基于CCL2-CCR2信号轴探索松萝酸对胃癌细胞恶性行为的影响

目的:探讨松萝酸(UA)调节CC趋化因子配体2-CCL2受体(CCR2)信号轴对胃癌细胞恶性行为的影响。方法:以生长良好的人胃癌细胞系SGC-7901细胞为研究对象,通过不同浓度的UA处理,设为UA低浓度(UA-L)组(62.5μmol/L UA)、UA中浓度(UA-M)组(125μmol/L UA)、UA高浓度(UA-H)组(250μmol/L UA);同时对细胞转染CCL2过表达载体(pc DNA3.1 CCL2)、空载体(pc DNA3.1)、沉默CCL2(si CCL2)及阴性对照(si control),并采用250μmol/L UA处理SGC-7901细胞,标记为UA-H+pc DNA3.1 CCL2组、UA-H+pc DNA3.1组、UA-H+si CCL2组、UA-H+si control组,另取未处理的SGC-7901细胞作为对照组。流式细胞术、MTT及qRT-PCR检测细胞凋亡、增殖及CCL2、CCR2 mRNA表达水平;Western blot检测PD-L1、凋亡蛋白(Bax)、增殖蛋白(CyclinD1、CCL2、CCR2)、免疫逃逸相关蛋白(B7H1)表达水平;与体外分离培养的CD8+T细胞共培养后,ELISA检测上清液中IL-4、IFN-γ、IL-10水平。将各组细胞与活化的外周血单个核细胞(PBMC)1∶1共培养72 h,比较各组胃癌细胞对T细胞介导的杀伤敏感性。结果:与对照组相比,UA-L组、UA-M组、UA-H组细胞增殖率、IL-10水平、CyclinD1、PD-L1、CCL2、CCR2、B7H1蛋白及mRNA表达、与活化的PBMC 1∶1共培养72 h后的细胞计数显著降低,细胞凋亡率、IL-4、IFN-γ水平、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);与UA-H+pc DNA3.1组相比,UA-H+pc DNA3.1 CCL2组细胞增殖率、IL-10水平、CyclinD1、PDL1、CCL2、CCR2蛋白及mRNA表达、与活化的PBMC 1∶1共培养72 h后的细胞计数显著增加,细胞凋亡率、IL-4、IFN-γ水平、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);与UA-H+si control组相比,UA-H+si CCL2组细胞增殖率、IL-10水平、CyclinD1、PD-L1、CCL2、CCR2蛋白及mRNA表达、与活化的PBMC 1∶1共培养72 h后的细胞计数显著降低,细胞凋亡率、IL-4、IFN-γ水平、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:UA可抑制胃癌细胞增殖、免疫逃逸,诱导其凋亡,可能与抑制CCL2-CCR2信号轴有关。

甲基莲心碱调节CCL2-CCR2信号轴对心力衰竭大鼠心肌炎症的影响

目的:探讨甲基莲心碱(NeF)调节趋化因子CCL2/受体CCR2(CCL2-CCR2)信号轴对心力衰竭(HF)大鼠心肌炎症的影响。方法:通过结扎左前降支构建HF大鼠模型,随机分为HF组、不同剂量(5、10、20 mg/kg)NeF组以及20 mg/kg NeF^(+)CCL2组,并选取不结扎左前降支的10只大鼠作为假手术组,治疗结束后进行心脏功能[左室收缩末期内径(LVESD)、射血分数(EF)、左心室射血分数(LVEF)]评估;检测血清指标[脑钠肽(BNP)、IL-1β、N末端B型利钠肽原(NT-pro BNP)、TNF-α];分离心肌组织,检测组织中TNF-α、IL-1β表达、病理损伤、胶原沉积以及CCL2、CCR2蛋白表达。结果:HF组大鼠心肌细胞减少,炎症细胞浸润,胶原纤维沉积严重,LVESD、血清中BNP、NT-pro BNP、TNF-α、IL-1β水平、心肌组织中TNF-α、IL-1β表达、胶原面积比、CCL2、CCR2蛋白表达较假手术组显著升高,LVEF、EF显著降低(P<0.05);不同剂量NeF组大鼠心肌组织损伤、胶原纤维沉积减轻,LVESD、血清中BNP、NT-pro BNP、TNF-α、IL-1β水平、心肌组织中TNF-α、IL-1β表达、胶原面积比、CCL2、CCR2蛋白表达较HF组显著降低,LVEF、EF显著升高,且组间差异具有统计学意义(P<0.05);CCL2干预后,心肌组织损伤、胶原纤维沉积加重,LVESD、血清中BNP、NT-pro BNP、TNF-α、IL-1β水平、心肌组织中TNF-α、IL-1β表达、胶原面积比、CCL2、CCR2蛋白表达较20 mg/kg NeF组显著升高,LVEF、EF显著降低(P<0.05)。结论:NeF调节CCL2-CCR2信号轴抑制HF大鼠心肌炎症,改善心功能。

