太行鸡CCNB2基因剪接异构体的克隆鉴定及其在卵泡发育中的表达模式分析

【目的】试验旨在克隆鸡细胞周期素B2(cyclin B2,CCNB2)基因不同剪接异构体,并对其进行生物信息学和组织表达分析。【方法】采用反转录PCR技术对太行鸡CCNB2基因不同剪接异构体进行扩增和克隆,采用生物信息学软件对CCNB2基因不同剪接异构体的部分核苷酸序列进行比对,比较不同物种CCNB2不同剪接异构体的氨基酸序列相似性并构建系统进化树,对其进行亚细胞定位及二级结构预测。利用实时荧光定量PCR技术分析CCNB2基因不同剪接异构体在太行鸡卵巢和不同发育时期卵泡中的相对表达量。【结果】太行鸡CCNB2基因存在3种剪接异构体,即CCNB2-AS1、CCNB2-AS2和CCNB2-AS3,分别编码390、383和401个氨基酸。太行鸡CCNB2-AS1、CCNB2-AS2和CCNB2-AS33个剪接体之间的氨基酸序列相似性均为97.00%,这3个剪接体均与原鸡的相似性最高,分别为99.71%、99.71%和100%。3个剪接异构体在进化上与原鸡亲缘关系最近,其次为雉鸡。亚细胞定位结果表明,3个剪接异构体均主要定位于细胞质;蛋白质二级结构分析显示,3种剪接异构体均以α-螺旋为主;CCNB2-AS1、CCNB2-AS2和CCNB2-AS3在太行鸡不同发育时期卵泡中的相对表达量存在差异,并且不同剪接异构体在同一时期卵泡中的表达趋势也存在差异,其中CCNB2-AS1在等级前卵泡中高表达;而CCNB2-AS2在大白卵泡中表达量显著高于其他时期(P<0.05),且在其他时期均以较低水平表达;CCNB2-AS3的表达则与CCNB2-AS1呈现相反的表达趋势,在等级卵泡中高表达。【结论】本研究成功鉴定到太行鸡CCNB2基因的3种剪接异构体,其在各时期卵泡中均有表达,但在等级前卵泡中的表达趋势存在差异。

山羊CCNB2和ALDH1L2基因多态性与产羔性能的关联分析

有报道显示,CCNB2与ALDH1L2基因与动物繁殖存在一定的联系,但关于他们在山羊繁殖中的作用还未清晰,为了改进山羊育种,提供有用的遗传标记,首先对3种山羊品种(济宁青山羊,辽宁绒山羊,云上黑山羊)768只母羊CCNB2基因和ALDH1L2基因的8个候选位点进行基因分型,之后再进行群体遗传和关联分析。结果表明,8个候选位点均存在多态性,CCNB2基因中除g.51957276C>T位点在济宁青山羊和辽宁绒山羊中为低度多态性(PIC<0.25)外,其余位点均处于中度多态性(0.25<PIC<0.5);ALDH1L2基因除g.67261430C>G位点在云上黑山羊和济宁青山羊群体中为中度多态性(0.25<PIC<0.5)外,其余位点均为低度多态性(PIC<0.25)。卡方检验结果表明,ALDH1L2基因大部分位点在3个群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),CCNB2基因g.51957276T>C位点在云上黑山羊和济宁青山羊群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),其余位点均处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P<0.05)。在云上黑山羊中ALDH1L2基因g.67260707A>T位点TT型个体的产羔数显著高于AA型个体,在窝重上则没有显著性。综上所述,ALDH1L2基因的g.67260707A>T位点的突变可作为云上黑山羊产羔数选择的潜在分子标记。