基于CCL20/CCR6探讨人参皂苷Rh1调控乳腺癌细胞外渗的作用机制

目的研究人参皂苷Rh1调控肿瘤细胞外渗的机制。方法首先借助微流控芯片模拟肿瘤转移过程,借助斑马鱼模型进行验证;并结合转录组学测序的方法对其机制进行探讨,最后通过质粒转染、siRNA干扰技术对该机制进行验证。结果①微流控芯片结果显示Rh1显著抑制肿瘤细胞外渗过程,斑马鱼实验验证这一结果;②体外肿瘤细胞-内皮细胞共培养后,对肿瘤细胞的转录组测序结果显示Rh1可能通过抑制CCL20的表达发挥作用;通过质粒转染肿瘤细胞过表达CCL20后,借助斑马鱼模型发现,肿瘤细胞出血管能力增强;③借助一系列体外侵袭实验和层位移实验发现,过表达CCL20的肿瘤细胞表现出更强的侵袭性和破坏内皮层的能力。结论肿瘤细胞外渗过程中分泌的CCL20,一是通过自分泌增强自身的侵袭性,二是通过旁分泌作用于内皮层,破坏内皮层的紧密连接,而Rh1通过抑制肿瘤细胞CCL20的表达,逆转这一过程。

CCL20/CCR6轴在银屑病发病过程中的作用

银屑病是一种以Th17淋巴细胞异常活化和浸润为主要特征的慢性炎性反应皮肤病。调节Th17迁移的趋化因子/趋化因子受体CCL20/CCR6轴在银屑病的发病机制中可能处于关键地位,因而成为新的治疗靶标。CCL20/CCR6轴异常表达,导致Th17细胞异常迁移,并激活Th17细胞与角质形成细胞间的循环刺激网络,是银屑病皮损炎症反应持续存在的重要基础。

CCL20/CCR6在类风湿关节炎中作用的研究进展

类风湿关节炎(RA)是一种慢性全身性自身免疫性疾病,其具体致病机制不明。近年有研究表明,CC家族趋化因子配体20(CCL20)及其受体6(CCR6)有可能参与RA的致病机制,在RA滑膜炎和血管翳的形成、骨和软骨组织的破坏等过程中发挥重要作用。本文将对CCL20/CCR6进行具体的介绍,并RA对其在RA发生发展过程中的作用及相关靶向药物的研究进展进行综述,以期为RA的治疗提供新思路。

Effect of preoperative FOLFOX chemotherapy on CCL20/CCR6 expression in colorectal liver metastases

AIM:To evaluate the influence of preoperative FOLFOX chemotherapy on CCL20/CCR6 expression in liver metastases of stage Ⅳ colorectal cancer(CRC) patients.METHODS:Using Real Time-PCR,enzyme-linked immunosorbent assay,Western Blots and immunohistochemistry,we have analyzed the expression of CCL20,CCR6 and proliferation marker Ki-67 in colorectal liver metastasis(CRLM) specimens from stage Ⅳ CRC patients who received preoperative FOLFOX chemotherapy(n = 53) and in patients who did not receive FOLFOX chemotherapy prior to liver surgery(n = 29).RESULTS:Of the 53 patients who received FOLFOX,time to liver surgery was ≤ 1 mo in 14 patients,≤ 1 year in 22 patients and > 1 year in 17 patients,respectively.In addition,we investigated the proliferation rate of CRC cells in liver metastases in the different patient groups.Both CCL20 and CCR6 mRNA and protein expression levels were significantly increased in patients who received preoperative FOLFOX chemotherapy ≤ 12 mo before liver surgery(P < 0.001) in comparison to patients who did not undergo FOLFOX treatment.Further,proliferation of CRLM cells as measured by Ki-67 was increased in patients who underwent FOLFOX treatment.CCL20 and CCR6 expression levels were significantly increased in CRLM patients who had undergone preoperative FOLFOX chemotherapy.CONCLUSION:This chemokine/receptor up-regulation could lead to increased proliferation/migration through an autocrine mechanism which might be used by surviving metastatic cells to escape cell death caused by FOLFOX.

