METTL3介导的CCNE1 m^(6)A修饰调控乳腺癌细胞对哌柏西利敏感性的研究

目的:探讨RNA甲基转移酶METTL3介导的m^(6)A修饰对乳腺癌细胞哌柏西利敏感性的影响及作用机制。方法:将乳腺癌细胞MCF-7随机分为:si-NC组,si-METTL3组,si-CCNE1组,si-METTL3+OE-NC组和si-METTL3+OE-CCNE1组;qPCR和Western blot检测METTL3和CCNE1的mRNA和蛋白表达水平;CCK-8检测哌柏西利敏感性;RIP实验检测METTL3和CCNE1 mRNA的相互作用;MeRIP-qPCR检测CCNE1的m^(6)A修饰水平;加入放线菌素D检测CCNE1 mRNA稳定性。结果:在MCF-7细胞中,METTL3和CCNE1的mRNA水平显著升高(P<0.05);抑制METTL3或抑制CCNE1的表达显著提高MCF-7细胞对哌柏西利的敏感性(P<0.05),且抑制METTL3显著降低CCNE1的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05);RIP实验证实METTL3和CCNE1 mRNA具有相互作用,且CCNE1发生了m^(6)A修饰;与si-NC组相比,si-METTL3组中CCNE1的m^(6)A修饰水平显著减少,CCNE1 mRNA稳定性显著降低;进一步实验表明,与si-METTL3+OE-NC组相比,si-METTL3+OE-CCNE1组中哌柏西利敏感性显著降低(P<0.05)。结论:在MCF-7细胞中,METTL3和CCNE1表达均上调;抑制METTL3能够提高MCF-7细胞对哌柏西利的敏感性,这与METTL3介导的m^(6)A修饰调控CCNE1 mRNA稳定性有关。

KDELR2调控CCNE2对胶质瘤U87细胞增殖的影响

观察赖氨酸-门冬氨酸-谷氨酸-亮氨酸受体2(Lys-Asp-Glu-Leu Receptor 2, KDELR2)调控CCNE2(cyclin E2)的表达以及对胶质瘤U87细胞增殖影响。方法 常规培养胶质瘤U87细胞,阴性对照病毒CON290(KDELR2-NC)、LV-KDELR2-RNAi(KDELR2-KD)、阴性对照病毒CON077(CCNE2-NC)、LV-CCNE2(CCNE2-OE),按照实验分组KDELR2-NC+CCNE2-NC(NC+NC)、KDELR2-KD+CCNE2-NC(KD+NC)、KDELR2-NC+CCNE2-OE(NC+OE)、KDELR2-KD+CCNE2-OE(KD+OE)分别加入慢病毒,通过qRT-PCR检测各组CCNE2的mRNA改变情况;Western blot检测CCNE2蛋白表达;CCK-8和克隆形成实验检测不同组别U87细胞增殖情况;流式细胞术检测U87细胞周期和凋亡变化。结果 干扰KDELR2后,CCNE2的mRNA以及蛋白表达明显降低;干扰KDELR2后能够减少U87细胞G1/S期跨越,增加细胞凋亡,从而抑制细胞增殖;过表达CCNE2能够部分逆转KDELR2下降对U87细胞周期、细胞凋亡、增殖的影响。结论 KDELR2高表达调控U87细胞中CCNE2 mRNA以及蛋白水平的表达,从而影响其细胞G1/S期进程、凋亡以及增殖。

miRNA-449家族靶向CCNE2对胃癌细胞生长的抑制调节作用

目的研究miRNA-449在胃癌细胞中对细胞增殖、凋亡的影响,以及对靶基因CCNE2(cyclin E2)表达的影响。方法荧光定量PCR检测人低分化胃癌细胞株BGC823瞬时转染miRNA-449a/b及抑制剂后的表达;流式细胞术分析转染后细胞凋亡变化。Western blot检测miRNA-449a/b对靶基因表达的影响。结果在转染后,miRNA-449a/b组在48、72h对肿瘤细胞的增殖有明显的抑制作用(P<0.05),miRNA-449a/b组对肿瘤细胞凋亡有明显的促进作用(P<0.05),对CCNE2蛋白表达有显著抑制作用(P<0.05)。结论 miRNA-449a/b可能通过CCNE2来发挥其抑制胃癌细胞生长的作用。

