家蚕微孢子虫伴侣蛋白CCTθ的鉴定

家蚕微粒子病是一种严重危害蚕种生产的蚕病,被列为蚕桑生产唯一的检疫对象。分子伴侣协助底物蛋白折叠、装配和转运,但目前对家蚕微孢子虫分子伴侣CCT(chaperonin containing tailless complex polypeptide)的研究较少。本研究克隆了家蚕微孢子虫NbCCTθ基因,构建原核表达载体pET-28a-NbCCTθ表达重组蛋白,纯化后制备多克隆抗体。间接免疫荧光分析结果显示,NbCCTθ在家蚕微孢子虫的整个生命周期中均表达,但在不同发育阶段分布不同;在成熟孢子中主要分布于细胞质和质膜上,在裂殖增殖期主要分布于细胞质中,孢子形成期后期定位在细胞核中。研究结果为进一步探索NbCCTθ的具体功能奠定了基础,对家蚕微粒子病的防治也有一定的指导意义。

CCT2在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌细胞生物学功能的影响

目的:探究CCT2在卵巢癌中的表达及对卵巢癌细胞生物学功能的影响。方法:通过TCGA和GTEx数据库分析在卵巢癌组织及正常卵巢组织样本中CCT2的表达差异;通过ICGC数据库分析并评价CCT2表达水平与患者预后的关系。免疫组化实验验证CCT2在卵巢癌组织及癌旁正常组织的表达差异。使用Western Blot实验对比正常卵巢细胞和卵巢癌细胞系CCT2表达水平。通过转染siRNA和质粒的方式构建CCT2沉默和CCT2过表达模型,并使用qPCR和Western Blot验证。利用CCK8及平板克隆方法检测CCT2对卵巢癌细胞增殖能力的影响,同时应用Western Blot验证细胞增殖相关蛋白(Ki67、PCNA)以及EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vitmentin)表达水平。使用Transwell法明确CCT2对卵巢癌细胞转移和侵袭能力的影响。并进一步通过裸鼠体内成瘤实验观察CCT2对肿瘤生长的影响。结果:CCT2在卵巢癌组织中高表达且与患者预后负相关。沉默CCT2可显著抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,反之亦然。体内成瘤实验结果证实CCT2沉默可有效减慢肿瘤生长速度。结论:CCT2在卵巢癌组织中高表达,可作为患者预后不良的分子标志物,可通过促进细胞增殖转移促进卵巢癌的进展。

miR-21-3p通过下调CCT4抑制食管鳞癌细胞的迁移及侵袭

目的:探讨miR-21-3p对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:通过数据库检索miR-21-3p的下游靶基因,GEPIA2数据库预测CCT4在食管鳞癌中的表达和对食管鳞癌患者预后的影响,培养食管鳞癌细胞TE-1、KYSE150,将miR-21-3p inhibitor、SiCCT4、Plenti-CMV-CCT4-GFP/Puro转染至TE-1和KYSE150细胞中,分为miR-21-3p inhibitor组和inhibitor NC组、SiCCT4组和SiNC组、Plenti-CMV-CCT4组和inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组,采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-21-3p和CCT4 mRNA的表达水平,Transwell迁移侵袭实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力,Western blot检测转染后各组细胞CCT4蛋白的表达水平。结果:数据库预测结果显示CCT4在食管鳞癌中过表达,与食管鳞癌患者总体生存期相关,与miR-21-3p呈正相关。qRT-PCR显示miR-21-3p和CCT4在食管癌细胞相较于正常上皮细胞表达显著升高,且在抑制miR-21-3p后CCT4表达水平显著降低(P<0.05)。Transwell实验显示,inhibitor组迁移率及侵袭率显著低于inhibitor NC组(P<0.05);SiCCT4组迁移率及侵袭率显著低于SiNC组(P<0.05);inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组迁移率及侵袭率显著高于inhibitor组(P<0.05);Western blot检测CCT4蛋白发现,inhibitor组蛋白低于inhibitor NC组(P<0.05),inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组蛋白显著高于inhibitor组(P<0.05)。结论:miR-21-3p和CCT4在食管癌中呈现过表达,miR-21-3p通过下调CCT4表达抑制食管癌细胞迁移和侵袭能力。

