Q型烟粉虱在健康和CCYV侵染的黄瓜植株上取食选择行为

介体昆虫能特异性传播植物病毒。烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)寄主植物范围广,繁殖能力和适应能力强,世代重叠严重,且能够传播5个病毒属约200多种病毒。瓜类褪绿黄化病毒(Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)在瓜类作物上发生严重,由烟粉虱B.tbaci B和Q型以半持久性方式特异性传播,但对其传毒机理的研究尚处于起步阶段。本研究拟以Q型烟粉虱、健康黄瓜,以及获CCYV后10d、20d、30d的黄瓜为实验材料,利用行为生态学和化学生态学方法,进行病毒一介体一寄主植物互作研究。实验设计三组进行比较:即Q型烟粉虱在健康黄瓜间的选择行为;Q型烟粉虱在健康黄瓜和分别获CCYV后10d、20d、30d的黄瓜植株间的选择行为;以及Q型烟粉虱在都获CCYV黄瓜植株间的选择行为,每组实验设置3个重复。研究结果发现:Q型烟粉虱在健康黄瓜和健康黄瓜上的降落头数分别占总数的51.15%,58.85%,差异不显著(P>0.05);Q型烟粉虱在健康黄瓜和获CCYV后10d的黄瓜上的降落头数分别占总数的65.77%,34.23%,差异性极其显著(P≤0.01);Q型烟粉虱在健康黄瓜和获CCYV后20d的黄瓜上的降落头数分别占总数的43.89%,56.11%,差异性极其显著(P≤0.01);Q型烟粉虱在健康黄瓜和获CCYV后30d的黄瓜上的降落头数分别占总数的37.23%,62.77%,差异性极其显著(P≤0.01);Q型烟粉虱在携带CCYV黄瓜和携带CCYV黄瓜上的降落头数分别占总数的49.29%,50.71%,差异不显著(P>0.05)。研究表明:黄瓜植株携带CCYV情况,对后来取食的Q型烟粉虱的寄主植物选择有一定的影响,在获毒10d后,即寄主毒量相对较低时,Q型烟粉虱趋向于健康黄瓜取食;在获毒20d和30d后,即寄主带毒量相对较高时,则更趋向于带毒黄瓜取食。本研究初步探讨了CCYV对于Q型烟粉虱选择寄主植物行为趋向性的影响,为Q型烟粉虱-寄主植物-病毒互作相互关系的研究提供了新的实验证据,为利用植物抗性防控烟粉虱提供了理论基础。

瓜类黄化褪绿病毒上海分离物外壳蛋白的原核表达及其抗血清的制备

利用RT-PCR技术扩增得到瓜类黄化褪绿病毒(cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)上海市嘉定分离物的外壳蛋白(coat protein,cp)。序列分析结果表明,cp基因的核苷酸序列长度为753 bp,编码250个氨基酸,与已报道的CCYV其他分离物的cp核苷酸相似性均高于95%。将此基因克隆到原核表达载体pET32a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)后IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE及Western blotting分析表明,CCYV cp在大肠杆菌中可表达出含有6-His标签的分子量约46 kDa的蛋白。纯化表达蛋白后免疫家兔制备抗血清,间接酶联免疫吸附测定(ID-ELISA)结果显示,制备的抗血清可用于检测田间感病样品中的CCYV。

两种甜瓜病毒寿光分离物的分子检测与鉴定

甜瓜坏死斑点病毒（Melon necrotic spot virus ,MNSV）及瓜类褪绿黄化病毒（Cucurbit chlorotic yellows vi-rus ,CCYV）近年来在瓜类种植区均大面积发生,危害较为严重,已成为制约甜瓜生产的重要因素。本研究广泛收集疑似感染 MNSV 及 CCYV 的甜瓜病叶,从中提取植物总 RNA 进行 RT-PCR 扩增,将产物分别连接到 pEASY-T1 Simple 克隆载体上,对含有目的片段的重组子进行测序及比对分析。结果显示得到了与预期结果一致的 DNA序列,其扩增产物大小分别为673 bp（MNSV）和877 bp（CCYV）。同源性分析结果表明,MNSV 和 CCYV 寿光分离物的核苷酸序列与中国其他地区或一些国家已报道的分离物同源性达99%～100%。

广西三种甜瓜病毒分离物的分子检测与鉴定

瓜类褪绿黄化病毒Cucurbits chlorotic yellows virus(CCYV)、甜瓜黄化斑点病毒Melon yellow spot virus(MYSV)及甜瓜坏死斑点病毒Melon necrotic spot virus(MNSV)是近年来报道侵染瓜类作物的新病毒,在个别种植区大面积发生,对生产构成严重威胁。为了解3种病毒在广西的发生情况,先后到各西甜瓜种植区进行了调查,并采集疑似CCYV、MYSV及MNSV的甜瓜病叶样品,提取病叶总RNA,通过特异性引物分别进行一步法RTPCR扩增,电泳结果显示RT-PCR产物与预期大小一致的序列条带;将扩增产物分别连接到pMD19-T克隆载体上,挑选阳性克隆子进行序列测定及比对分析。结果表明:CCYV、MYSV和MNSV广西分离物的CP基因序列与其他已报道核苷酸序列一致性分别达95.1%~100%、96.5%~99%和83.7%~92.5%。