miR-200c-3p靶向CCNE2抑制肾母细胞瘤细胞增殖

目的预测和验证miR-200c-3p的靶基因并探讨其对肾母细胞瘤增殖的抑制作用。方法应用生物信息学软件对miR-200c-3p在肾母细胞瘤中的靶基因进行预测,建立SK-NEP-1及G401的miR-200c-3p过表达及抑制表达的稳定细胞系。实验设未转染组(Blank)、模拟物阴性对照组(mimic NC)、miR-200c-3p模拟物组(miR-200c-3p mimic)、抑制剂阴性对照组(inhibitor NC)及miR-200c-3p抑制剂组(miR-200c-3p inhibitor)。采用RT-PCR及Western blot方法检测CCNE2在SK-NEP-1及G401不同组中的表达水平,荧光素酶报告基因检测miR-200c-3p和CCNE2的靶向关系,细胞计数盒(CCK-8)和软琼脂克隆形成实验检测miR-200c-3p对SK-NEP-1及G401细胞增殖的抑制作用。结果生物信息学方法预测CCNE2为miR-200c-3p的靶基因之一。RT-PCR实验结果示肾母细胞瘤细胞中miR-200c-3p模拟物组的CCNE2的表达水平低于模拟物阴性对照组(P<0.05);荧光素酶报告基因检测证实CCNE2是miR-200c-3p的靶基因(P<0.01)。Western blot示在肾母细胞瘤细胞中miR-200c-3p模拟物组的CCNE2蛋白的表达水平低于模拟物阴性对照组(P<0.05);CCK-8和软琼脂克隆形成实验证实miR-200c-3p对肾母细胞瘤细胞的增殖能力有明显抑制作用(P<0.01);而miR-200c-3p抑制剂组结果相反。结论miR-200c-3p通过靶基因CCNE2抑制肾母细胞瘤细胞的增殖。

miRNA-138-5p通过靶向调控CCNE1抑制黑色素瘤细胞增殖

目的研究miRNA-138-5p在黑色素瘤细胞增殖中的作用及其发挥作用的机制。方法 MTT法检测miRNA-138-5p转染后黑色素瘤细胞的增殖;Realtime PCR检测miRNA-138-5p转染后其靶基因CCNE1 mRNA水平的变化;Western blot检测miRNA-138-5p转染后CCNE1蛋白水平的变化;Luciferase Repor ter试验检测miRNA-138-5p对CCNE13'非翻译区(3'UTR)及其突变的影响;MTT法检测共转染miRNA-138-5p和CCNE1对黑色素瘤细胞增殖的影响。结果过表达miRNA-138-5p可抑制黑色素瘤细胞的增殖。CCNE1是miRNA-138-5p的一个功能性靶基因,转染miRNA-138-5p可以降低细胞中CCNE1的mRNA和蛋白水平。共转染miRNA-138-5p和CCNE1可以部分消除miRNA-138-5p对黑色素瘤细胞增殖的影响。结论 miRNA-138-5p通过其靶基因CCNE1在黑色素瘤细胞的增殖中发挥了重要的作用,miRNA-138-5p在黑色素瘤细胞中可能作为一个关键的药物靶点。

CCNE1基因表达状态在卵巢癌中的预后价值

目的:探讨CCNE1基因表达状态对卵巢癌总生存结果的影响及预后价值。方法:利用The Kaplan Meier plotter数据库中的卵巢癌患者生存资料及CCNE1基因表达资料,分析不同CCNE1基因表达状态下卵巢癌的总生存差异,探索CCNE1基因表达的预后价值。结果:共检出1 656例卵巢癌患者用于最终的生存分析,根据CCNE1基因表达状态,分为低表达组(1 171例)和高表达组(485例),低表达组卵巢癌中位总生存时间为48.0个月,高表达组为37.4个月,差异有统计学意义(P=0.001),风险比HR=1.26,95%CI(1.10,1.44)。结论:CCNE1基因高表达降低卵巢癌总生存,是不良预后因子。