07MnMoVR水电钢CCT曲线测定与应用

在Gleeble3800热模拟试验机上测定了07MnMoVR水电钢以不同冷却速度连续冷却时的膨胀曲线,结合金相-硬度法获得了该钢的静态CCT曲线,分析以不同冷却速度连续转变时的组织转变,阐明冷却速度与组织演变及硬度变化的关系。试验钢热处理工艺为920℃淬火,然后进行600℃回火时,力学性能满足生产技术要求。

CCT5在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨CCT5在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达及其与卵巢癌患者临床病理参数和预后的相关性。方法:利用免疫组织化学染色法检测CCT5在50例卵巢浆液性囊腺癌组织、22例卵巢交界性肿瘤组织、25例卵巢上皮性良性肿瘤组织以及9例正常卵巢组织中的表达情况,分析其与卵巢癌患者临床病理参数及预后的相关性。结果:CCT5以细胞浆着色为主。CCT5在卵巢浆液性囊腺癌中的阳性和强阳性表达率(88.0%&72.0%)明显高于良性组(64.0%&28.0%)和正常卵巢组织(66.7%&22.2%)。在卵巢浆液性囊腺癌中,CCT5表达与患者年龄、FIGO分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移均无显著相关性(P>0.05)。CCT5表达影响卵巢浆液性囊腺癌患者总生存时间,是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:CCT5在卵巢浆液性囊腺癌组织中高表达且与患者预后密切相关,有望成为肿瘤筛查和诊断的新型标志物和临床治疗的潜在靶点。

白菜型油菜CCT基因的全基因组鉴定及表达模式分析

CCT基因是指编码蛋白包含CCT(CONSTANS,CONSTANS-LIKE和TOC1)结构域的基因的统称,广泛存在于高等植物中,并且是与植物开花性状相关的重要基因家族之一,这些基因不仅参与了植物对光周期的响应过程,还在非生物胁迫应答以及植物激素信号转导等环节中发挥着重要作用。本研究利用生物信息学和比较基因组学的方法,最终在白菜型油菜(Brassica chinensis var.oleifera Makino et Nemoto)中鉴定到69个CCT家族基因,并对其理化性质、系统进化关系、保守结构域、基因结构、共线性关系、顺式作用元件、KEGG富集和不同组织/器官中的表达模式等进行了分析。结果表明,69个BrCCTs基因不均匀地分布在10条染色体上,根据保守结构域的不同,可以分为4个亚族,同一亚族成员的保守基序高度相似,然而基因结构差异较大,并且多数成员均含有光响应元件和激素响应元件,表明其可能在调节植物开花以及生长发育过程中发挥重要作用。KEGG富集分析发现CCT家族基因主要富集在细胞功能和核酸结合位点通路上。转录组结果表明,69个BrCCTs在根、茎、叶、花和愈伤组织中有着不同的表达模式,尤其COL亚族的成员表达水平较为显著。本研究为进一步了解白菜型油菜CCT基因家族的功能和作用提供了参考,为油菜早熟品种的选育和改良奠定了基础。

低碳含铌建筑结构用钢动态CCT曲线及冷却工艺研究

采用Gleeble-3500热模拟实验机,对低碳含铌建筑结构用钢进行了动态过冷奥氏体连续冷却转变(CCT)实验研究,结合不同冷却速度下实验钢的膨胀曲线、显微组织和显微维氏硬度,绘制了实验钢动态CCT曲线。结果表明,随着冷却速度的提高,连续冷却相变温度区间向低温方向移动,促进铁素体晶粒形核,有效细化铁素体晶粒尺寸。此外,结合动态CCT曲线,设置了不同冷却工艺参数,确定冷却速度和空冷开始温度对实验钢相变和组织的影响。结果表明,为空冷开始温度设定为550、600℃时,室温组织主要为铁素体和粒状贝氏体。同一空冷温度下,随着冷速的增加,铁素体含量减少,贝氏体含量增加;而在相同冷速下,降低空冷温度会导致铁素体含量增加。当空冷开始温度设定为650℃时,无论冷速是5℃/s还是10℃/s,室温组织主要为铁素体和珠光体,且随着冷速的提升,铁素体含量因相变时间的缩短而降低。