乌司他丁调节CCL2-CCR2信号轴对胃癌细胞上皮-间质转化和免疫逃逸的影响分析

目的:探讨乌司他丁(UTI)调节CC趋化因子配体2(CCL2)-C-C趋化因子受体2(CCR2)信号轴对胃癌(GC)细胞上皮-间质转化(EMT)和免疫逃逸的影响。方法:qRT-PCR、Western blot分别检测GC组织/细胞中CCL2、CCR2 mRNA及蛋白表达水平;以不同浓度的UTI(0、100、200、400、800 U/ml)干预细胞,MTT法检测细胞增殖情况;将AGS细胞分为control组、UTI组、pcDNA组、pcDNA-CCL2组,平板克隆和Transwell小室分别检测细胞增殖、迁移、侵袭。AGS细胞和CD8+T细胞共培养后,将CD8+T分为T细胞组、共培养组、UTI组、pcDNA组、pcDNA-CCL2组,流式细胞仪检测CD8+T细胞凋亡,ELISA检测CD8+T细胞上清中IFN-γ、IL-2、TNF-α水平;Western blot检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、程序性死亡配体1(PD-L1)及CCL2-CCR2信号通路蛋白表达。结果:在GC组织/细胞中,CCL2、CCR2蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05);UTI显著抑制AGS细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT,降低AGS细胞中MMP-2、Vimentin、PD-L1、CCL2、CCR2蛋白表达,升高E-cadherin蛋白表达(P<0.05);过表达CCL2可逆转UTI对细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的抑制作用;与T细胞组比较,共培养组CD8+T细胞IFN-γ、IL-2、TNF-α水平降低,细胞凋亡率升高(P<0.05);与共培养组比较,UTI组CD8+T细胞IFN-γ、IL-2、TNF-α水平升高,细胞凋亡率降低(P<0.05);与pcDNA组比较,pcDNA-CCL2组CD8+T细胞上述指标变化均显著逆转(P<0.05)。结论:UTI可能通过抑制CCL2-CCR2信号通路抑制AGS细胞的EMT和免疫逃逸。

