盾壳霉CCTCC M203020的生长特性及其应用潜力

以油菜菌核病病株菌核为诱饵 ,从油菜地中分离筛选得到一株盾壳霉 (ConiothyriumminitansCCTCCM2 0 30 2 0 ) .以生物防治能力好的CBS 14 8.96为对照菌株 ,比较了两者在油菜叶上对油菜菌核病菌抑制作用和在土壤中对菌核的致腐能力及条件 .结果表明 :C .minitansCCTCCM2 0 30 2 0对油菜菌核病菌的抑制作用及适用的pH范围(4.0～ 7.0 )均优于CBS 14 8.96 ,适用于油菜菌核病的生物防治 .具体表现在 :(1)C .minitansCCTCCM2 0 30 2 0能够完全限制病原菌在叶面的进一步扩展 (已萌发孢子率为 80 %时 ) ,而CBS 14 8.96则不能 ;(2 )C .minitansCCTCCM2 0 30 2 0与CBS 14 8.96的生长特性及培养条件相近 ,但其菌体生长和孢子产量分别高出 6 0 %和 12 %.并发现该菌株在PDA上产生孢子的最短周期是 3.5～ 4d,较优培养条件为 :2 0℃、初始pH 5 .0～ 6 .2、空气湿度 90 %～ 97%;致腐菌核的较优条件为 :10 1～ 10 4孢子 /菌核 ,土壤湿度 80 %～ 10 0 %,pH 4 .0～ 7.0 .图 7参

放线菌CCTCC M207210所产青霉抑制物的稳定性及应用

【目的】明确放线菌CCTCCM207210发酵液的青霉抑制活性在不同处理条件下的稳定性,评价其在苹果贮藏与果汁加工中的应用潜力。【方法】将无菌体发酵液经热、酸、碱、紫外线等处理不同时间后,用滤纸片法在琼脂平板培养基上检验发酵液对产展青霉素扩展青霉SP2204、SP2205生长的抑制活性;在接种扩展青霉的苹果和苹果汁上喷涂或加入无菌体发酵液,分别培养12和7d后,测定苹果的病斑直径和果汁中展青霉素产量。【结果】加热、酸碱处理和紫外线照射都会破坏发酵液对扩展青霉生长的抑制活性:经100℃保温处理60min,或紫外线照射(30W,245nm,15cm)90min,发酵液的抑菌活性完全丧失;发酵液的抑菌活性在发酵液原始pH(5.7)下最稳定,偏碱性条件的稳定性稍高于偏酸性条件。接种扩展青霉120h后,在苹果表面喷涂无菌体发酵液可使苹果病斑直径的扩展速度降低25%;在果汁中加入40%(v/v)的无菌体发酵液,可使展青霉素产量降低90%。【结论】放线菌CCTCCM207210发酵液对扩展青霉的抑菌活性具有一定的热、酸碱和紫外线耐受能力,在苹果贮藏和果汁加工中抑制扩展青霉素的生长与产毒方面有一定应用潜力。

外源有机酸对于Propionibacterium freudenreichii CCTCC M207015发酵生产丙酸的影响

考察了外源有机酸(丙酸、乙酸、琥珀酸)对于游离细胞与纤维床反应器生产丙酸的影响。结果表明,以Propionibacterium freudenreichii CCTCC M207015为生产菌株时,纤维床反应器具有比游离细胞更强的丙酸、乙酸耐受性,其中丙酸的抑制现象比乙酸的更加严重。此外,外源琥珀酸可以作为丙酸合成的前体物质对P.freudenreichii CCTCC M207015发酵生产丙酸产生促进作用。