高强韧钻杆用低碳高铌钢的动态CCT曲线测定与分析

利用MMS-200热力模拟实验机对高强韧钻杆用低碳高铌钢进行模拟轧制压缩试验,测定绘制低碳高铌钢动态连续冷却转变(CCT)曲线,并研究了冷却速率对显微组织的影响。结果表明,冷速为0.5℃/s时,组织主要由多边形铁素体(PF)和少量珠光体(P)组成,同时观察到极少量的针状铁素体(AF);冷速为1℃/s时,组织以针状铁素体(AF)为主,珠光体消失,但仍可见一定比例的多边形铁素体(PF);冷速升高到2℃/s时,转变组织完全为粒状贝氏体(GB);冷速升高到5℃/s时,转变组织以粒状贝氏体(GB)为主,同时出现少量的铁素体贝氏体(FB);冷速升高到30℃/s时,转变组织以铁素体贝氏体(FB)为主,同时出现少量的马氏体(M)。

高碳硬线65钢静态CCT曲线测定及组织分析

为探究高碳硬线弹簧钢轧后盘条组织和性能的变化规律,指导盘条轧后多级控温冷却工艺的制定,以65钢为研究对象开展静态CCT曲线测定及组织分析。试验结果显示,冷却速度对65钢奥氏体-珠光体相变后珠光体片层影响明显,盘条轧后风冷线采取前段5~10℃/s冷却速度、中后端1~5℃/s冷却速度、出风机温度570℃以上的分级冷却工艺,可以获得片层间距80~150 nm的索氏体+少量铁素体组织,实现了硬线钢的组织优化与性能协同提升。

CCT各亚基在甲状腺癌中的表达及其对患者临床预后、肿瘤微环境和化疗药物敏感性的影响

目的:探究含t-复合物1的伴侣蛋白(CCT)的8个亚基在甲状腺癌(TC)组织中的表达及其与TC分期、患者预后、免疫细胞浸润、免疫检查点表达和化疗药物敏感性的相关性。方法:采用TCGA数据库数据分析CCT各亚基在TC组织和癌旁组织中的表达;用TCGA数据库数据分析CCT各亚基表达与TC患者预后的关系;用GSEA法分析CCT各亚基的生物学功能;用TCGA和TIMER2.0数据库数据分析CCT各亚基表达与肿瘤微环境、免疫细胞浸润、化疗药物敏感性、免疫检查点表达的相关性。结果:数据库数据分析显示,在TC组织中CCT3、CCT7和CCT8 mRNA均呈高表达(P<0.01或P<0.001),而CCT1、CCT2、CCT5和CCT6B mRNA均呈低表达(P<0.01或P<0.001);CCT3、CCT6B、CCT8 mRNA的表达与T分期有关联(P<0.05或P<0.01)、CCT6B mRNA的表达与淋巴结转移有关联(P<0.01),CCT5 mRNA的表达与远处转移有关联(P<0.05),CCT6B可能是TC患者OS的独立预后生物标志物;CCT各亚基mRNA表达主要富集于移植物排斥、补体和干扰素-γ等信号通路;CCT各亚基mRNA低表达组TC组织的基质、免疫和综合评分均显著高于高表达组(P<0.05或P<0.01或P<0.001);CCT各亚基mRNA表达与TC的基质评分、免疫评分和综合评分均呈负相关(均P<0.01);CCT各亚基mRNA的表达与CD8+T细胞和巨噬细胞浸润均呈正相关(均P<0.05),多数CCT亚基(CCT6B和CCT7除外)的mRNA表达与中性粒细胞的浸润呈正相关(P<0.05或P<0.01或P<0.001),而CCT3、4、7、8mRNA的表达与CD4+T细胞浸润呈负相关(均P<0.05);与低表达组比较,大多数CCT亚基mRNA高表达的TC患者对索拉非尼、乐伐替尼、达拉非尼、曲美替尼、凡德他尼和卡博替尼等化疗药物的IC50均明显升高(P<0.05或P<0.01或P<0.001);TC组织中CCT各亚基mRNA的表达与PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、CD80和CD86表达均有明显关联(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结论:CCT复合物可能通过影响肿瘤微环境促进TC的发生发展,进而影响患者预后,其可成为难治性TC诊断和免疫治疗的潜在靶点。