模拟失重30 d后再超重对猴牙龈组织趋化因子CCL20及其受体CCR6表达的影响

目的:探讨模拟失重30 d后再超重对猴牙龈组织趋化因子CCL20及其受体CCR6表达的影响。方法:23只雄性猕猴随机分为4组,即对照组(A)、失重组(B)、超重组(C)、模拟失重30 d后再超重组(D)。其中,D组根据载荷量大小又分为4个亚组,即+11Gx/270 s组(D1)、+13Gx/230 s组(D2)、+15 Gx/200 s组(D3)和+13 Gx/230 s恢复9 d组(D4)。采用组织学方法观察牙龈的形态学变化,通过免疫组织化学、Q-PCR方法检测牙龈组织中CCL20、CCR6的表达情况。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:各实验组中牙龈结构均未见明显损伤,但实验组中的淋巴细胞及中性粒细胞浸润较对照组多。对照组牙龈组织几乎不表达CCL20,但弱表达CCR6;实验组CCL20阳性表达主要位于牙龈上皮组织的基底层,CCR6阳性表达主要位于牙龈上皮棘层和基底层。除失重组的CCL20外,各实验组牙龈组织中的CCL20和CCR6在蛋白水平、mRNA水平上的表达均显著高于对照组(P<0.05)。结论:模拟失重30 d后再超重环境中,猴牙龈组织结构未见明显改变,但牙龈组织趋化因子CCL20及其受体CCR6表达明显增强。

趋化因子CCL20及其受体CCR6在肺腺癌组织中的表达及与复发转移的关系研究

目的通过观察复发和非复发肺腺癌患者癌组织中CCL20和CCR6的表达情况,探讨CCL20和CCR6在肺腺癌发生发展中的作用。方法选取2009年2月—2011年12月河北省人民医院收治的肺腺癌患者162例,根据随访期间的复发转移情况分为复发组(n=50)和非复发组(n=112)。采用免疫组织化学染色检测CCL20和CCR6的表达;采用实时荧光定量PCR检测CCL20、CCR6 mRNA的表达,采用蛋白质印迹(Western blot)法检测CCL20、CCR6蛋白的表达。结果 CCL20在肺腺癌组织中主要表达于细胞膜和细胞质,CCR6在肺腺癌组织中主要表达于细胞质,二者在肺腺癌癌旁组织中均无明显表达。复发组CCL20、CCR6高表达率〔CCL20:38(76.0%)比9(8.0%);CCR6:33(66.0%)比7(6.3%)〕和染色指数〔CCL20:(150.4±10.2)比(62.5±8.5);CCR6:(134.4±11.3)比(58.0±9.5)〕均高于非复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。复发组CCL20、CCR6 mRNA表达较非复发组分别增加82.3%、56.4%,CCL20、CCR6蛋白表达较非复发组分别增加292.0%、188.0%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CCL20和CCR6在肺腺癌组织中呈高表达,且与肺腺癌的发生发展相关。

趋化因子CCL20及其受体CCR6在乳腺癌患者外周血中的表达及意义

目的研究乳腺癌患者外周血中趋化因子CCL20及其受体CCR6的表达变化在乳腺癌发病机制中的作用。方法把乳腺癌患者分为2组,癌组织上有CCR6表达的为CCR6+组,癌组织上未见有CCR6表达的为CCR6-组。采用酶联免疫吸咐试验(ELISA)检测乳腺癌患者及正常人血清中CCL20水平,同时用流式细胞仪分析外周血CD3+T淋巴细胞表面CCR6的表达。结果 CCR6+组患者血清CCL20水平明显高于正常对照组和CCR6-组(P均<0.01),各组外周血CD3+T淋巴细胞表面CCR6的表达差异无统计学意义。结论 CCR6+组患者血清CCL20水平升高可能在部分乳腺癌的发病过程中发挥作用。

β趋化因子CCL20及其受体CCR6 mRNA在寻常性银屑病患者皮损中的表达

目的:探讨β趋化性细胞因子家族中CC趋化因子配体20(CCL20)及其受体CC趋化因子受体6((3CR6)mRNA在寻常性银屑病患者皮损中的表达情况。方法:应用逆转录-聚合酶链式反应(RT—PCR)方法检测35例寻常性银屑病患者皮损和18例正常人皮肤中CCL20和CCR6mRNA的表达。结果:与正常人皮肤相比,寻常性银屑病患者皮损中CCL20与CCR6mRNA的表达水平均明显增高(P<0.001)。结论:寻常性银屑病患者皮损中CCL20和CCR6 mRNA表达水平的上调可能与银屑病的发病有关。

