牦牛CCL14蛋白对HepG2细胞活性和凋亡的影响

旨在研究牦牛CCL14蛋白(Bos grunniens C-C motif chemokine 14 protein,BgCCL14)对HepG2细胞的影响和作用机制。将原核表达的BgCCL14蛋白与HepG2细胞共培养,利用CCK-8试剂盒检测细胞活性,平板克隆检测细胞克隆形成能力,细胞划痕检测细胞迁移以及荧光定量PCR检测相关基因的表达量。结果表明,1μg/mL、10μg/mL和20μg/mL的BgCCL14蛋白均能显著降低HepG2细胞活性;20μg/mL的BgCCL14蛋白对细胞增殖和迁移有极显著抑制作用;20μg/mL的BgCCL14蛋白处理36h极显著上调凋亡基因BAK和BAX的mRNA水平,极显著降低HIF1A、PI3K和CDK1基因的mRNA水平,显著降低mTOR基因的mRNA水平。这表明BgCCL14蛋白可能通过促进细胞凋亡抑制肝癌细胞活性。

CCL14是肺腺癌患者预后和免疫浸润的标志物

目的:旨在揭示C-C基序趋化因子配体14(CCL14)在肺腺癌组织中的表达,及其在肺腺癌进展和免疫浸润中的作用价值。方法:使用UALCAN、Timer、GEPIA和TISIDB数据库探究CCL14在肺腺癌进展和免疫浸润中的作用价值。结果:CCL14在肺腺癌组织中的表达水平下降,且与肺腺癌患者临床分期、性别、吸烟史、组织学亚型和肿瘤蛋白p53(TP53)突变相关。CCL14表达水平下降的肺腺癌患者预后不良。CCL14表达水平与肺腺癌纯度、免疫B细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、巨噬细胞、树突状细胞和嗜中性粒细胞水平相关。CCL14表达水平与肺腺癌免疫浸润细胞标志物相关。CCL14可能参与嗜中性粒细胞趋化性、白细胞趋化性、淋巴细胞趋化性、调节炎症反应、细胞因子与细胞因子受体的相互作用和趋化因子信号通路参与肺腺癌进展。结论:CCL14在肺腺癌组织中的表达水平降低,升高CCL14表达的肺腺癌患者倾向于较好的预后。CCL14表达水平与肿瘤纯度和免疫浸润细胞密切相关。表明CCL14可能是肺腺癌患者预后和免疫浸润细胞标志物。

栝楼桂枝汤通过抑制小胶质细胞活化改善大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的探讨栝楼桂枝汤(gua lou gui zhi decoction,GLGZD)是否通过影响脑缺血/再灌注损伤大鼠皮层小胶质细胞活化来发挥脑保护作用。方法采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,GLGZD治疗7 d后,改良神经功能缺损评分评价各组大鼠的神经功能,小动物核磁共振检测大鼠脑梗死体积,TUNEL法检测缺血侧皮层神经细胞凋亡情况,免疫组化法检测缺血侧皮层脑组织中TNF-α蛋白的表达情况,RT-qPCR检测缺血侧皮层脑组织中神经元-小胶质细胞相互作用的相关因子TWEAK、Fn14、NIK、Rel B、CCL21、CXCR3 mRNA及小胶质细胞活化标志物IBA-1 mRNA表达情况。结果GLGZD能明显改善MCAO大鼠神经功能,显著减少MCAO大鼠脑梗死体积和缺血侧皮层神经细胞的凋亡;并可明显下调MCAO大鼠缺血侧皮层脑组织中TNF-α蛋白及TWEAK、Fn14、NIK、Rel B、CCL21、CXCR3、IBA-1 mRNA的表达。结论GLGZD能明显改善大鼠脑缺血/再灌注损伤,这一作用可能与其通过影响TWEAK/Fn14/CCL21/CXCR3信号通路抑制小胶质细胞活化有关。

禽源趋化因子CCL4基因的表达及多克隆抗体的制备

在禽源疾病发生发展过程中,趋化因子CCL4的作用尚不清楚。对克隆的禽源CCL4基因序列分析显示,其ORF包含270个碱基,编码90个氨基酸,与GenBank中登录的禽源CCL4序列完全一致;利用原核表达载体pET30a对CCL4的成熟肽部分进行表达,IPTG诱导后,进行SDS-PAGE电泳,结果与预期一致,在约11 ku处出现明显蛋白条带。使用经镍柱纯化获得的目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。经Western-blot检测,获得的抗体能与CCL4蛋白发生特异性反应。禽源CCL4蛋白的首次克隆、表达和纯化,以及抗CCL4蛋白多克隆抗体的制备,为进一步研究趋化因子CCL4在禽源疾病发生发展过程中的作用奠定了基础。