过表达HMBOX1介导NF-κB/CCL2信号通路抑制COPD诱导的肺组织巨噬细胞浸润和活化

目的构建慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠模型并探讨过表达HMBOX1是否通过调节NF-κB/CCL2信号通路抑制COPD诱导的肺组织巨噬细胞浸润和活化。方法将40只Wistar大鼠随机分为对照组(Control组)、慢性阻塞性肺病组(COPD组)、慢性阻塞性肺病+过表达对照组(COPD+ov-NC组)和慢性阻塞性肺病+过表达HMBOX1组(COPD+ov-HMBOX1组),每组10只。采用持续香烟熏香加间断气管内注射脂多糖的方法建立COPD模型,并通过气管内滴注给予过表达HMBOX1腺病毒。采用Western blot检测大鼠肺组织HMBOX1、p-NF-κB和NF-κB蛋白表达;RT-qPCR用于检测大鼠肺组织HMBOX1和CCL2 mRNA表达;HE染色用于观察大鼠肺组织病理形态变化;采用ELISA检测大鼠血清和BALF中TNF-α、MIP-2、IL-1β和IL-10水平;免疫荧光用于检测大鼠肺组织CD11b+F4/80+细胞比例;流式细胞术用于检测大鼠肺组织F4/80+MHCⅡ+细胞和F4/80+CD80+细胞比例。结果Control组大鼠肺泡结构完整,未见炎性细胞浸润;COPD组和COPD+ov-NC组大鼠肺组织可见大量炎性细胞浸润以及肺泡结构损伤;COPD+ov-HMBOX1组大鼠肺组织浸润的炎性细胞较少,肺泡结构损伤改善。与Control组相比,COPD组和COPD+ov-NC组大鼠肺组织中HMBOX1 mRNA和蛋白表达以及血清和BALF中IL-10水平显著降低,血清和BALF中TNF-α、MIP-2和IL-1β水平、肺组织中CD11b+F4/80+细胞、F4/80+MHCⅡ+细胞和F4/80+CD80+细胞比例以及肺组织中p-NF-κB蛋白和CCL2 mRNA表达显著升高;与COPD组和COPD+ov-NC组相比,COPD+ov-HMBOX1组大鼠肺组织中HMBOX1 mRNA和蛋白表达以及血清和BALF中IL-10水平显著升高,血清和BALF中TNF-α、MIP-2和IL-1β水平、肺组织中CD11b+F4/80+细胞、F4/80+MHCⅡ+细胞和F4/80+CD80+细胞比例以及肺组织中p-NF-κB蛋白和CCL2 mRNA表达显著降低。结论过表达HMBOX1改善COPD诱导的气道炎症和肺损伤,其机制可能与抑制NF-κB/CCL2信号通路激活介导的肺组织巨噬细胞浸润和异常激活有关。

基于CCL2/CCR2信号轴的肿瘤免疫治疗药物的研究进展

趋化因子配体2(C-C motif chemokine ligand 2,CCL2)及其受体CCR2与肿瘤的发生、发展密切相关。CCL2/CCR2信号轴通过多种机制促进肿瘤进展,一方面CCL2与肿瘤细胞表面的CCR2结合促进肿瘤的生长/存活和转移;更为重要的是CCL2可以招募多种免疫抑制细胞在肿瘤微环境中聚集,抑制免疫细胞的功能和活性,促进肿瘤进展。本文综述了CCL2/CCR2信号轴以及其在肿瘤及肿瘤微环境中的作用,并重点介绍了靶向CCL2/CCR2信号轴药物的临床研究进展,以期深入并全面了解CCL2/CCR2信号轴在肿瘤进展中的作用机制,开发更有效的肿瘤免疫治疗药物。

川黄方抑制IL-17/p38 MAPK/CCL2炎症通路活化减轻三价砷诱导的急性肾损伤

目的:从IL-17/p38 MAPK/CCL2炎症通路探讨川黄方抑制临床剂量三价砷诱导的急性肾损伤(trivalent arsenic-induced acute kidney injury,AI-AKI)的作用机制。方法:24只成年雄性Wistar大鼠随机分为四组(n=6):对照组(CON)、三价砷组(AS)、三价砷+川黄方组(AS+CHF)和三价砷+N-乙酰半胱氨酸组(AS+NAC);川黄方和NAC预处理5 d后,每天腹腔注射10 mg/kg亚砷酸钠(NaAsO 2)连续10 d建立AI-AKI大鼠模型。检测大鼠血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平,HE染色观察肾脏病理形态改变,免疫蛋白印记法检测肾脏组织中IL-17、p38MAPK、p-p38MAPK、CCL2蛋白水平表达,免疫组化检测肾组织IL-17和CCL2的表达。结果:与CON组相比,AS组大鼠Scr和BUN显著升高(P<0.01),AS+CHF组和AS+NAC组的Scr和BUN水平较AS组下降(P<0.01);AS组大鼠肾小管上皮细胞空泡样变明显增加、炎性细胞浸润增加,而CHF和NAC的预处理均减轻了肾脏损伤,AS+CHF组空泡样变和炎性细胞浸润的程度较AS+NAC组轻;与CON相比,AS组IL-17、p-p38MAPK、CCL2蛋白表达升高(P<0.01);与AS组相比,AS+CHF组和AS+NAC组IL-17、p-p38MAPK、CCL2蛋白表达明显回落(P<0.01);IL-17和CCL2的免疫组化结果与免疫蛋白印记结果一致。结论:川黄方能减轻三价砷诱导的急性肾损伤,其机制是通过抑制IL-17/p38 MAPK/CCL2炎症通路活化、进而减轻其诱导的肾组织炎症反应。

