草鱼CC趋化因子基因CCL24及其可变剪接

CC趋化因子是一类能够促进动物体内炎症部位的各种白细胞的补充、激活和黏附的趋化性细胞因子家族,是鱼类天然免疫系统的重要组成部分。分析了从草鱼肠道cDNA文库中筛选到的CC趋化因子基因CCL24,并克隆了阅读框区域内的基因组序列。序列分析表明,CCL24基因由4个外显子和3个内含子组成;外显子拼接的序列与CCL24cDNA序列完全一致,编码95个氨基酸,有2个相邻的半胱氨酸(CC),为典型的CC趋化因子亚家族成员。此外,还发现草鱼CCL24基因存在可变剪接现象,第1内含子没有被剪切掉的非正常转录本翻译后可能产生没有CC趋化因子活性的24个氨基酸的短肽,而且这种转录本在精巢、头肾、皮肤、肝胰脏、肠道、肌肉、肾脏等组织均检测到;而正常剪接的CCL24转录本,仅在肾脏和肠道中检测到,且其表达量要明显低于非正常剪接的转录本。

IL-10+IL-4能提高M2巨噬细胞表型和嗜酸性粒细胞的迁移

目的:研究论证IL-10是否能通过诱导IL-4来提高M2。方法:用C57BL/6J鼠中的骨髓细胞诱导M-CSF诱导的骨髓源巨噬细胞,利用小鼠全基因组版本进行转录,进而嗜酸性粒细胞的迁移实验,体内巨噬细胞的转移实验。结果:研究发现在M-CSF诱导的BMDMs中通过IL-4、IL-10及IL-4+IL-10诱导来分析M2巨噬细胞,IL-10通过IL-4来提高M2a标志物的表达,此外,IL-4和IL-10诱导产生CCL24时起协同作用。在GM-CSF诱导的BMDMs中CCL24的表达提高。CCL24是CCR3的激动剂和嗜酸性粒细胞的趋化因子。在体外,IL-4+IL-10激活的巨噬细胞产生大量的CCL24,并且能提高嗜酸性粒细胞的迁移。这个过程能被抗CCL24抗体抑制。IL-4+IL-10激活的巨噬细胞转移到C57BL/6J小鼠的腹膜,这能增加嗜酸性粒细胞浸润腹膜腔。结论:IL-4+IL-10激活的巨噬细胞能增强M2a巨噬细胞相关基因的表达,提高CCL24的产生和嗜酸性粒细胞的浸润,导致嗜酸性粒细胞相关疾病的发生。

孟鲁司特对腺样体肥大患儿血清变态反应及应激指标的影响观察

目的观察及研究孟鲁司特对腺样体肥大患儿血清变态反应及应激指标的影响情况。方法选取66例腺样体肥大患儿为研究对象,将其分为对照组(常规腺样体肥大治疗组)33例和观察组(常规治疗加孟鲁司特组)33例,然后将两组患儿治疗前和治疗后4周、8周及16周的血清变态反应及应激指标进行比较。结果治疗前两组患者的血清变态反应及应激指标均差异无统计学意义(P>0.05),而治疗后4周、8周及12周观察组的血清变态反应及应激指标均低于对照组(P<0.05)。结论孟鲁司特可显著地改善腺样体肥大患儿血清变态反应及应激指标的表达情况,对于本类患儿的疾病治疗效果较好。

共生菌对小鼠外周血及黏膜相关组织中趋化因子配体24和胰岛素样生长因子1表达的调控

目的探讨共生菌群对小鼠外周血及黏膜相关组织(肺脏、肝脏)中趋化因子配体24(CCL24)及胰岛素样生长因子1(IGF-1)表达的调控作用。方法利用ELISA方法检测共生菌缺失小鼠(Abx鼠)及正常小鼠(WT鼠)血清中、肺脏及肝脏组织匀浆中CCL24及IGF-1的浓度,并对其表达量进行分析比较。结果小鼠缺失共生菌后,其血清中CCL24浓度上调[WT与Abx,(1. 018±0. 043)μg/L与(1. 509±0. 119)μg/L],而IGF-1浓度无显著变化[WT与Abx,(1. 240±0. 019)μg/L与(1. 250±0. 066)μg/L];其肺脏中CCL24[WT与Abx,(11. 984±0. 683) ng/g与(14. 626±0. 769) ng/g]和IGF-1[WT与Abx,(0. 998±0. 024) ng/g与(1. 290±0. 031) ng/g]表达量均显著上调;其肝脏中CCL24(WT与Abx,(11. 575±0. 609) ng/g与(8. 704±0. 458) ng/g]和IGF-1[WT与Abx,(2. 989±0. 073) ng/g与(1. 112±0. 027) ng/g]表达量均显著下调。结论共生菌对小鼠外周血、肺脏、肝脏中CCL24和IGF-1表达调控具有组织特异性。

白细胞介素13在大鼠气道炎症中作用的初步探讨

目的:通过气管内滴注葡聚糖诱导大鼠气道炎症,研究白细胞介素13(IL-13)在支气管炎症过程中的作用。方法:用葡聚糖G200(5 mg/kg)气管内滴注形成大鼠气道炎症,然后进行支气管肺泡灌洗,检测大鼠气道炎症时肺组织中IL-13和嗜酸细胞趋化蛋白-2(CCL24)基因的表达。结果:葡聚糖G200所致大鼠肺损伤后IL-13和CCL24的mRNA表达水平因葡聚糖G200刺激明显升高(P<0.05),同时血液及支气管肺泡灌洗液中白细胞数也随之升高(P<0.05);试验中采用糖皮质激素类药物甲强龙琥珀酸钠抑制因葡聚糖G200气管内滴注所致的大鼠气道炎症,甲强龙琥珀酸钠处理后与盐水滴注的对照组接近(P>0.05)。结论:用葡聚糖G200进行气管内滴注所致气道炎症过程中,IL-13和CCL24可引起肺泡灌洗液中淋巴细胞及嗜酸细胞的聚集。糖皮质激素类药物能有效抑制IL-13和CCL24的产生,减轻炎症反应。

