CCL21/CCR7轴与乳腺癌转移及治疗的相关研究进展

乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤,是全世界女性死亡的最常见原因之一。趋化因子CCL21是一种具有趋化细胞迁移功能的低分子量蛋白质,CCL21可以与淋巴细胞表面表达的CCR7受体结合,促使其迁移至乳腺肿瘤相关部位;同时还能与乳腺肿瘤细胞上表达的CCR7配体结合,使其不断向正常部位转移和侵袭,从而导致癌细胞恶性发展。CCL21/CCR7轴与乳腺癌的治疗、转移、侵袭与预后有着密切联系。我们简要综述近年来CCL21/CCR7轴与乳腺癌的转移及治疗相关研究进展,以期为乳腺癌的临床治疗提供参考。

CCL21/CCR7轴促进人肺癌A549细胞的趋化与侵袭

目的:研究CCL21/CCR7轴对肺癌A549细胞定向趋化与侵袭活性的影响。方法:RT-PCR法从临床肺腺癌标本中扩增出CCR7编码区序列,定向克隆至载体pEGFP-N1中,稳定转染A549细胞,Boyden小室法检测转染前后A549细胞对CCL21的趋化和侵袭活性的改变。结果:CCL21作用下多聚碳酸酯膜背面的转染后A549细胞数明显多于转染前的A549细胞数。结论:CCL21/CCR7轴能够促进A549细胞的趋化与侵袭,其可能参与了肺癌淋巴结转移的过程。进一步研究CCL21/CCR7在肺癌中的作用将有助于阐明肺癌淋巴结转移的机制。

CCL21/CCR7轴对人肺癌A549细胞VEGF-C表达影响的研究

目的研究二级淋巴组织趋化因子/CC趋化因子受体7(CCL21/CCR7)轴对肺癌A549细胞血管内皮细胞生长因子-C(VEGF-C)表达的影响。方法实时定量PCR及Western Blot法检测CCL21作用前后A549细胞及A549-CCR7细胞VEGF-C mRNA及蛋白的表达。结果 CCL21作用下无论是在mRNA水平还是蛋白水平A549-CCR7细胞VEGF-C的表达均较A549细胞高。结论 CCL21与其受体CCR7结合能够促进A549细胞VEGF-C的表达,CCL21/CCR7轴可能参与了肺癌淋巴结转移的过程。进一步研究CCL21/CCR7轴和VEGF-C的关系可能有助于阐明肺癌淋巴结转移的机制。

CCL21/CCR7轴在肿瘤淋巴结转移中的作用

转移是恶性肿瘤的重要生物学特征,也是临床恶性肿瘤治疗的主要障碍和肿瘤病人死亡的根本原因。而淋巴结转移是多数实体肿瘤的主要转移方式。近来研究表明,CCL21/CCR7轴在恶性肿瘤淋巴结转移中发挥着重要的作用,在肿瘤治疗方面的研究已取得显著进展。因此,对CCL21/CCR7轴的研究可能为肿瘤的靶向治疗找到新的突破口。现就其研究进展情况作一综述。

CCL21/CCR7对小鼠急性心肌梗死后炎症反应及梗死面积的影响

目的:探讨抗CCL21处理对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后小鼠炎症反应和心肌损伤的影响。方法:结扎冠脉前降支构建C57BL/6小鼠心肌梗死模型,随机分为假手术组(Sham)、对照组(isotype-IgG control)和CCL21单抗干预组(goat anti-mouse CCL21 mAb)。qPCR检测AMI后心肌组织CCL21受体CCR7表达,ELISA法检测抗CCL21处理对心肌梗死后小鼠血清炎症趋化因子和肌钙蛋白的影响。HE染色评估心肌梗死后心肌组织炎性细胞浸润。1和7 d后Evans blue/TTC双染评估梗死区和危险区面积。结果:AMI导致小鼠血清CCL21水平和心肌组织CCR7在心肌组织内表达水平显著增高。冠脉结扎后小鼠血清白细胞趋化因子水平显著增高,anti-CCL21干预组小鼠血清CXCL1等趋化因子水平均显著低于对照isotype-IgG组。给予anti-CCL21处理有效逆转了cTnI和心肌酶LDH-1升高,并显著降低心肌梗死区面积。结论:抗CCL21处理可显著抑制心肌梗死后炎症反应并降低小鼠心肌梗死面积。