SENP1调控CCNE1参与结肠癌的增殖、侵袭和成瘤能力

目的 探讨SENP1/CCNE1在结肠癌发生发展中的作用。方法 选取2018年6月至2019年6月新疆医科大学第五附属医院收治的32例结肠癌患者,采用RT-qPCR和Western blot检测患者结肠癌组织和相应癌旁组织中SENP1和CCNE1的表达。首先使用Pearson相关系数法分析SENP1和CCNE1 mRNA的表达相关性,通过Kaplan-Meier法分析SENP1表达与结肠癌患者总生存期(OS)和无病生存期(DFS)的关系。进一步采用RT-qPCR和Western blot方法检测正常肠道细胞HIEC和结肠癌细胞SW480中SENP1的表达,将SW480细胞分为sh-NC组和sh-SENP1组,观察沉默SENP1对SW480细胞中CCNE1蛋白表达水平的影响,分别采用CCK-8法、流式细胞术和Transwell检测沉默SENP1对SW480细胞细胞增殖能力、细胞周期和细胞侵袭能力的影响。最后将裸鼠随机分为sh-NC组和sh-SENP1组,每组6只,观察结肠癌细胞体内成瘤能力。结果 与癌旁组织相比,结肠癌组织中SENP1和CCNE1 mRNA以及蛋白均呈高表达(P<0.05),且SENP1与CCNE1的表达呈正相关(r=0.401 7,P=0.022 7)。与正常肠道细胞HIEC相比,结肠癌细胞SW480中SENP1 mRNA和蛋白呈高表达(P<0.01)。SENP1高表达组患者OS和DFS均明显低于SENP1低表达组(χ^(2)=11.272,P=0.001;χ^(2)=5.575,P=0.018)。与sh-NC组相比,sh-SENP1组细胞中CCNE1的表达降低(t=19.282,P<0.01),并且细胞周期停滞(t=9.520,P<0.01),细胞增殖缓慢(t=13.499,P<0.05),细胞侵袭能力降低(t=15.839,P<0.05)。裸鼠成瘤实验结果显示,沉默SENP1后成瘤能力降低。结论 SENP1通过促进CCNE1的表达,促进结肠癌细胞增殖和细胞周期进展及体内成瘤能力,最终促进结肠癌的发生。

低氧通过HIF-2α诱导CCNE2表达的初步研究

低氧是肿瘤发生侵袭转移必经的过程之一,它促进了肿瘤致癌基因的表达,从而使肿瘤细胞发生远处转移.低氧环境对于调节肿瘤的EMT过程具有重要作用,刺激肿瘤的恶化和转移,也可促进血管激活因子的表达从而促进肿瘤血管的形成.CCNE2作为调节细胞周期的关键基因,在肿瘤发生和转移过程中的作用已经得到广泛研究,在多种癌细胞中都发现CCNE2蛋白是高表达的.为此在MCF-7细胞中通过一系列的实验证明了CCNE2是一个新的低氧靶基因,并证明了低氧通过刺激HIF-2α促进了CCNE2的表达.

miR-497-5p靶向调控CCNE1基因抑制胰腺癌细胞增殖

目的明确miR-497-5p在胰腺癌(PaCa)中的表达及临床意义,并探究其对PaCa细胞增殖的影响及机制。方法实时荧光定量PCR实验检测miR-497-5p的表达,卡方检验和Kaplan-Meier生存法分析miR-497-5p的表达与临床病理特征及预后的关系;CCK-8实验和流式细胞术检测过表达miR-497-5p对Capan-2和PANC-1细胞增殖和周期的影响,Spearman相关性检验分析miR-497-5p表达与G1/S特异性细胞周期蛋白E1(cyclin E1,CCNE1)mRNA表达的关系;双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证miR-497-5p对CCNE1表达的调控作用。结果miR-497-5p在癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P<0.001),T3+T4期患者癌组织中miR-497-5p的表达显著低于T1+T2期癌组织(P<0.001);低表达miR-497-5p与较高的T分期相关(P=0.003);低表达miR-497-5p的患者5年总体生存率显著低于高表达者(P=0.036)。与对照组相比,miR-497-5p过表达组细胞增殖显著降低,G0/G1期比例增加,S期比例减少。CCNE1 mRNA在癌组织的表达显著高于癌旁正常组织(P<0.001),且与miR-497-5p表达呈负相关(P<0.001)。miR-497-5p可直接与CCNE1 mRNA 3’-UTR互补结合从而抑制CCNE1蛋白的表达。结论miR-497-5p在PaCa中低表达,且与较高的T分期及不良预后相关;过表达miR-497-5p通过靶向调控CCNE1基因诱导细胞周期阻滞进而抑制PaCa细胞增殖。

