唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28与儿童龋病严重程度关系及预测龋病复发价值

目的:探讨唾液碳酸酐酶Ⅵ(Carbonic anhydraseⅥ,CA-Ⅵ)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase2,MMP-2)、CC趋化因子配体28(CC chemokine ligand 28,CCL28)水平在判断儿童龋病病情及预测龋病复发中的应用效果。方法:选取2019年4月至2022年4月我院收治且均完成1 y随访的86例龋病者为研究对象。根据龋失补指数(decay missing fill index,DMFT)将患者分为低龋组(39例,DMFT=1~4)和高龋组(47例,DMFT≥5)。根据治疗后1 y复发情况将患者分为复发(24例)和未复发(62例)。比较低龋组和高龋组入院时唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28水平及与DMFT的相关性;比较复发、未复发患者唾液CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28水平。分析CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28水平对龋病复发的危险度。分析CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28水平预测龋病复发的价值。结果:入院时高龋组唾液CA-Ⅵ水平低于低龋组,与DMFT呈负相关;高龋组唾液MMP-2、CCL28水平高于低龋组,与DMFT呈正相关(P<0.05)。入院时、治疗后1 m时复发者唾液CA-Ⅵ水平均明显低于未复发者,MMP2、CCL28水平均明显高于未复发者(P<0.05)。CA-Ⅵ、MMP-2、CCL28水平联合预测龋病复发AUC为0.808,最佳敏感度、特异度分别为91.67%、77.42%。结论:唾液CA-VI、MMP-2、CCL28水平的变化对儿童龋病病情判断提供参考依据,对预后评估具有重要意义。

趋化因子CCL28过表达对人乳腺癌细胞增殖的影响

背景与目的:CCL28,又称为黏膜相关上皮趋化因子(mucosa-associated epitheliachemokine,MEC),是趋化因子CC家族中的一员。研究表明,CCL28与肿瘤发生、发展有关,但对其在乳腺癌中的功能还知之甚少。本文旨在探讨CCL28过表达在体外对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响。方法:构建CCL28过表达载体pBabe-CCL28表达质粒,将重组的pBabe-CCL28基因和空载体pBabe转染细胞Phoenix,利用逆转录病毒感染乳腺癌细胞MDA-MB-231,通过嘌呤霉素药物筛选获得稳定表达CCL28的MDA-MB-231/CCL28细胞系和感染空载体的MDA-MB-231/vector细胞系,利用半定量RT-PCR、实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测CCL28的基因表达和蛋白质水平;利用CCK8、软琼脂克隆培养及流式细胞术检测CCL28过表达后细胞增殖、克隆形成能力及凋亡的变化;利用Western blot检测CCL28过表达后凋亡相关蛋白的变化。结果:成功建立了稳定表达CCL28的细胞系MDA-MB-231/CCL28,与空载体对照组相比,pBabe-CCL28质粒感染入细胞后CCL28基因表达水平明显增高,说明CCL28 cDNA重组质粒构建成功。CCK8及软琼脂克隆实验结果显示,MDA-MB-231/CCL28的增殖能力明显高于MDA-MB-231/vector,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术结果显示,MDA-MB-231/CCL28细胞凋亡比例减少,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达增加。结论:CCL28过表达可以显著促进人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖能力,抑制乳腺癌细胞凋亡,后者可能与Bcl-2上调有关。CCL28有望成为临床治疗乳腺癌的潜在基因靶点。

CCL28通过增强MMP-2活力促进滋养细胞浸润功能

目的:探究趋化因子CCL28对滋养细胞生物学行为的影响及其调控机制。方法:分离培养并鉴定原代人早孕蜕膜基质细胞(DSCs),ELISA法检测人DSCs与人正常绒毛膜滋养细胞系HTR8/Svneo的CCL28的分泌。采用噻唑兰(MTT)、Annexin V-FITC、Transwell方法检测人工合成的CCL28对HTR8/Svneo细胞的增殖、凋亡及浸润能力的影响。RT-PCR及明胶酶谱法阐明HTR8/Svneo细胞浸润功能改变的机制。结果:HTR8/Svneo细胞与蜕膜基质细胞均能分泌CCL28,两者共培养能促进CCL28的分泌(P<0.01)。人工合成的CCL28不影响滋养细胞的增殖(P>0.05)和凋亡(P>0.05),但能增强细胞的浸润能力(P<0.01),且主要通过受体CCR10介导。RT-PCR与明胶酶谱法提示,CCL28通过提高滋养细胞内MMP-2活力来增强其浸润能力。结论:CCL28通过与受体CCR10的结合,以自分泌或旁分泌的方式增强滋养细胞MMP-2活力来促进滋养细胞的浸润功能。