寻常性银屑病患者血清CCL20及其受体CCR6水平的变化及阿维A的干预作用

目的观察CC趋化因子配体20(CCL20)及其受体CC趋化因子受体6(CCR6)在寻常性银屑病患者血清中的变化,并探讨阿维A对其血清水平的影响。方法分离并提取30名健康人(正常对照组)及80例阿维A治疗前及治疗后4周、8周寻常性银屑病患者的血清,采用酶联免疫吸附法测定血清CCL20和CCR6浓度,阿维A治疗前及治疗后8周进行皮损面积及严重度指数(PASI)评分,并对寻常性银屑病患者血清CCL20和CCR6浓度与PASI评分进行相关性分析。结果阿维A治疗前血清CCL20和CCR6浓度显著高于健康对照组(P均<0.01),进展期血清CCL20和CCR6浓度较稳定期及正常对照组升高(P均<0.01),稳定期血清浓度亦高于正常对照组(P均<0.05),差异均有统计学意义;治疗组治疗前血清CCL20和CCR6浓度与PASI评分均呈正相关(P<0.05)。阿维A治疗寻常性银屑病有效率为78.75%,治疗后4周、8周血清CCL20和CCR6浓度显著低于治疗前,治疗后8周亦显著低于治疗后4周,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论寻常性银屑病患者血清CCL20和CCR6浓度升高参与其发病过程,降低CCL20及其受体CCR6水平可能是阿维A治疗寻常性银屑病的机制之一。

CCR6-CCL20趋化轴在TH17细胞介导的肺纤维化大鼠肺组织中作用机制的研究

目的探讨CCR6-CCL20趋化轴在Th17细胞介导的肺纤维化大鼠肺组织中作用。方法随机将63只雄SD大鼠为:N组(生理盐水对照组)、B组(肺纤维化模型组)、D组(地塞米松治疗组),采用经气管内注入博来霉素致大鼠肺纤维化模型,对各组大鼠肺组织,分别采用HE染色观察病理变化;流式细胞术计数Th17细胞;免疫组化法评价CCR6表达;酶联免疫吸附试检测CCL20水平;结果 TH17细胞、CCR6、CCL20、在B、D组大鼠肺组织中不同时间点与N组相比较表达均明显增高(P<0.05),以造模7 d最为显著。TH17细胞计数水平与CCR6、CCL20表达有显著的相关性(Th17 vs.CCR6,r=0.693,P<0.01;Th17 vs CCL20,r=0.761,P<0.01)。结论 Th17细胞介导大鼠肺组织纤维化过程中,CCR6-CCL20起到重要的趋化Th17细胞作用。

CCL20、CCR6及IL-17A在寻常型银屑病患者血清中的表达及意义

目的观察趋化因子CCL20及其受体CCR6、白细胞介素(IL)-17A在银屑病患者血清中的变化,并探讨其在银屑病发病中的作用。方法采用酶联免疫吸附法测定26例斑块型、7例点滴型银屑病患者及8名健康人血清中CCL20、CCR6及IL-17A的浓度,并对银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)评分、病程进行相关性分析。结果斑块型银屑病患者血清CCL20、CCR6及IL-17A浓度(748.74±268.72,10.20±3.75,39.22±13.21)均显著高于健康对照组(578.45±204.93,6.79±4.61,25.54±13.04)(P分别<0.05,<0.01,<0.01)。点滴型银屑病与对照组差异无统计学意义。CCL20、CCR6与PASI评分呈正相关(r=0.416,r=0.350)(P<0.05)。CCL20、CCR6及IL-17A三者之间均存在显著正相关(r=0.852,r=0.801,r=0.825)(P<0.001),与病程无明显相关性。结论 CCL20、CCR6及IL-17A参与斑块型银屑病的病理过程。

CCL20对CBA/J小鼠CCR6^+调节性T细胞及妊娠结局的影响

目的研究CCL20对CBA/J小鼠CCR6^+调节性T细胞(Treg细胞)及妊娠结局的影响。方法将CBA/J(♀)×DBA/2(♂)作为自然流产小鼠模型(自然流产组),CBA/J(♀)×Balb/c(♂)作为正常妊娠小鼠模型(正常妊娠组)。于CBA/J小鼠不同的妊娠时期,观察妊娠结局,采用RT-PCR、Western blotting、ELISA、流式细胞技术检测CCL20及CCR6^+Treg细胞的动态变化。给予正常妊娠小鼠CCL20中和抗体,自然流产小鼠重组CCL20,观察妊娠结局的变化。体外观察CCL20及其抗体对Treg细胞的趋化、增殖、细胞因子水平的变化。结果妊娠14.5 d(gd 14.5),自然流产组和正常妊娠组的胚胎吸收率分别为11.25%和2.54%,两者之间差异有统计学意义(P=0.001 8)。不同妊娠时期,自然流产组小鼠外周血及子宫中CCL20及CCR6的表达均低于正常妊娠组。在妊娠早期尤其是gd 2.5时,正常妊娠组小鼠CCL20和CCR6表达水平及Treg细胞比例均明显上升,而在自然流产组小鼠中并未出现明显的上升。在gd 0.5给予正常妊娠小鼠CCL20中和抗体后,小鼠的胚胎吸收率显著增加,而CCR6^+Treg的比例明显下降。给予自然流产小鼠重组CCL20后,小鼠的胚胎吸收率下降,而CCR6^+Treg的比例上升。CCL20能够促进Treg细胞的趋化功能、增殖功能以及其抑制性细胞因子的分泌功能,从而导致T细胞之间的平衡向Th2及Treg细胞倾斜,有利于妊娠的维系。结论 CBA/J(♀)×DBA/2(♂)小鼠的自然流产可能与CCL20及CCR6^+Treg的下调有关,尤其在孕早期。早期干预CCL20的蛋白水平能够改变CCR6^+Treg细胞的数量及功能,影响妊娠结局。