大鼠急性呼吸道损伤时白细胞介素13及嗜酸性趋化蛋白-2的mRNA水平变化

目的:研究通过气管内滴注葡聚糖诱导大鼠气道炎症反应发生时白细胞介素-13(IL-13)及嗜酸性趋化蛋白-2(CCL-24)mRNA的水平变化,了解其在支气管炎症过程中的作用。方法:由葡聚糖G200(5mg/kg)气管内滴注制成大鼠气道炎症模型,然后用逆转录PCR法,检测大鼠气道炎症时肺组织中IL-13和CCL24mRNA的表达情况。同时进行支气管肺泡灌洗,观察此时白细胞、淋巴细胞的含量变化。结果:葡聚糖G200所致大鼠肺损伤后IL-13和CCL24的mRNA表达水平因葡聚糖G200刺激明显升高(P<0.05),同时血液及支气管肺泡灌洗液中白细胞数、淋巴细胞也随之升高(P<0.05)。结论:用葡聚糖G200进行气管内滴注所致气道炎症过程中,IL-13和CCL24可引起肺泡灌洗液中淋巴细胞及嗜酸细胞的聚集。

STAT6圈套寡核苷酸对支气管哮喘小鼠Eotaxin表达及气道炎症的抑制作用

目的观察STAT6圈套寡核苷酸(ODN)对支气管哮喘小鼠嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)表达及气道炎症的影响,探讨STAT6圈套ODN治疗支气管哮喘的可行性。方法将BALB-C雌性小鼠随机分为:健康对照组(N组)、哮喘组(A组)、STAT6圈套ODN哮喘组(ST-ODN组)及无序ODN哮喘组(SC-ODN组),ODN经鼻气道滴入ST-ODN组及SC-ODN组小鼠肺部,荧光显微镜观察肺组织中异硫氰酸荧光素标记的寡核苷酸(FITC-ODN)的分布;测定肺泡灌洗液(BALF)中白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYM)及嗜酸性粒细胞(EOS)数量;观察气道炎症病理变化;免疫组化法检测肺组织Eotaxin蛋白;RT-PCR法检测肺组织Eotaxin mRNA表达。结果 (1)FITC-ODN转染组小鼠肺部发现FITC着色,ODN肺组织转染成功。(2)小鼠肺组织ST-ODN组较哮喘组炎症病理反应明显减轻。(3)BALF中哮喘组与空白对照组比较,WBC、LYM、EOS均增高,差异有统计学意义(P<0.01);ST-ODN组则明显低于哮喘组,差异有统计学意义(P<0.01);而SC-ODN组与哮喘组比较差异无统计学意义(P>0.05);(4)Eotaxin蛋白及mRNA表达:哮喘组明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01);ST-ODN组低于哮喘组,差异有统计学意义(P<0.01);而SC-ODN组与哮喘组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 STAT6圈套ODN可经鼻气道滴入方式直接转染至小鼠肺组织;STAT6圈套ODN可抑制Eotaxin的表达,调控哮喘小鼠气道的EOS聚集;抑制哮喘小鼠气道炎症反应。

疏风通络方对哮喘小鼠模型Eotaxin、CCR3蛋白表达及ERK磷酸化的影响

目的:初步探讨疏风通络方通过影响哮喘小鼠模型血清嗜酸细胞活化趋化因子(Eotaxin)及肺组织CC类趋化因子受体3(CCR3)、细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的表达水平进而抑制哮喘气道炎症的机制。方法:将70只C57BL/6小鼠随机分成正常组、哮喘模型组、疏风通络方低、中、高剂量组(7.75、15.5、30 g·kg^(-1))、百日咳素(PTX)组、CCR3抑制剂(SB328437)组、磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂(LY294002)组、p38蛋白激酶拮抗剂抑制剂(SB203580)组、ERK抑制剂(PD98059)组。采用卵清蛋白(OVA)、氢氧化铝[Al(OH)3]腹腔注射+OVA雾化建立小鼠哮喘模型(均为0.2 mL)。造模成功后,应用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠各组肺组织炎症浸润情况、酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组小鼠血清中的Eotaxin[CC类趋化因子11(CCL11)、CC类趋化因子24(CCL24)]的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织ERK磷酸化水平及CCR3含量。结果:与正常组比较,模型小鼠支气管明显收缩,管腔狭窄,肺泡结构破坏,肺组织中可见大量炎性细胞浸润,支气管内可见黏液栓,气管黏膜下组织水肿,皱襞增多等表现,小鼠血清中CCL11、CCL24的含量显著增加(P<0.01),肺组织中CCR3蛋白的表达量明显增高(P<0.05),模型组、PTX组肺组织中的ERK水平明显升高(P<0.05),模型组、疏风通络方低剂量组肺组织中磷酸化(p)-ERK的水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,病理显示疏风通络方高剂量组肺组织病变明显减轻;疏风通络方高剂量组、SB328437组CCL11含量明显降低(P<0.05),疏风通络方低、高剂量组、PTX组、SB203580组、PD98059组、SB328437组小鼠肺组织中CCR3蛋白的表达明显降低(P<0.05);疏风通络方高剂量组、PD98059组p-ERK的水平明显降低(P<0.05);PD98059组的ERK水平明显降低(P<0.05)。结论:疏风通络方可以抑制哮喘气道炎症,其机制可能与其通过下调CCR3蛋白、CCL11的表达及ERK磷酸化抑制嗜酸性粒细胞活化有关。