CCL28在类风湿关节炎患者外周血和炎症关节中的表达

目的:研究类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)患者外周血、滑液和滑膜组织中趋化因子CCL28的表达。方法:酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测正常人血浆、RA患者血浆及滑液CCL28水平,免疫组织化学法分析RA和骨关节炎患者滑膜组织中CCL28表达。结果:活动期RA患者有关节积液组血浆CCL28水平高于无关节积液组(P<0.01)和健康对照组(P<0.05),其滑液CCL28水平显著高于配对血浆(P<0.001);CCL28水平与RA患者的临床和实验室指标无关。RA滑膜组织中,CCL28表达于衬里层和衬里下层的巨噬细胞及中性粒细胞,而骨关节炎对照滑膜几乎无CCL28表达。结论:RA患者炎症关节中CCL28的表达上调,CCL28可能是介导炎性细胞迁移进入关节的重要趋化因子。

CCL27 CCL28及CCR10在癫痫小鼠急性期表达增高

目的探讨趋化因子CCL27、CCL28及其受体CCR10在小鼠癫痫急性期外周血中的表达变化。方法取正常及癫痫小鼠急性期不同时间点(10min、30min、1h、2h)外周血利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测毛果云香碱致癫痫发作小鼠急性期外周血中CCL27、CCL28mRNA水平;同期取正常及癫痫急性期不同时间点(10min、30min、1h、2h)肝素抗凝外周血,提取淋巴细胞层后利用FACSsort型流式细胞仪检测外周血淋巴细胞CCR10蛋白水平的表达变化。结果癫痫小鼠发作急性期外周血中CCL27、CCL28mRNA水平、淋巴细胞中CCR10蛋白表达水平均在癫痫发作2h高于对照组(P<0.05)。结论癫痫发作早期已出现外周血免疫功能紊乱,该病理变化可能与癫痫发病过程中的炎性反应和神经细胞的凋亡相关。

趋化因子CCL28在乳腺癌中的表达及意义

背景与目的:目前已知趋化因子在乳腺癌的发生、发展中扮演着重要的角色,但对CCL28在乳腺癌的功能报道较少,本研究旨在探讨趋化因子CCL28在人乳腺癌中的表达情况,并分析其与乳腺癌相关临床病理指标之间的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测趋化因子CCL28在150例乳腺癌、相应癌旁正常乳腺组织的表达差异情况;分析乳腺癌中CCL28表达与患者年龄、临床分期、肿瘤直径、淋巴结转移状况、雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)等临床病理指标的相关性。结果:①CCL28在乳腺癌组及癌旁正常乳腺组中均有表达,在乳腺癌组中CCL28的阳性表达率为54.6%,在癌旁正常乳腺组中的阳性表达率为9.3%;CCL28在乳腺癌组的表达明显高于癌旁正常乳腺组,差异有统计学意义(P<0.001)。②CCL28的表达与患者的年龄、肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移与否、ER、PR及HER-2的表达等临床病理指标无关(P>0.05)。结论:CCL28在乳腺癌中呈现高表达而在癌旁正常乳腺组织则表达较少,CCL28可能与乳腺癌发生、发展有关。CCL28在乳腺癌中表达的高低与发生淋巴结转移无明显的相关性,CCL28能否作为预测淋巴结转移的指标有待于进一步的研究。

趋化性细胞因子CCL28在人涎腺腺淋巴瘤的表达

目的观察趋化性细胞因子CCL28在人涎腺腺淋巴瘤中的表达。方法提取38例人涎腺腺淋巴瘤样本中的总RNA,进行逆转录及PCR反应,然后采用实时荧光定量PCR,检测CCL28 mRNA在涎腺腺淋巴瘤瘤体组织和涎腺正常组织中的表达。结果腺淋巴瘤瘤体组织中趋化性细胞因子CCL28 mRNA的表达较正常组织显著降低(P<0.01)。结论人涎腺腺淋巴瘤体组织对趋化性细胞因子CCL28表达的降低,可能与其发生发展有关。