CCL20、CCR6和Th17在慢性牙周炎患者外周血中的表达

目的探讨趋化因子CCL20及其受体CCR6、Th17细胞在慢性牙周炎患者外周血中的表达。方法收集慢性牙周炎患者42例为病例组,牙周健康者30例为对照组。采用流式细胞术检测外周血Th17细胞表达水平,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血浆中CCL20、CCR6及IL-17的浓度,并分析CCL20、IL-17及Th17与牙周袋深度(probing depth, PD)的相关关系。结果与正常组比较,病例组CCL20、CCR6、IL-17和Th17表达水平均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析表明CCL20、Th17和IL-17与PD呈正相关关系(P<0.05)。结论 CCL20、CCR6与Th17表达水平上调,推测与慢性牙周炎的发病有关。

CCL20及其受体CCR6与消化系肿瘤

趋化因子是一种小的结构相关的趋化性细胞因子,不仅在炎症反应中起重要作用,而且与肿瘤的发生发展有关。趋化因子CCL20是趋化因子CC家族中的一员,趋化因子受体CCR6是目前发现的CCL20唯一受体。近年,越来越多研究表明,趋化因子CCL20及其受体CCR6与消化系肿瘤密切相关。然而,人们对CCL20及其受体CCR6在消化系肿瘤的作用机制尚未完全认识。本文就趋化因子CCL20及其受体CCR6在消化系肿瘤研究中的进展进行综述,以期更好地理解两者之间的关系,并为CCL20及其受体CCR6成为消化系肿瘤治疗靶点的可能性提供依据。

CCL20及其受体CCR6在COPD气道内及外周血的变化及意义

目的研究CCL20、CCR6在COPD大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)及外周血中的含量及CCL20抗体治疗后的变化,以了解CCL20/CCR6趋化轴在COPD发病过程中的可能作用机制及CCL20抗体的治疗作用。方法 30只Wistar大鼠随机分为正常组、COPD组及CCL20治疗组,每组10只,采用烟熏4周及气道内注入脂多糖(LPS)2次的方法制备COPD组模型,CCL20治疗组模型于造模前第1天腹腔内注入CCL20抗体,余处理同COPD组。3组大鼠均于4周后处死取其肺组织行病理HE染色,同时采用ELISA方法测定BALF及外周血中CCL20、CCR6的含量。结果 COPD组大鼠肺组织病理显示符合人类COPD特征性病理改变,CCL20治疗组肺组织病理显示其病变性质较COPD组减轻。CCL20治疗组大鼠BALF中CCL20及CCR6含量均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但低于COPD组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CCL20治疗组大鼠外周血中CCL20的含量高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但与COPD组相比差异无统计学意义;外周血中CCR6的含量在3组差异无统计学意义。结论 CCL20及其受体CCR6可能参与COPD发病及进展过程,CCL20抗体可影响CCL20及CCR6在气道内的变化,可改善COPD大鼠一般状态及病理损伤进展。

CCR6-CCL20对食管鳞癌患者体内Th17细胞分布的影响

目的研究CCR6-CCL20对食管鳞癌患者体内Th17细胞分布的影响。方法采用流式细胞术检测食管鳞癌患者手术切除的癌组织、癌旁组织及外周血中Th17细胞的比例及CCR6+Th17细胞的比例。RT-PCR方法检测组织中CCL20 mRNA水平。结果与癌旁组织及外周血相比,癌组织中Th17细胞明显升高(P<0.01);癌组织中CCR6+Th17细胞的比例高于癌旁组织及外周血(P<0.01);癌组织中CCL20 mRNA水平高于癌旁组织(P<0.01),并与Th17呈正相关。结论 CCR6-CCL20趋化轴可能在食管鳞癌患者Th17细胞浸润到肿瘤组织中发挥重要作用。