CCL21/CCR7对T24细胞生物学行为的影响

目的研究CCL21/CCR7对T24细胞迁移、侵袭、增殖以及抗凋亡能力的影响。方法采用不同浓度的CCL21(0、50、100、200ng/ml)作用T24细胞,用Transwell实验研究CCL21对T24细胞的迁移与侵袭能力;用MTT法研究了CCL21对T24细胞的增殖能力的影响,用FCM研究了CCL21对T24细胞抵抗ADM诱导的细胞凋亡,同时用Western blot检测了侵袭相关蛋白MMP-2与MMP-9表达及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax的表达。结果 CCL21作用于T24细胞能增强其迁移和侵袭能力,增强效果依赖于CCL21的浓度,CCL21能增加MMP-2与MMP-9的表达;CCL21还能促进T24细胞的增殖与抗凋亡能力,并能上调Bcl-2蛋白的表达,而抑制Bax蛋白的表达。结论 CCL21/CCR7增强了T24细胞的迁移与侵袭能力,促进了T24细胞的增殖与抗凋亡。

血清CCL21和CCR7水平与急性心肌梗死患者冠脉病变程度的相关性分析

【目的】探讨血清趋化因子CCL21及其受体CCR7与急性心肌梗死(AMI)患者冠脉病变程度的相关性。【方法】选取2014年2月至2015年6月本院收治的86例AMI患者为研究对象,采用Gensini积分系统定量评价每支冠脉血管病变狭窄程度,根据Gensini评分将其分为轻度病变组(O^30分,n=31),中度病变组(30~60分,n=29),重度病变组(≥60分,n=26)。采集静脉血栓测血清CCL21、CCR7水平。随访期间记录不良心血管事件发生情况。【结果】中度病变组、重度病变组Gensini积分、血清CCL21、CCR7水平显著高于轻度病变组,重度病变组Gensini积分、血清CCL21、CCR7水平显著高于中度病变组,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清CCL21、CCR7水平与Gensini积分均呈显著’正相关性(RCCL21=0.785,P<0.05;RCCR7=0.712,P<0.05)。21例患者发生不良心血管事件,包括心源性猝死2例、再发AMI 3例、反复心绞痛9例、血运重建手术7例,其中轻度病变组6例(19.35%),中度病变组8(27.59%),重度病变组7例(26.92%),组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线表明,血清CCL21评估不良心血管事件AUc为0.865,血清CCR7评估不良心血管事件AUC为0.856。【结论】血清CCL21及其受体CCR7水平在一定程度上可以反映AMI患者冠状动脉病变程度,预测不良心血管事件的发生有较高的准确性,具有重要的临床应用价值。

口腔鳞癌中趋化因子CCR7、CCL21表达与淋巴转移的关系

目的探讨CCR7、CCL21对口腔鳞癌淋巴转移的作用。方法选取无和有淋巴转移口腔鳞癌各35例,应用免疫组织化学方法对比检测原发灶及其淋巴转移灶中CCR7、CCL21的表达及淋巴管密度。结果无淋巴转移组CCR7、CCL21阳性表达率明显低于淋巴转移组(P<0.01);无淋巴转移组癌旁组织CCR7、CCL21阳性表达率明显低于淋巴转移组癌旁组织(P<0.01);无淋巴转移组癌旁组织淋巴管密度明显低于淋巴转移组癌旁组织(P<0.01);在淋巴转移组CCR7口腔鳞癌组织中的表达与癌旁组织淋巴管密度密切相关(r=0.870 4,P<0.01)。结论口腔鳞癌旁组织中淋巴管密度与淋巴转移密切相关,CCR7、CCL21在口腔鳞癌淋巴转移过程中发挥重要作用。