CCL25/CCR9和CCL28/CCR10在仔猪胃肠道组织中的表达

【研究目的】旨在探讨CCL25/CCR9、CCL28/CCR10在仔猪胃肠道中的表达规律。【方法】通过常规RT-PCR检测CCL25/CCR9、CCL28/CCR10分别在15日龄和30日龄仔猪胃肠道不同部位的表达。【结果】CCL25mRNA主要在小肠表达,而CCR9mRNA在小肠、大肠及胃中均表达,且表达量较高;CCL28mRNA和CCR10mRNA在小肠、大肠及胃中均表达,并以后段肠道的表达量较高。CCL25/CCR9、CCL28/CCR10在30日龄仔猪胃肠道中的表达高于15日龄仔猪。【结论】初步得出CCL25/CCR9、CCL28/CCR10在仔猪胃肠道中的表达规律,并为进一步揭示在其它组织中的表达及它们的生物学作用奠定了基础。

趋化因子CCL28的研究进展

趋化因子（chemokines）是趋化性细胞因子（chemotactic cytokines）的简称,通过与特定细胞上相对应的趋化因子受体结合,可刺激白细胞和肿瘤细胞产生定向迁移趋化因子.CCL28是趋化因子家族的成员之一,是黏膜免疫过程中的重要成员,受到研究人员的重视.随着研究的深入,越来越多的研究围绕CCL28在肿瘤中的作用机制进行探索,本文主要针对CCL28近年的主要进展作出概括.

趋化性细胞因子CCL28在多形性腺瘤中表达变化的研究

目的研究趋化性细胞因子CCL28在人正常腮腺和多形性腺瘤中的表达,探讨其与该肿瘤的关系。方法实时荧光定量PCR分别检测正常腮腺腺体和多形性腺瘤中CCL28mRNA表达,用免疫组化方法观察CCL28蛋白在组织中的含量。结果多形性腺瘤中趋化性细胞因子CCL28的表达显著降低(P<0.05)。结论趋化性细胞因子CCL28在肿瘤中表达的减少可能与该肿瘤的发生有一定作用。

兔CCL28基因的克隆与序列分析

克隆并分析兔CCL28基因。基于电子延伸序列,设计1对克隆引物,兔盲肠黏膜组织提取总RNA,进行RT-PCR,将PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coliJM109感受态细胞、检测阳性克隆、测序并进行序列分析。克隆的兔CCL28基因片段长为133 bp,编码由44个氨基酸残基组成的CCL28前体蛋白,克隆的兔CCL28基因与绵羊、野猪的同源性分别为76.7%、77.4%,推导的氨基酸序列与绵羊、野猪的同源性分别为56.8%、56.8%,结构特征与绵羊、野猪的相一致。并注册GenBank(Accession.EU727201)。

猪胃肠道组织中趋化因子CCL28的表达研究

应用RT-PCR方法,分别检测了CCL28在15 d和30 d龄仔猪胃肠道组织中的表达。结果表明,CCL28在15 d龄猪的十二指肠、回肠、盲肠、结肠、直肠和30 d龄仔猪的十二指肠上段、下段、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、胃组织中有表达;在15 d龄仔猪的十二指肠上段、空肠、胃组织中无表达,在回肠、结肠组织中表达弱;在30 d龄仔猪的十二指肠、空肠、盲肠、胃组织中表达弱。CCL28的时空表达提示其与仔猪胃肠道黏膜组织的发育及在不同部位的作用有关。

布地奈德福莫特罗对哮喘患者血清中CCL28的影响研究

目的研究布地奈德福莫特罗对哮喘患者血清中CCL28的影响。方法取轻中度急性发作期哮喘患者的静脉血，分离血清后，检测血清中CCL28的含量，对患者进行布地奈德福莫特罗干预，1w后复查血清中的CCL28。结果急性发作期哮喘患者血清中CCL28为（37.58±3.64）ng/mL，布地奈德福莫特罗干预后患者血清CCL28降为（10.37±1.05）ng/mL。结论布地奈德福莫特罗能明显降低CCL28，可能对抑制哮喘急性期嗜酸性细胞炎症起重要作用。