有机溶剂/缓冲液双相体系中固定化Acetobacter sp.CCTCC M209061细胞催化1-(4-甲氧基)-苯基乙醇不对称氧化反应

在有机溶剂/缓冲液双相体系中,利用固定化醋酸杆菌Acetobacter sp.CCTCC M209061细胞高对映体选择性地催化1-(4-甲氧基)-苯基乙醇(MOPE)的不对称氧化反应,成功地拆分外消旋MOPE得到对映体纯(S)-MOPE.与游离细胞相比,固定化细胞催化反应速度有所降低,但其稳定性(包括操作稳定性、热稳定性和储藏稳定性)明显提高.固定化细胞连续使用10批次(每批次12 h)后,仍能保留其初始催化活性的58%以上,而游离细胞仅保留约20%的相对活性.在所考察的不同有机溶剂中,正己烷不仅能较好地溶解底物,而且对细胞的生物相容性相对较好,因而提高了反应底物浓度、反应初速度、对映体回收率及残留底物e.e.值,是反应体系中最适宜的有机相.该反应的最适宜正己烷体积分数为60%,辅底物为50 mmol/L丙酮,底物浓度为40 mmol/L,缓冲液pH=6.5,反应温度为30℃;在此条件下,反应初速度为80.4μmol/min,反应12 h后,对映体回收率和残留底物e.e.值分别为51.0%和99.9%,明显好于水单相反应体系.

含水有机溶剂体系中固定化Acetobacter sp.CCTCC M209061细胞催化乙酰乙酸乙酯不对称还原反应

本论文报道了含微水有机溶剂体系中固定化Acetobacter sp.CCTCC M209061细胞催化乙酰乙酸乙酯不对称还原为(R)-3-羟基丁酸乙酯。研究表明,Acetobacter sp.CCTCC M209061细胞能遵循反Prelog规则高选择性地催化乙酰乙酸乙酯不对称还原。与单水相反应体系相比,含有机溶剂体系不仅可有效地解决底物和产物的抑制作用,而且可提高反应底物的浓度和产率。在所研究的不同有机溶剂中,正己烷为该反应的最适有机相,其能较好溶解底物且对Acetobacter sp.CCTCC M209061细胞的毒性较小,从而导致反应的初速度较快,产率较高。异丙醇为该反应的最佳辅底物,其最适浓度为60 mmol/L;该反应体系中的最适正己烷体积百分比、反应温度、底物浓度分别为约100.00%(水含量约为0.01 wt%),35℃,40 mmol/L。在此条件下,反应的初速率、产率和产物的e.e.值分别为0.72μmol/min,85.24%和99.00%以上,明显好于水单相反应体系进行该反应的结果。

水相体系中固定化Acetobacter sp.CCTCC M209061细胞催化(S)-3-氯苯丙醇不对称合成

光学纯的3-氯苯丙醇是合成抗抑郁类药物的重要中间体。本论文报道了水相体系中固定化Acetobacter sp.CCTCC M209061细胞高效、高选择性地催化3-氯苯丙酮不对称还原为(S)-3-氯苯丙醇,采用聚乙烯醇与海藻酸钠的混合载体对醋酸杆菌细胞进行固定化,所得的固定化细胞的稳定性(热稳定性、p H稳定性及操作稳定性)均明显优于游离细胞。同时,固定化后的微生物细胞具有较好的重复利用性,连续反应3个批次后固定化细胞仍保留了80.0%以上的活性,而游离细胞的相对活性则小于20%。在所研究的体系中,葡萄糖为该反应的最佳辅底物,其最适浓度为50.0 mmol/L;该反应体系中的最适缓冲液p H值、反应温度、底物浓度分别为5.5、30℃和3.0 mmol/L。在此条件下,反应的初速度、产率以及产物的e.e.值依次为1.77 m M/h,88.9%和99.0%以上。

酿酒酵母CCTCC M 2016373发酵对人参多糖组分及抗氧化能力的影响

文章主要探讨酿酒酵母CCTCC M 2016373发酵对人参多糖组成成分及抗氧化能力的影响。以新鲜人参为原料,经酿酒酵母CCTCC M 2016373发酵后,采用水提醇沉法及Sevage法脱蛋白获得发酵后的人参粗多糖,包括未发酵多糖、发酵多糖和菌多糖3种组分。同时,采用化学方法测定粗多糖各组分的中性糖、糖醛酸、蛋白质含量。对粗多糖的总抗氧化能力、羟自由基清除能力和超氧阴离子自由基清除能力进行了比较。结果表明:未发酵人参多糖得率为9.4%,发酵人参多糖得率为15.2%。发酵粗多糖的中性糖及糖醛酸的含量显著高于未发酵人参和酵母菌粗多糖。体外抗氧化试验结果表明,酵母发酵对人参粗多糖总抗氧化能力没有明显影响,但是羟自由基清除能力和超氧阴离子自由基清除能力均显著高于未发酵人参多糖及酵母菌多糖。