胎圈钢丝用钢盘条C82DA的CCT曲线测定及应用

为了研究分析高性能胎圈钢丝用钢盘条C82DA在不同冷却速度下组织转变,达到产品工艺精细化控制的目的,利用Gleeble-3500热模拟试验机和光学显微镜对不同冷却速率的试样进行显微组织分析,绘制连续冷却转变曲线。分析结果显示:开始产生马氏体组织的临界冷速为20℃/s,冷却速度在0.5~10℃/s时组织为珠光体和索氏体,但组织中有明显网状渗碳体;冷却速度在12~20℃/s时组织为珠光体和索氏体;通过对比发现,冷却速率为10~15℃/s时,胎圈钢丝用钢盘条C82DA的综合性能达到最佳。

Cr3钢不同奥氏体化温度下CCT曲线的研究

利用膨胀法、金相法、硬度法对Cr3支承辊试验钢过冷奥氏体连续冷却转变曲线进行测定,以此对不同奥氏体化温度下CCT曲线进行对比研究。研究结果显示,在一定冷速范围内,随着冷速增加,Cr3支承辊试验钢显微组织经历了珠光体→贝氏体→马氏体的转变,并且在890℃奥氏体化下比860℃奥氏体化下的CCT曲线右移,为支承辊材料用钢的热处理工艺与应用提供了理论依据。

3Cr2Mo钢CCT曲线的测定与分析

在Gleeble-1500热模拟机上测定3Cr2Mo钢以不同冷却速度连续冷却时的膨胀曲线,结合金相-硬度法、示差热分析法（DSC）获得该钢的连续冷却转变曲线（CCT曲线）。根据测得的CCT曲线,分析以不同冷却速度连续冷却时的组织转变;阐明冷却速度与组织的演变以及硬度变化的关系。比较分析所测CCT曲线与同类转变曲线的异同。研究结果表明：马氏体转变的临界冷却速度为1.0~1.5℃/S;为生产实践和新工艺的制定提供了参考依据。

薄板坯连铸连轧生产65Mn钢的CCT曲线和淬透性

利用Formaster热膨胀仪和金相法,测定了薄板坯连铸连轧工艺(CSP)生产的高碳高强度65Mn钢的CCT曲线,测得临界点为AC1=719℃,AC3=747℃,Ms=267℃,临界冷却速率为35℃/s。使用扫描电镜和硬度仪分析表明,薄板坯连铸连轧工艺生产的65Mn钢的淬火组织细小均匀,硬度高,比传统工艺生产的65Mn钢的淬透性好。

65Mn钢奥氏体连续冷却转变曲线(CCT图)

利用膨胀法结合金相———硬度法,在Gleeble-1500热模拟机上测定了65Mn钢的临界点Ar1、Ar3、Ac1和Ac3以及Ms;测定了该钢在不同冷却速度下连续冷却时的膨胀曲线,获得了该钢的连续冷却转变曲线(CCT曲线);研究了65Mn钢连续冷却过程中奥氏体转变过程及转变产物的组织和性能,大致确定了避免网状铁素体、贝氏体以及魏氏组织铁素体的冷却速度,找出了生产65Mn钢盘条的控冷速度范围,为生产实践和新工艺的制定提供了参考依据.

含Mo低碳微合金钢CCT曲线的测定与分析

在Gleeble-3800热模拟试验机上,测定了含Mo低碳微合金钢在不同冷却速度下连续冷却时的膨胀曲线,利用热膨胀法并结合金相-硬度法,测定了该钢的连续冷却转变曲线(CCT曲线);研究了冷却速度对该钢组织及硬度的影响。结果表明,在所研究的冷却速度范围内,相变产物均含有贝氏体组织;当冷却速度小于10℃/s时,相变产物含有一定量的铁素体;当冷却速度减小到1℃/s以下时,相变产物除铁素体外也含有少量的珠光体;当冷却速度大于30℃/s时,相变产物中出现马氏体组织;当冷却速度为10～30℃/s时,获得贝氏体组织。动态CCT曲线的测定为该钢种生产中控制轧制工艺和控制冷却工艺的制定提供依据。