缺氧微环境中CCL28高表达促进HCCLM3细胞迁移和侵袭

目的探讨缺氧条件下HCCLM3细胞趋化因子CCL28表达情况及作用。方法实时定量PCR和ELISA方法检测缺氧条件下肝癌细胞HCCLM3趋化因子CCL28表达水平;运用小干扰RNA(small interferingRNA,siRNA)和Lipofectamine 2 000细胞转染技术下调CCL28表达;用Transwell和Matrigel观察肝癌细胞HCCLM3侵袭迁移情况;采用明胶酶谱法测定CCL28-siRNA干扰后细胞上清中的基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase enzyme,MMP)含量。应用实时定量PCR检测50例肝细胞癌组织中CCL28mRNA表达情况,运用卡方检验和Kaplan-Meier法分析CCL28表达与临床病例特征及患者总体生存时间的关系。结果肝癌HCCLM3细胞内CCL28mRNA在缺氧培养6h后表达增高,蛋白水平在缺氧培养12h后表达增高,呈时间依赖性。SiRNA抑制CCL28表达后,缺氧条件下HCCLM3细胞迁移数目(65.2±4.49)较siRNA阴性组(85±5.91)和空白组(87.4±8.44)有所减少(P<0.001);穿过Matrigel膜细胞数目(43.2±5.36)较siRNA阴性组(58±3.87)和对照组(54.6±9.53)有所减少(P=0.011)。明胶酶谱法发现CCL28表达抑制后HCCLM3分泌MMP-2减少。PCR结果提示,肝癌组织CCL28mRNA表达量为0.0254±0.0755,与正常肝组织相比,23例(46%)呈高表达,CCL28表达高低与肿瘤最大径(P=0.027)、术后复发相关(P=0.019);CCL28高表达与低表达组之间总体生存无明显差异(χ2=0.008,P=0.927)。结论缺氧条件下趋化因子CCL28高表达并参与肝癌细胞HCCLM3迁移侵袭过程。肝癌组织中CCL28表达增高与术后复发相关。

趋化因子CCL28基因的克隆表达及其多抗制备

将原核表达质粒pGEX-6P-1-CCL28转化至大肠埃希菌BL21中,经IPTG诱导,获得了GST-CCL28可溶性融合表达产物。利用纯化的GST-CCL28蛋白免疫BALB/c小鼠制备了抗GST-CCL28的多克隆抗体。同时将CCL28基因亚克隆进真核表达载体,经测序验证后命名为pcDNA3.1-CCL28。间接免疫荧光及Western blot试验结果进一步证明,所获得的抗GST-CCL28多克隆抗体能特异性的识别转染pcDNA3.1-CCL28质粒的DF-1细胞内高表达的CCL28蛋白。这一研究为制备抗CCL28单克隆抗体和探究与CCL28相关的生物学功能及其机制奠定了良好的基础。

CCL28-CCR10通路在类风湿关节炎单核细胞迁移中的作用

目的:观察类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者关节中单核/巨噬细胞趋化因子受体CCR10的表达,探讨趋化因子CCL28与其受体CCR10在RA单核细胞迁移中的作用及机制。方法:采用免疫组织化学法分析8例RA患者、4例骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者和4例正常对照者滑膜组织中CCR10的表达并进行细胞染色评分(0~5分),流式细胞术检测26例RA患者和20例健康对照者外周血、15例RA患者滑液CD14^(+)单核细胞中CCR10阳性细胞比例,Transwell迁移实验检测CCL28对RA和健康对照单核细胞的趋化性,Western blotting检测CCL28干预RA单核细胞的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路磷酸化。结果:CCR10表达在RA滑膜衬里层细胞及衬里下层的巨噬细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞;RA滑膜衬里层细胞和衬里下层巨噬细胞的CCR10表达明显高于OA和正常对照的滑膜(P均<0.01)。RA患者外周血CD14^(+)单核细胞表达CCR10明显高于健康对照者[(15.6±3.0)%vs.(7.7±3.8)%,P<0.01];RA患者滑液单核细胞CCR10的表达为(32.0±15.0)%,明显高于RA外周血(P<0.01)。体外实验中,10~100μg/L的CCL28能有效诱导RA和健康对照外周血CD14^(+)单核细胞迁移(P均<0.01);抗CCR10单抗能明显抑制CCL28对RA单核细胞的趋化(P<0.01)。CCL28干预RA单核细胞明显增加ERK和Akt的磷酸化(P均<0.05);ERK抑制剂(U0126)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂(LY294002)可明显降低CCL28诱导的RA单核细胞迁移(P均<0.01)。结论:RA患者外周血、滑液及滑膜单核/巨噬细胞CCR10表达增高,CCL28与CCR10结合并通过激活ERK、PI3K/Akt信号通路促使RA单核细胞迁移;CCL28-CCR10通路可能参与招募单核细胞进入RA关节,从而促进滑膜炎症和骨破坏。