CCL21/CCR7信号途径在移植肾纤维化中的作用

目的：探讨CCL21/CCR7信号通路与移植肾纤维化的关系。方法收集吉林大学肾移植中心78例肾移植后肌酐水平上升患者的肾脏穿刺标本，采用常规苏木素-伊红（HE）染色、Masson染色和PAS染色后进行病理诊断，然后采用免疫组化染色方法，观察纤维母细胞表面抗原（FSP）、趋化因子CCL21及其受体CCR7的分布和表达。结果 HE、Masson、PAS染色诊断肾穿刺标准的类型为急性排异反应13例，血管排异反应6例，慢性排异反应8例，交界性病变13例，肾病复发4例，肾小管损伤2例，其他病变2例；相对正常30例。免疫组化染色显示：急性排异反应者FSP表达高于相对正常者（P＜0.01），慢性排异反应者高于移植交界性病变者和相对正常者（P＜0.05和P＜0.01），其他病变类型间FSP表达差异无统计学意义（均P＞0.05）。在炎性细胞多的组织区域纤维母细胞的数量有增多趋势。CCR7阳性纤维母细胞在慢性排异反应者中有增多趋势，CCR7在肾穿刺组织的表达部位主要是血管壁，在部分萎缩的肾小管及间质中可见阳性表达；CCL21主要表达于肾小管上皮细胞和少量纤维母细胞中。各病理分型患者FSP、CCR7、CCL21表达部位及阳性比例比较差异无统计学意义（均P＞0.05）。CCL21和CCR7、FSP和CCL21的阳性表达细胞分别共表达于纤维母细胞和肾小管上皮细胞。结论纤维母细胞的出现与炎性细胞有关，并使急性排异反应转变为慢性排异反应的危险因素加大，CCL21/CCR7在移植肾纤维化发生机制中有重要作用。

CCR7-SLC/ELC生物学轴在乳腺癌亲嗜性淋巴结转移中的作用

目的探讨趋化因子受体7(CCR7)-次级淋巴组织因子(SLC)/EB配体趋化因子(ELC)生物学轴在乳腺癌淋巴结转移中的作用。方法 采用免疫组织化学方法分别检测48例乳腺癌组织,23例乳腺癌腋窝转移淋巴结,15例相应癌旁组织及同期15例纤维腺瘤中CCR7、SLC、ELC蛋白表达情况。结果 (1)转移淋巴结、乳腺癌组织、癌旁组织及纤维腺瘤中CCR7的表达率为87.0%(20/23),62.5%(30/48),33.3%(5/15),20.0%(3/15)。转移淋巴结中CCR7蛋白表达高于其他3组,差异均有统计学意义。在对乳腺癌组织CCR7表达与临床病理特征比较中发现,有淋巴结转移组CCR7表达率为66.7%(20/30),无淋巴结转移组为33.3%(6/18),比较差异有统计学意义(P<0.01)。肿瘤不同分期及雌孕激素不同表达组间CCR7的表达差异无统计学意义。(2)转移淋巴结、乳腺癌组织、癌旁及纤维腺瘤中SLC的表达率分别为91.3%(21/23),66.7%(32/48),7.0%(7/15),40.0%(6/15)。乳腺癌组织与转移淋巴结中SLC的表达差异有统计学意义(P<0.02),而与癌旁及纤维腺瘤组比较差异无统计学意义(P>0.05)。临床病理特征比较中发现Ⅲ期及有淋巴结转移组与Ⅰ、Ⅱ期及无淋巴结转移组间差异有统计学意义(P<0.05)。(3)转移淋巴结、乳腺癌组织、癌旁及纤维腺瘤中ELC的表达率为95.7%(22/23),70.8%(34/48),66.7%(10/15),53.3%(8/15)。不同组间ELC的表达差异结果与SLC一致。结论 CCR7-SLC/ELC轴与乳腺癌癌亲嗜性淋巴结转移中有密切关系,而SLC、ELC的表达和肿瘤的侵袭性及恶性程度有关。

C端截短突变体mCCL21-a(1-57)可拮抗CCL21介导的ERK磷酸化及细胞迁移

趋化因子CCL21(CC-chemokine ligand 21,CCL21)与其受体CCR7(CC-chemokine receptor7,CCR7)的结合可以促进肿瘤的侵袭和转移.本研究旨在构建人趋化因子CCL21的截短突变体,竞争性抑制CCL21与CCR7的结合,从而抑制肿瘤的转移.本研究构建了CCL21的10个截短突变体,通过Transewell细胞迁移实验,筛选出具有良好趋化抑制活性的C端截短体mCCL21-a(1-57).Western印迹和体外细胞迁移实验表明,经原核表达的mCCL21-a(1-57)多肽能够阻断CCL21介导的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的磷酸化,抑制CCL21对人结肠癌细胞SW480的趋化作用.本研究成功制备了趋化因子CCL21的拮抗性多肽mCCL21-a(1-57),并初步鉴定其体外生物活性,为下一步体内功能研究奠定了良好基础.