甜瓜褪绿黄化病毒病综合防控技术

通过采用高锰酸钾、石灰氮、生石灰等土壤消毒技术,嫁接栽培技术,覆盖防虫网、悬挂黄板等物理防治技术,释放丽蚜小蜂的生物防治技术,喷施杀虫剂的化学防治技术,以及喷施叶面肥技术,构建了甜瓜褪绿黄化病毒病综合防控技术,能够有效控制甜瓜褪绿黄化病毒病的流行危害,防控效果可达72%。

甜瓜褪绿黄化病毒病综合防控技术

本文通过对甜瓜褪绿黄化病毒病在嫁接、物理防治、化学防治、叶面追肥、土壤处理方面的研究,构建了对该病的综合防治技术,此技术在一定程度上能控制甜瓜褪绿黄化病毒病的流行危害。

瓜类褪绿黄化病毒对烟粉虱取食行为的影响

瓜类褪绿黄化病毒(Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)是近年来报道的一种新病毒,由B型和Q型烟粉虱[Bemisia tabaci(Gennadius)]以半持久性方式特异性传播,其各项研究工作均处于起步阶段,烟粉虱传播该病毒的机理目前尚无文献报道。本研究以B型和Q型烟粉虱、CCYV宿主黄瓜和非宿主棉花为试验材料,利用刺吸电位(electrical penetration graph,EPG)技术比较两种生物型烟粉虱在带毒和无毒状态下的取食行为,期望阐明CCYV病毒、烟粉虱和寄主植物之间的互作关系,为烟粉虱及其所传播病毒的有效治理奠定理论基础。本研究取得的主要结果如下:(1)B型和Q型烟粉虱两性成虫在黄瓜上的取食行为。带毒B型较无毒B型在黄瓜上有显著多的非韧皮部刺探和显著长的韧皮部唾液分泌时间(P<0.05),带毒B型雄性或雌性与带毒B型整体表现不同。Q型烟粉虱带毒后在黄瓜韧皮部有显著多的唾液分泌和刺探取食(P<0.05)。与无毒烟粉虱相比,带毒B型和Q型烟粉虱的取食行为差异缩小了。对于带毒雄性,B型较Q型有显著多的韧皮部的刺探次数(P<0.05)。对于雌性,无毒B型较无毒Q型有更多的非韧皮部刺探,而带毒Q型雌眭较带毒B型则有显著多的非韧皮部刺探(P<0.05)。(2)B型和Q型烟粉虱两性成虫在棉花上的取食行为。带毒B型较无毒B型有显著多的非韧皮部刺探(P<0.05)。带毒B型雄性烟粉虱和B型烟粉虱的整体表现一致的。带毒B型雌性比无毒B型雌性有显著多的非韧皮部刺探(P<0.05)。带毒Q型较无毒Q型在棉花有显著多的非韧皮部刺探和韧皮部取食(P<0.05)。带毒Q型烟粉虱两性在棉花上的表现与带毒Q型烟粉虱整体是一致的。(3)B型和Q型烟粉虱两性成虫在黄瓜和棉花上的取食行为。无毒B型在黄瓜非韧皮部有显著多的刺探(P<0.05),而在棉花上有较多韧皮部取食(P<0.05)。带毒B型雄陛在棉花韧皮部有较多的取食(P<0.05)。带毒Q型有显著多的棉花韧皮部刺探取食(P<0.05)。无毒Q型雄性在棉花上有显著多的非韧皮部刺探和韧皮部取食(P<0.05)。带毒Q型雄性在黄瓜上有显著多的非韧皮部刺探,而在棉花上有显著多的韧皮部取食(P<0.05)。无毒和带毒Q型雌性在棉花上均有显著多的韧皮部取食(P<0.05),而带毒Q型雌性在黄瓜非韧皮部有显著多的刺探次数和时间(P<0.05)。通过以上实验和分析,得出的研究结论为:B和Q型烟粉虱携带CCYV病毒后,取食能力均有不同程度的变化。其中,在黄瓜上,CCYV促进了两种生物型烟粉虱的刺探取食,但对B型烟粉虱的取食促进强于Q型烟粉虱;CCYV对B型雄性韧皮部促进作用强于雌性,而对Q型雌性的取食促进强于Q型雄性。在棉花上,CCYV促进了B型烟粉虱对非韧皮部的刺探,而促进了Q型烟粉虱的韧皮部取食能力;CCYV对B型雄性的取食促进强于B型雌性,而对Q型烟粉虱两性成虫的影响是一致的,均促进了其在韧皮部取食。因此,CCYV修饰了其介体烟粉虱的取食行为,使介体的行为更有利于病毒的传播,而病毒对介体的影响因植物、介体和介体性别不同而有所差异。

瓜类褪绿黄化病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备

根据已报道的瓜类褪绿黄化病毒(Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)外壳蛋白(CP)基因的核苷酸序列设计引物,利用RT-PCR方法从感病甜瓜中扩增得到长度为753 bp的CP基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-3上,获得重组载体pGexCP,在大肠杆菌BL21菌株中诱导表达,SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CP基因在大肠杆菌BL21中得到了高效表达。以表达的蛋白为抗原,免疫家兔,制备了CCYV外壳蛋白的特异性抗血清。ACP-ELISA检测结果表明,当CP蛋白浓度为2.5μg/mL时,血清效价高达5.12×105。Western blot分析表明制备的抗体检测CCYV侵染的甜瓜叶片得到特异性的条带,表明该抗体的特异性较好。ACP-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间甜瓜病样的检测。本试验为CCYV的快速检测提供了重要的研究材料。