WQ960E工程结构用钢CCT曲线的测定与分析

利用DIL805A型淬火变形膨胀仪,测定了WQ960E工程机械用钢以不同冷却速度连续冷却时的膨胀曲线,并结合金相-硬度法,获得该钢的过冷奥氏体连续冷却转变曲线(CCT曲线)。根据CCT曲线,结合光学显微镜与扫描电镜分析结果,研究了冷却速率对相变组织演变规律的影响。结果表明:当冷速为0.06℃/s时,相变组织为铁素体(F)+粒状贝氏体(GB);冷速为0.2℃/s时,组织为粒状贝氏体(GB);冷速为0.5℃/s时,开始出现板条贝氏体(LB);冷速为5℃/s时,出现马氏体(M)。

一种高强度钢的CCT曲线的测定与分析

通过Gleeble-3500热模拟机测定热轧态钢以不同速度连续冷却到室温的膨胀曲线,结合微观组织观察和硬度测试,绘制出一种高强度钢的CCT曲线,并分析不同冷却速度对组织演变及硬度的影响。研究结果表明:当冷却速度小于0.2℃/s时,主要发生铁素体转变和贝氏体转变,转变产物为多边形铁素体+上贝氏体+粒状贝氏体的混合组织;当冷却速度处于0.5~1.0℃/s范围时,主要发生贝氏体转变,对应0.5℃/s冷却速度的转变产物以上贝氏体为主,对应1.0℃/s冷却速度的转变产物以下贝氏体为主;当冷却速度介于1.0~5.0℃/s之间时,发生贝氏体+马氏体转变,转变产物为下贝氏体+板条马氏体的混合组织;当冷却速度大于等于5.0℃/s时,主要发生马氏体转变,微观组织以板条马氏体为主。当冷却速度小于5.0℃/s时,硬度随冷却速度增大显著增加;当冷却速度大于25.0℃/s时,硬度变化不大。

65Mn钢CCT曲线及圆锯片淬火工艺

用全自动相变测定仪测定了圆锯片常用65Mn钢的连续冷却转变曲线，研究了不同连续冷却速度下得到的组织，为合理制订圆锯片的淬火工艺提供了依据，得出了最佳淬火工艺曲线。

不同光温条件谷子光温互作模式研究及SiCCT基因表达分析

光周期和温度是影响作物生长发育、生态适应性和产量的2个重要环境因素,揭示光温互作对作物生长发育的效应及其分子机制对育种实践和理论研究具有重要意义。本研究设置长日照高温、长日照低温、短日照高温、短日照低温4个光温处理,调查‘黄毛谷’抽穗期、株高、叶片数和穗长。结果表明,光周期对谷子的发育起关键作用,温度的改变不影响长日照比短日照延迟谷子生殖生长的效应,温度的作用随光周期的不同而异,短日照条件下,高温缩短谷子营养生长期而低温延长营养生长期,长日照条件下则相反;对谷子生殖生长的促进作用是短日照高温>短日照低温>长日照低温>长日照高温。利用RT-PCR技术从‘黄毛谷’叶片克隆了一个CCT结构域基因(SiCCT),该基因编码286个氨基酸,属于CMF亚家族成员,基于CCT域基因氨基酸序列的系统进化分析,谷子与高粱、玉米亲缘关系较近。实时荧光定量PCR分析发现,SiCCT基因在‘黄毛谷’叶片中高表达,其次为幼穗和叶鞘;长日照、短日照处理SiCCT基因均表现24 h昼夜节律性特点,短日照七叶期表达水平最高,八叶期(抽穗)及穗后表达迅速降低,长日照七叶至十叶期‘黄毛谷’处于营养生长期,SiCCT基因维持较高表达水平;无论高温低温,长日照条件下SiCCT基因在各叶期表达量整体高于短日照处理,长日照条件下低温处理SiCCT基因的相对表达量明显低于高温处理,SiCCT基因的总体表达量与‘黄毛谷’营养生长期存在正相关。总之SiCCT基因受光周期调控,同时也受温度调控,因而推测SiCCT基因参与了光周期途径和感温性途径,并通过二者互作调控谷子营养生长和生殖生长的全过程。