恒河猴胃肠道相关淋巴组织中CCL25、CCR9、CCL20及CCR6转录水平的定量分析

目的:阐明恒河猴胃肠道相关淋巴组织中CCL25、CCR9、CCL20和CCR6转录产物的分布和丰度。方法:建立CCL25、CCR9、CCL20和CCR6转录水平的Taqman探针实时定量PCR检测方法。提取胃肠道相关淋巴组织和非胃肠道相关淋巴组织的总细胞RNA,检测CCL25、CCR9、CCL20和CCR6的mRNA的存在和表达水平。结果:(1)在恒河猴的所有检测组织中CCL25、CCR9、CCL20和CCR6的mRNA均有表达。在胃肠道相关淋巴组织中,CCL25和CCR9的mRNA表达主要在小肠而不是大肠,而CCL20和CCR6的mRNA则表达在胃肠道所有节段中。在非胃肠道相关淋巴组织中,CCL25和CCR9的mRNA在胸腺中的表达水平最高;而CCR6 mRNA在脾脏和腹股沟淋巴结中含量最丰富。(2)相关分析结果显示CCL25与CCR9mRNA的表达具有显著的相关性(P=0.002 0,r2=0.480 2),CCR9与CCR6 mRNA的表达也具有相关性(P=0.003 9,r2=0.436 4)。结论:与人相似,CCL25、CCR9、CCL20和CCR6 mRNA在恒河猴的胃肠道相关淋巴组织中高度且有区别地表达,表明恒河猴适宜用于与这些分子相关的黏膜免疫及人类疾病研究。

寻常性银屑病患者外周血CCR6、CCL20及IL-17mRNA的表达

目的:研究CC趋化因子受体(CCR)6、CC趋化因子配体(CCL)20及白介素(IL)-17在寻常性银屑病发病机制中的作用。方法:采用反转录-聚合酶链式反应(RT.PCR)法检测30例寻常性银屑病患者(患者组)和30例健康人(正常对照组)外周血CCR6、CCL20及IL-17 mRNA的表达水平。结果:①患者组外周血CCR6、CCL20及IL-17 mRNA表达水平显著高于正常对照组(P<0.001),并且CCL20与IL-17的表达水平存在显著正相关(r=0.516,P=0.004);②患者组外周血CCR6、CCL20及IL-17mRNA水平与银屑病皮损面积及严重程度指数(PASI)评分均呈正相关(r值分别为0.514、0.363及0.533,P均<0.05)。结论:CCR6、CCL20与IL-17可能与寻常性银屑病的发病密切相关。

模拟微重力对猕猴肺组织趋化因子CCL20及其受体CCR6表达的影响

目的探讨模拟微重力对猕猴肺组织CC亚族趋化因子配体20(CCL20)及趋化因子受体6(CCR6)mRNA和蛋白表达的影响。方法 15只猕猴分为3组,每组5只:对照组、模拟组、恢复组。HE观察猕猴肺组织结构,实时荧光定量PCR、免疫组化法检测肺组织中CCL20及CCR6 mRNA和蛋白表达。结果模拟组和恢复组猕猴肺组织可见肺泡间隔增厚,肺间质内及支气管旁可见淋巴细胞浸润,恢复组较模拟组减轻。模拟组、恢复组CCL20 mRNA的表达水甲较对照组增高,但差异无统计学意义。模拟组CCR6 mRNA的表达水平较对照组、恢复组显著增高(P<0.01)。模拟组CCL20及CCR6蛋白表达较对照组、恢复组显著升高(p<0.05)。结论中、长期模拟微重力可引起肺组织结构破坏、淋巴细胞浸润,并可引起猕猴肺组织中CCL20及CCR6表达增强。

CCL20及其受体CCR6在非小细胞肺癌组织的表达及意义

CCL20是近来发现的CC趋化因子家族的新成员,主要表达于肝脏、肺脏、淋巴结、胰腺及外周血细胞[1]。CCR6是CCL20的特异性趋化因子受体。目前关于CCL20及其受体CCR6的研究多集中在与乳腺癌、胰腺癌、肝癌的发生、转移的关系上,而与非小细胞肺癌相关的研究报道甚少。本文通过采用快捷免疫组织化学MaxVision两步法检测CCL20及其受体CCR6在肺癌组织、癌旁组织的表达,并以正常肺组织作为对照，探讨二者与非小细胞肺癌的关系。