舍格伦综合征患者唇腺中CCL28的表达和分布研究

目的:研究舍格伦综合征患者唇腺中粘膜相关上皮趋化因子CCL28的表达和分布情况。方法:收集35名患者的唇腺组织分别进行半定量RT-PCR及免疫组化。结果:患者的唇腺组织中表达CCL28 mRNA,但表达量较健康组织少。未被破坏的腺上皮细胞、导管上皮细胞及腺管内黏液可见棕色染色。结论:舍格伦综合征患者唇腺中仍有CCL28的表达及分泌,为我们日后探寻该类患者的龋病及口腔感染的预防奠定了基础。

人唇腺中CCL28表达和分布研究

目的:观察人的唇腺中CCL28的表达和分布,以期探讨CCL28在唇腺IgA分泌中的作用。方法:应用实时荧光定量PCR对13例唇腺标本中的CCL28mRNA的表达进行检测,以已知有CCL28表达的大肠组织作为对照;并将CCL28在唇腺与腮腺中的表达进行比较。用免疫组化法对13例唇腺标本中的CCL28蛋白质分布进行定位。结果:人的唇腺中表达高水平的CCL28mRNA,并且唇腺中表达量(1.28±0.57)高于腮腺(0.79±0.24)(P<0.01)。在免疫组化中,唇腺腺泡上皮细胞、腺管上皮细胞和腺泡内黏液CCL28染色呈阳性,但染色深度不同。结论:唇腺中表达CCL28mRNA。CCL28蛋白由唇腺腺泡上皮细胞产生,并最终分泌到黏液内。结合唇腺在口腔IgA分泌中的重要作用,认为唇腺分泌高浓度IgA可能与CCL28的高表达有关。

儿童龋病与唾液CCL28和sIgA抗体的相关性

目的:探讨儿童唾液中趋化性细胞因子CCL28含量和s Ig A抗体分泌与儿童患龋状况之间的联系。方法:抽取长沙市两所幼儿园3~5岁108名幼儿进行龋齿检查,根据检查结果分为无龋组[龋失补指数(dynamical mean-field theory,DMFT)=0];低龋组(DMFT=1~4);高龋组(DMFT≥5),收集非刺激性全唾液样本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测唾液中CCL28及s Ig A的含量,并对结果进行统计学分析。结果:108名儿童唾液中CCL28的浓度为(121.22±32.63)pg/m L,s Ig A的浓度为(16.49±8.02)μg/m L,两者之间存在线性正相关关系(r=0.734),且儿童唾液样本中CCL28和s Ig A含量随儿童患龋程度而增加(P<0.05)。结论:儿童龋患能够促进CCL28和s Ig A分泌,且CCL28和s Ig A的分泌量与龋患程度呈正相关;CCL28对唾液中s Ig A的分泌起促进作用。

牛源CCL28基因克隆、生物学特性及mRNA表达分析

为了探究牛趋化因子CCL28基因编码蛋白的生物学特性及其mRNA在奶牛不同器官中的表达水平,试验采用PCR方法扩增并克隆奶牛CCL28基因CDS全长序列;通过生物信息学软件对其编码蛋白进行分析并构建系统进化树;应用实时荧光定量PCR方法检测CCL28基因mRNA在奶牛不同器官中的表达情况。结果表明:CCL28基因编码蛋白是一种结构较不稳定、带正电的亲水性蛋白,由129个氨基酸组成;牛CCL28基因核苷酸序列与绵羊的同源性较高,达到94.3%,与绵羊的遗传距离较近;CCL28蛋白的二级结构主要由无规则卷曲和α-螺旋构成,主要存在于细胞外,可能与CCR10、CCR3、ACKR2等蛋白存在互作关系;平均信号肽分值为0.901,没有跨膜结构域;CCL28基因mRNA在奶牛多个器官中均有表达,其中乳腺中的表达量极显著高于其他器官(P<0.01),肝脏和肾脏次之。说明CCL28基因可能在乳腺组织免疫过程中发挥调控作用。