增加胰腺胰岛素的储量并提升门静脉血浆中胰岛素的水平。结论:HFD降低小鼠肝脏IR和CCKR的表达,增加胰腺胰岛素储量。