基线水平CCL19^(+)树突状细胞可有效预测肺腺癌患者免疫治疗的敏感性

目的探讨肺腺癌微环境基线水平CCL19^(+)树突状细胞(CCL19^(+)DC)与肺腺癌患者接受免疫治疗疗效及肺腺癌患者CD8^(+)T细胞浸润的相关性。方法回顾性分析2020年1月~2023年12月在河南科技大学第一附属医院住院的肺腺癌患者资料,并收集行免疫治疗的肺腺癌患者组织标本96例。应用免疫荧光法检测96例肺腺癌组织中CCL19^(+)DC及CD8^(+)T细胞的浸润状况。受试者工作特征(ROC)曲线评估基线水平CCL19^(+)DC对肺腺癌免疫治疗疗效预测价值,并进行敏感性分析。采用卡方检验分析肺腺癌组织中基线水平CCL19^(+)DC与免疫疗效及CD8^(+)T细胞浸润的相关性。采用Pearson相关性分析评价基线水平CCL19^(+)DC表达与细胞毒性T细胞(CTL)浸润相关性。将PC9肺腺癌细胞、CD8^(+)T细胞及DC(过表达CCL19和/或抗Pd^(-1)处理)进行分组体外共培养,采用流式细胞学方法检测T细胞各表面分子(GranzymeB、Perforin、IFN-γ、Ki-67)表达情况。结果免疫荧光结果显示,PR/CR组(Respond)的患者肺腺癌组织中CCL19^(+)DC浸润高于PD/SD组(Unrespond)患者,表现出更好的免疫治疗疗效,ROC曲线下面积为0.785,敏感度为75.6%,特异度为62.8%。CCL19^(+)DC高表达患者肺腺癌组CD8^(+)T细胞表面分子Granzyme B(P<0.01)、Perforin(P<0.01)、IFN-γ(P<0.01)及Ki-67(P<0.001)表达均高于CCL19^(+)DC低表达患者。肺腺癌组织基线水平CCL19^(+)DC的表达与免疫治疗疗效具有显著的相关性(P=0.003),与CTL细胞浸润呈正相关(r=0.6657,P<0.001),CCL19^(+)DC丰富度与CD8^(+)T细胞的浸润具有显著的相关性(P=0.007)。与对照组相比,转染过表达CCL19质粒及单独使用anti-PD1处理组中CD8^(+)T淋巴细胞杀伤及增殖功能标志物增加(P<0.01)。使用anti-PD1联合转染过表达CCL19质粒处理组中CD8^(+)T淋巴细胞杀伤及增殖功能标志物水平显著增加(P<0.001)。结论在免疫治疗背景下,肺腺癌微环境中基线水平CCL19^(+)DC的表达与肺腺癌患者免疫治疗疗效及CTL细胞浸润呈正相关,并且肺腺癌微环境中CCL19^(+)DC可以提升CD8^(+)T细胞杀伤及增殖功能标志物水平,发挥潜在抗肿瘤免疫作用。因此,肺腺癌微环境中基线水平CCL19^(+)DC可以有效预测肺腺癌免疫治疗的敏感性。

趋化因子CCL19在介导免疫细胞抗肿瘤中的作用

趋化因子是一类能趋化免疫细胞定向移动的小分子分泌蛋白。趋化因子CCL19和其受体CCR7在树突状细胞、T细胞和多种肿瘤细胞上表达。近年来,CCL19及CCR7在抗肿瘤治疗中的作用成为研究热点并取得显著进展,它们在趋化树突状细胞、CD4+和CD8+T细胞浸润肿瘤,介导免疫细胞释放细胞因子,抑制肿瘤增殖、迁移和侵袭以及协助治疗肿瘤过程中发挥关键作用,对其深入研究有助于找到新的肿瘤治疗手段和基因疫苗。该文对CCL19在介导免疫细胞抗肿瘤中的作用作一综述。

大鼠CCLl9体外表达及趋化树突状细胞的功能研究

目的构建大鼠趋化因子CCL19表达慢病毒，建立CCL19体外表达模型。方法以CCL19亚克隆载体为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增和双酶切连接构建CCL19慢病毒包装载体，采用第3代慢病毒包装系统制备CCL19慢病毒颗粒，定量PCR方法检测病毒滴度，Westernblot法检测CCL19在IEC6细胞中的表达。分离大鼠树突状细胞，并采用侵袭小室（Transwell）实验检测慢病毒感染的IEC6细胞对树突状细胞趋化功能的影响。结果PCR和测序结果表明326bp的CCL19基因表达序列连入慢病毒表达载体，质粒构建正确，定量PCR检测结果表明病毒包装滴度达到2×10^9TU／ml。荧光显微镜观察表明慢病毒体外感染IEC6获得80％以上的阳性表达率。Westernblot检测验证了CCL19蛋白在表达慢病毒感染的IEC6细胞中高表达。Transwell检测表明过表达CCL19的IEC6细胞可以提高树突状细胞的净迁移率达4倍以上。结论成功制备高滴度的CCL19表达慢病毒，并在IEC6细胞中检测到CCL19蛋白高表达，体外条件下CCL19的IEC6细胞可以提高树突状细胞趋化性。