CCL21在人结肠癌SW480细胞侵袭过程中的作用

背景与目的:既往研究显示趋化因子受体CCR7在胃肠道肿瘤中表达上调,并与淋巴管浸润和淋巴结转移相关。本研究旨在探讨趋化因子CCL21及其受体CCR7在人结肠癌SW480细胞体外侵袭中的作用。方法:在趋化因子CCL21作用的条件下,用划痕实验和Transwell小室检测SW480细胞侵袭能力,免疫印迹检测SW480细胞中金属基质蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达;CCL21预处理的SW480细胞在含足叶乙甙(VP-16)的体系中培养,MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术和Hoechst33258染色检测细胞凋亡。结果:CCL21(100ng/mL)组中SW480细胞向划痕处爬行的速度明显快于阴性对照组;阴性对照组与CCL21(100ng/mL)组中穿膜细胞数分别为(48±4)个和(113±7)个,差异有统计学意义(P<0.05);CCL21(100ng/mL)组中MMP-9的相对表达水平为0.83±0.02,高于阴性对照组的0.38±0.01(P<0.05)。CCL21单独作用不能促进SW480细胞增殖;VP-16组中SW480细胞的增殖抑制率为68.3%,CCL21预处理增强SW480细胞活力,CCL21(100ng/mL)中抑制率降至47.4%;VP-16组与CCL21(100ng/mL)组中凋亡率分别为(65.2±5.2)%和(48.7±3.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CCL21/CCR7可以促进结肠癌SW480细胞的体外侵袭力,并增强其在微环境中的生存能力。

趋化因子受体CCR7及配体对肿瘤生物学行为的影响

在正常和非正常的生理状况下,趋化因子受体通过与其配体的结合在体内发挥着多种生物学作用。全文就新近发现的趋化因子受体CCR7及其配体CCL21和CCL19的研究进展作一综述。

CCL21基因过表达上调重症肌无力患者CK8/18阳性胸腺上皮细胞的抗原呈递功能相关基因

目的明确重症肌无力(MG)患者胸腺组织CC趋化因子配体21(CCL21)的分布;通过CCL21基因转染MG患者细胞角蛋白8/18(CK8/18)阳性胸腺上皮细胞(TEC),探讨CCL21过表达对CK8/18阳性TEC中抗原提呈功能相关分子表达的影响。方法采用免疫组织化学检测CCL21、CK8/18阳性细胞在MG患者胸腺的表达及分布,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测MG患者胸腺CCL21、CCL19及CC趋化因子受体7(CCR7)的mRNA水平;p CMV-CCL21质粒转染MG患者分离的CK8/18阳性TEC,qRT-PCR检测转染前后TEC功能性基因CD80、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、CD86、HLA-DR、HLA-A的mRNA水平。结果 MG胸腺组织中CK8/18阳性细胞明显多于正常对照,且在皮质及髓质区均有分布,CCL21蛋白、CCR7mRNA的水平显著增高。p CMV-CCL21质粒转染TEC后,HLA-A、HLA-DR、ICAM和CD80 mRNA水平显著增加。结论 CCL21过表达,可引起MG患者CK8/18阳性胸腺上皮细胞抗原呈递功能相关基因的表达增高。

趋化因子受体CCR7的免疫学功能研究进展

免疫系统的一个重要特点是能够对外来病原体产生保护性免疫应答,而对自身及环境中无害的抗原保持免疫耐受。近来研究表明,趋化因子受体CCR7（CC-chemokine receptor 7）通过参与胸腺结构和功能的构建,介导免疫细胞归巢至淋巴器官（如初始及调节性T细胞通过高内皮微静脉归巢至引流淋巴结、稳态及炎症状态下树突状细胞通过引流淋巴管进入淋巴结）及在淋巴器官内的准确定位，在免疫反应及免疫耐受中发挥重要作用。