lncRNA CYTOR靶向调控miR-503/CCNE1信号轴促进上皮性卵巢癌细胞增殖

目的:探讨细胞骨架调节剂(lncRNA cytoskeleton regulator,CYTOR)是否通过靶向调控miR-503来促进细胞周期蛋白E1(cyclin E1,CCNE1)影响上皮性卵巢癌增殖。方法:实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测CYTOR在不同临床分期、病理分级和有无淋巴结转移患者人上皮性卵巢癌组织、癌旁组织和正常组织以及不同卵巢癌细胞中的表达;starBase数据库(网址:http://starbase.sysu.edu.cn/)预测分析CYTOR和miR-503以及miR-503与CCNE1之间的关系,同时荧光素酶实验进行验证;RT-qPCR和免疫荧光分别检测miR-503与CCNE1在人上皮性卵巢癌组织、癌旁组织和正常组织以及不同卵巢癌细胞中的表达;RNA转染技术在A2780中细胞分别沉默CYTOR、过表达miR-503和沉默CCNE1表达,CCK-8检测各组细胞增殖能力变化;RT-qPCR和免疫荧光检测沉默CYTOR后miR-503和CCNE1的表达以及过表达miR-503后CCNE1的表达。结果:CYTOR和CCNE1在上皮性卵巢癌组织中表达增加,同时在临床分期III-IV期、病理分级G_(3)级、淋巴结转移阳性患者肿瘤组织中表达同样显著增加且导致卵巢癌患者术后预后较差;通过数据库分析CYTOR可直接靶向抑制miR-503,而miR-503可直接靶向抑制CCNE1表达,双荧光素酶实验结果与之相同;CYTOR和CCNE1促进上皮性卵巢癌增殖,而miR-503抑制上皮性卵巢癌增殖作用。结论:lncRNA CYTOR通过调控miR-503/CCNE1轴促进上皮性卵巢癌的增殖。

卵巢高级别浆液性癌驱动基因相关的临床病理研究进展

卵巢高级别浆液性癌(high grade serous ovarian carcinoma,HGSOC)具有多种遗传学变异:TP53突变在HGSOC中广泛存在,是HGSOC发生的基础;BRCA1/2突变影响同源重组修复;CCNE1扩增和RB1突变或失活导致细胞周期不受控;PTEN和NF1突变或失活引起细胞增殖相关信号通路等持续激活;MYC扩增促进基因转录;错配修复基因突变或失活致DNA修复错误累积。不同基因异常的HGSOC患者在预后和靶向药物选择上存在差异:BRCA1/2突变、RB1突变/失活和错配修复缺陷患者预后较好;CCNE1扩增、PTEN表达缺失、NF1突变/失活和MYC扩增患者预后相对较差。BRCA1/2突变者对PARP抑制剂反应较好;错配修复缺陷患者可受益于免疫检查点抑制剂;其余基因变异尚无明确有效临床靶向药物。该文对HGSOC中不同基因变异特点进行综述,帮助构建HGSOC遗传学变异框架,为靶向药物选择、改善患者预后提供理论依据。

miR-497靶向细胞周期蛋白E1抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖

目的研究miR-497在宫颈癌HeLa细胞中对细胞周期蛋白E1(CCNE1)的靶向作用及其对HeLa细胞增殖的影响。方法构建pre-miR-497、CCNE1野生型(WT-CCNE1)和突变型(MT-CCNE1)真核表达载体,采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)验证pre-miR-497载体的有效性,采用MTT法检测miR-497对HeLa细胞增殖的影响,采用双萤光素酶报告系统、qRT-PCR和Western blot法验证miR-497对CCNE1的靶向关系。结果测序结果提示pcDNATM6.2-GW-pre-miR-497、pmirGLO-CCNE1野生型和突变型表达载体构建成功,qRT-PCR证明转染pre-miR-497的HeLa细胞miR-497的表达显著升高。MTT法结果显示转染pre-miR-497的HeLa细胞增殖活性显著低于阴性对照miR组(P<0.05)。此外,双萤光素酶法检测共转染pre-miR-497和WT-CCNE1的HeLa细胞,其萤光素酶活性显著低于对照组(P<0.01),qRT-PCR及Western blot法也分别证实转染pre-miR-497的HeLa细胞其CCNE1的mRNA和蛋白水平显著下调(P<0.05)。结论 miR-497能够通过靶向CCNE1调控宫颈癌HeLa细胞的增殖活性。

美国护理教育专业认证制度及其对我国的启示

美国护理教育专业认证制度作为教育管理与质量保障的重要手段,曾引起世界的广泛关注。本文介绍了美国两大护理教育认证机构及认证制度的主要特点,探讨对我国开展护理教育专业认证制度的启示。

