姜黄素对HIV-1辅助受体CCR5启动子的干预作用

目的:探讨姜黄素对HIV-1辅助受体CCR5启动子活性的影响。方法:构建pFireRluc-CCR5重组载体,瞬时转染293T细胞;采用CCK-8法检测姜黄素对293T细胞活性的影响;利用双荧光素酶报告基因技术检测姜黄素对CCR5启动子活性的影响。结果:PCR方法分别扩增出CCR5启动子(987 bp)和Rluc(1 997 bp)表达单元,双荧光素酶报告基因表达载体pFireRluc-CCR5经酶切和测序鉴定,插入正确;根据CCK-8实验结果确定姜黄素给药浓度分别为10、20、40、60、80μmol/L;加药后,CCR5启动子活性显著下降(P<0.05),推测姜黄素能够显著降低CCR5启动子活性。结论:成功构建了pFireRluc-CCR5双荧光素酶报告基因表达载体,并证实其活性,姜黄素对CCR5启动子活性有显著抑制作用,具有潜在的抗HIV-1作用。

缺氧调控人趋化因子受体CCR5启动子区的表达分析

目的:分析人趋化因子受体5(CCR5)基因启动子区序列在缺氧条件下的表达。方法:构建CCR5基因启动子区萤光素酶报告基因载体,转染入MDA-MB-435细胞中,检测分析其双萤光素酶活性。结果:CCR5基因启动子区的pGL3重组质粒在缺氧条件下的MDA-MB-435细胞中能表现出明显的萤光素酶活性。结论:CCR5基因启动区序列中存在缺氧诱导CCR5基因转录的主要上调元件。

以人CCR5启动子为靶的药物筛选方法的初步建立

构建靶向人趋化因子受体5(CCchemokine receptors5,CCR5)启动子的药物筛选系统。将CCR5启动子序列克隆入改建后的报告载体pGL3-neo,转染pGL3-neo-CCR5入Jurkat细胞(急性T淋巴细胞性白血病细胞),G418筛选后分组;用7种中药分别作用于各组细胞16h后,检测细胞中CCR5启动子的表达水平。结果显示,双黄连组比对照组的荧光值明显降低(P<0.05);川琥宁组、黄芩组、黄芪组比对照组的荧光值明显升高(P<0.01)。双黄连可使体外培养细胞转染的CCR5启动子活性降低,川琥宁、黄芩、黄芪可使体外培养细胞转染的CCR5启动子活性增高。表明初步构建成功靶向人CCR5启动子的药物筛选系统。

穿心莲对人外周血CD4^+T淋巴细胞表面CXCR4和CCR5的影响以及对CXCR4/CCR5启动子作用机制的研究

目的:探讨穿心莲对人外周血CD4+T淋巴细胞表面趋化因子受体CXCR4和CCR5的影响以及对CXCR4,CCR5启动子的作用机制。方法:健康志愿者口服含穿心莲内酯的穿心莲胶囊后,采集人外周静脉血并分离CD4+T淋巴细胞,RT-PCR、流式细胞术、Western-bloting检测服药前后人外周血CD4+T淋巴细胞表面CXCR4,CCR5的表达;采用报告基因技术,中药穿心莲提取物给大鼠灌胃后采集含药血清,将含药血清作用于转染有CXCR4,CCR5启动子载体的H9细胞株,检测穿心莲对CXCR4,CCR5启动子的影响。结果:健康志愿者口服穿心莲后,外周血CD4+T淋巴细胞表面CXCR4,CCR5 mRNA和蛋白表达水平较服药前显著降低;并且穿心莲能够显著降低体外培养细胞CXCR4,CCR5启动子活性。结论:穿心莲能够降低人外周血CD4+T淋巴细胞表面CXCR4和CCR5的表达,具有潜在的抗HIV-1作用。