趋化因子配体CCL21与慢性炎症性疾病的关系

近些年来,趋化因子和各种临床疾病的相关关系得到了越来越多的国内外学者的关注。趋化因子配体21(chemokine ligand 21,CCL21)作为趋化因子大家族中的一员,诱导淋巴细胞向次级淋巴组织归巢,参与了多种慢性炎症性疾病的发病过程。现就CCL21与慢性炎症性疾病的研究进展作一简要综述,希望为临床上慢性炎症性疾病的治疗提供一种新的思路。

CCL21／CCR7轴与肿瘤侵袭转移的机制

趋化因子CCL21具有双向效应,其通过与多种免疫细胞表面表达的受体CCR7结合,发挥抗肿瘤、抗感染等免疫效应,而多种肿瘤细胞表面亦表达CCR7,两者结合则促进肿瘤细胞的侵袭转移,导致肿瘤进展.故探析CCL21/CCR7与肿瘤侵袭转移机制,阻断其不利效应,使CCL21有希望用于肿瘤基因治疗.

子宫颈癌中趋化因子CCR7、CCL21表达与淋巴转移的关系

目的:探讨CCR7、CCL21与宫颈癌淋巴转移的关系。方法:选取无淋巴转移子宫颈癌和淋巴转移子宫颈癌各35例,应用免疫组织化学方法检测原发灶及其淋巴转移灶中CCR7、CCL21的表达及podoplanin标记的淋巴管密度。结果:无淋巴转移组CCR7、CCL21阳性表达率明显低于淋巴转移组(P<0.01和P<0.01);CCR7表达与肿瘤分化程度、宫旁浸润、淋巴结转移密切相关(P<0.01);CCL21表达与肿瘤侵犯深度、宫旁浸润、淋巴结转移密切相关(P<0.01);无淋巴转移组癌旁组织淋巴管密度明显低于淋巴转移组癌旁组织淋巴管密度(P<0.01);CCR7表达与癌旁组织淋巴管密度密切相关(r=0.8704,P<0.01)。结论:子宫颈癌旁组织中淋巴管增生扩张,肿瘤细胞CCR7表达、内皮细胞CCL21表达在子宫颈癌淋巴转移过程中发挥重要作用。

CCL21/CCR7——抗肿瘤药物的新靶点

趋化因子CCL21与其受体CCR7在肿瘤细胞选择性和特异性转移过程中发挥重要作用,可能成为抗肿瘤转移药物治疗的新靶点。就其结构和生物学功能、抗肿瘤作用机制、在恶性肿瘤转移中作用的研究进展作一综述,为抗肿瘤新药研发提供思路。

趋化因子CCL21及其受体CCR7在缺血性脑白质损伤中的表达及作用

目的探讨趋化因子CCL21及其受体CCR7在缺血性脑白质损伤(white matter lesion,WML)中的表达及作用。方法对C57Bl/6小鼠采用永久性双侧颈总动脉闭塞法(bilateral common carotid artery occlusion,BCCAo)制备缺血性WML模型。伊文思蓝灌注染色评估血脑屏障通透性。应用免疫荧光染色检测CCL21及其受体CCR7在缺血性WML组织中的表达。对脑微血管内皮细胞进行氧葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)制备体外缺血性WML模型,在OGD 6 h复氧24 h后采用蛋白质印迹分析检测CCL21蛋白表达水平。应用重组CCL21对原代培养的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)进行处理,然后加入脂多糖诱导炎症反应,通过定量聚合酶链反应检测成熟少突胶质细胞标志物髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)mRNA表达水平。结果与假手术组相比,BCCAo后脑组织内伊文思蓝染液渗出显著增多(P<0.05),脑血管内皮细胞CCL21表达水平显著下调(P<0.05),OPCs的CCR7表达水平显著下调(P<0.05)。脑微血管内皮细胞OGD后,CCL21蛋白表达水平较对照组显著下调(P<0.05)。重组CCL21处理OPCs后,MBP mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。结论WML后CCL21/CCR7表达显著下调,应用重组CCL21能促进OPCs细胞分化和成熟,提示其可能在缺血性WML中发挥着重要作用。