利用纤维床反应器固定化发酵生产丙酸

构建了一种纤维床反应器(FBB),并将其应用于丙酸的生产。将棉纤维绕成桶状,固定于反应器中,即可用于丙酸固定化发酵。以40g/L的葡萄糖为碳源,与游离细胞相比,利用FBB生产丙酸,丙酸产量由14.58g/L提高至20.41g/L,发酵时间由120h缩短至60h。研究了不同糖浓度条件下FBB生产丙酸情况,并将补料策略应用于丙酸发酵中。结果表明:补料发酵能够有效改善Propionibacterium freudenreichii CCTCC M207015在高糖条件下丙酸对葡萄糖转化率较低、副产物较多的问题。经补料发酵280h,丙酸产量达45.91g/L,丙酸质量约占有机酸总质量比例为72.31%。

在内置式植物纤维床反应器中用糖蜜固定化发酵制丙酸

开发了一种综合利用制糖工业副产物生产丙酸的新方法,将制糖工业副产物甘蔗渣和糖蜜分别作为固定化载体和碳源,应用于丙酸生产。以甘蔗渣为固定化载体构建了一种内置式植物纤维床反应器(Inner plant fibrous-bed bioreactor,IPFB)。以Propionibacterium freudenreichii CCTCCM207015为发酵菌株,对在IPFB中分别用未处理糖蜜及糖蜜水解液为碳原发酵制丙酸进行考察。以未处理糖蜜为碳源发酵,254h丙酸浓度为52.39g·L-1,丙酸生产速率为0.21g·(L·h)-1;糖蜜水解液为碳源发酵,254h后丙酸浓度达75.18g·L-1,丙酸生产速率达0.30g·(L·h)-1,丙酸占总有机酸比例达83.10%(w/w)。稳定性实验表明以糖蜜水解液为碳源,利用IPFB发酵生产丙酸10批仍然保持较高的丙酸生产效率。扫描电镜显示大量丙酸杆菌的细胞吸附于甘蔗渣表面与间隙中,有效实现了高密度发酵。

醋酸杆菌醇脱氢酶粗酶液的特性研究

乙醇脱氢酶(ADH)是醋酸杆菌发酵生产醋酸的关键酶。以硫酸铵为沉淀剂,采用盐析法对醋酸杆菌中乙醇脱氢酶进行初步的分离纯化,并研究其酶学特性。结果表明:ADH比活力从粗酶液的0.201U/mg提高到0.460U/mg,纯化倍数为2.289;其最适作用pH值为7.5～8.0,pH值为7.8时酶活力达到最大,pH值为7.0时酶较为稳定;最适作用温度为35℃,温度为30℃～40℃时酶活力较为稳定,温度超过45℃后酶活力急剧下降。通过对乙醇底物浓度对ADH活力影响的研究,ADH对乙醇的米氏常数Km为2.59×10-2mol/L。

响应面设计优化醋酸杆菌产乙醇脱氢酶发酵培养基

利用响应面分析法优化醋酸杆菌产乙醇脱氢酶培养基。在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken中心组合试验设计,选定碳源、氮源和生长因子3个因素为响应因子,以乙醇脱氢酶的酶活为响应值建立二次回归方程,相关系数R2=0.9652,在分析各个因素的显著性和交互作用后,确定了醋酸杆菌产乙醇脱氢酶最优的培养基,即碳源15.1 g/L、氮源7.0 g/L、生长因子272.5 mL/L,在此条件下,乙醇脱氢酶活力理论响应值为0.352 U/mL,验证值为0.349 U/mL。

近平滑假丝酵母细胞催化乙酰基三甲基硅烷不对称还原反应

采用近平滑假丝酵母细胞用于催化乙酰基三甲基硅烷不对称还原反应,可高选择性地生成(R)-1-三甲基硅乙醇.结果表明,固定化于海藻酸钙的细胞催化该反应的产物收率比游离细胞的高.不同辅底物对该反应的影响显著,以葡萄糖为辅底物时,反应的初速率较快,产物收率较高.该反应的最适条件为:辅底物(葡萄糖)浓度110mmol/L,振荡速度180r/min,缓冲液pH值6.0,反应温度30oC,底物浓度20mmol/L.在此反应条件下反应的初速率、产物收率和产物的ee值分别为11.4μmol/h,96.5%和99.9%.