榄香烯对神经母细胞瘤增殖的抑制作用

目的观察榄香烯对神经母细胞瘤增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法培养SK-N-SH神经母细胞瘤细胞株。采用MTT法测定榄香烯对SK-N-SH细胞的抑制率,应用实时qPCR和Western blotting法测定榄香烯对SK-N-SH细胞中神经元限制性沉默因子(REST)的调控作用,并进一步用实时qPCR检测SK-N-SH细胞中细胞周期相关基因CCND1和CCNE1的表达。结果榄香烯对SK-N-SH细胞的增殖有明显的抑制作用(P=0.001 16),并呈时间和浓度依赖性;榄香烯下调REST mRNA(P=0.000 38)和蛋白表达(P=0.003 39),并且抑制细胞周期相关基因CCND1 mRNA表达(P=0.001 91)和CCNE1 mRNA表达(P=0.000 15)。结论榄香烯对神经母细胞瘤的增殖有抑制作用,并且抑制其REST和细胞周期相关基因CCND1和CCNE1的表达。

miR-103在牛骨骼肌卫星细胞中的分化调节作用

为了阐明miR-103对牛骨骼肌卫星细胞的分化调节作用,试验将miR-103的过表达载体和miR-103抑制剂分别转染到分离培养的卫星细胞中,利用EDU功能检测试验、Real-time PCR和免疫荧光试验来分析miR-103对卫星细胞增殖和分化的调控作用,并用Western-blot和实时定量PCR检测miR-103对靶基因CCNE1的蛋白和mRNA水平表达情况的影响。结果表明:在牛骨骼肌卫星细胞中,miR-103能促进卫星细胞的分化并抑制细胞的增殖。说明miR-103是牛骨骼肌卫星细胞分化的一种重要的调控因子。

二阶微分方程边值问题对称正解的存在性

研究了一类二阶微分方程边值问题对称正解的存在性,推广了Li和Han相应的结果.

MiR-32对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨miR-32靶向CCNE2调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测30例NSCLC患者癌组织及其匹配癌旁组织和支气管上皮细胞株16-HBE及NSCLC细胞株A549、H460和H1299中miR-32 mRNA表达水平;选择A549和H1299细胞为研究对象,将细胞随机分8组:NC组(转染miR-NC)、miR-32组(转染miR-32 mimics)、NC inhibitor组(转染miR-32-NC)、miR-32 inhibitor组(转染miR-32 inhibitor)、si-NC组(转染对照干扰RNA)、si-CCNE2组(转染CCNE2干扰RNA)、miR-32+vector(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1)、miR-32+CCNE2组(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1-CCNE2),转染按照Lipofectamine^(TM)2000试剂进行。qRT-PCR检测转染效果,qRT-PCR和Western印迹分别检测CCNE2 mRNA和蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验和Western印迹检测miR-32与CCNE2的靶向作用关系;采用CCK-8法和Transwell法检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;将转染空载的或miR-32过表达的慢病毒表达载体的H1299细胞在无菌条件下注射到8周龄的雌性BALB/c裸鼠皮下形成肿瘤异种移植,并定期测量肿瘤体积,30 d后处死小鼠,测量肿瘤重量,检测肿瘤细胞中CCNE2的表达。结果与NSCLC患者癌旁组织、支气管上皮细胞株16-HBE相比,NSCLC组织、A549和H1299中miR-32表达显著降低(P<0.05);过表达miR-32和沉默CCNE2可抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭(均P<0.05);荧光素酶报告基因实验表明CCNE2是miR-32的靶基因,miR-32过表达可负调控CCNE2表达,沉默miR-32可使细胞中CCNE2的表达上调;CCNE2可减弱miR-32对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用;异种移植瘤实验结果表明miR-32在体内可明显抑制异种移植瘤的生长,且肿瘤细胞中CCNE2的表达明显下调。结论miR-32可通过下调CCNE2抑制NSCLC细胞株A549和H1299的增殖、迁移和侵袭。

MiR-15b促进急性早幼粒细胞白血病细胞分化并抑制增殖

该文探讨了miR-15b在全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)过程中发挥的作用。采用实时荧光定量PCR检测miR-15b的表达;流式细胞术检测细胞的分化情况;CCK-8实验检测细胞增殖;双荧光素酶报告实验检测miR-15b与CCNE1 3′UTR端的结合能力;Western blot检测下游靶基因CCNE1的表达。结果显示,ATRA促进miR-15b的表达;过表达miR-15b增强了ATRA对APL细胞的分化作用,而抑制miR-15b表达后则出现相反结果;miR-15b抑制了APL细胞的增殖能力;双荧光素酶报告实验显示miR-15b与CCNE1的3′UTR端结合;Western blot显示mi R-15b可以抑制下游靶基因CCNE1的表达。这些结果表明, miR-15b通过抑制CCNE1的表达促进APL细胞分化,抑制细胞增殖。