JNK/CCl2通路诱导巨噬细胞募集并促进PM(2.5)颗粒物暴露诱导的幼年大鼠过敏性气道炎症

目的:基于JNK/CCl2信号通路诱导的巨噬细胞募集探讨PM(2.5)暴露对幼年大鼠气道炎症的作用及其机制。方法:幼年SD大鼠50只,随机分为5组(n=10),其中对照组不进行任何处理,PM(2.5)组幼年大鼠接受PM(2.5)颗粒物暴露,PM(2.5)+茴香霉素组幼年大鼠接受PM(2.5)暴露以及静脉注射JNK的激活剂茴香霉素,PM(2.5)+SP600125组幼年大鼠接受PM(2.5)暴露以及静脉注射JNK拮抗剂SP600125,PM(2.5)+吡非尼酮组幼年大鼠接受PM(2.5)暴露以及静脉注射CCl2拮抗剂吡非尼酮。安乐死幼年大鼠取肺组织,Western blot法检测JNK、磷酸化的JNK(p-JNK)和CCl2的蛋白表达水平变化,用苏木精-伊红(HE)染色检测肺部气道组织的病理变化并进行肺支气管炎症评分。流式细胞术分析肺泡灌洗液中巨噬细胞含量的变化。ELISA检测各组幼年大鼠的肺泡灌洗液中促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平。结果:各组间JNK、p-JNK、CCl2的表达水平(F=205.296、950.408、260.019;均P<0.001),巨噬细胞含量(F=48.414;P<0.001),肺支气管炎症评分(F=101.703;P<0.001)以及IL-6(H=44.890;P<0.001)、IL-1β(H=42.071;P<0.001)、TNF-α(F=297.154;P<0.001)的水平差异均有统计学意义。与对照组相比,PM(2.5)组JNK/CCl2通路蛋白JNK、p-JNK、CCl2的表达上调(均P<0.05),同时巨噬细胞含量增加(P<0.05),肺支气管炎症评分升高(P<0.05),IL-6、IL-1β、TNF-α水平上调(均P<0.05)。与PM(2.5)组相比,PM(2.5)+茴香霉素组中巨噬细胞含量均上调(P<0.05),肺支气管炎症评分升高(P<0.05),另外IL-6、IL-1β、TNF-α的水平升高(均P<0.05),且JNK、p-JNK、CCl2的表达水平升高(均P<0.05)。与PM(2.5)组相比,PM(2.5)+SP600125组、PM(2.5)+吡非尼酮组的巨噬细胞含量均下调(P<0.05),且肺支气管炎症评分降低(P<0.05),另外IL-6、IL-1β、TNF-α的水平均下调(均P<0.05)。与PM(2.5)组相比,PM(2.5)+SP600125组的JNK、p-JNK、CCl2的表达水平下调(均P<0.05),PM(2.5)+吡非尼酮组的CCl2的表达水平下调(均P<0.05)。结论:JNK/CCl2通路诱导巨噬细胞募集促进PM(2.5)颗粒物暴露诱导的幼年大鼠过敏性气道炎症。

脊髓背根神经节ZXDC介导CCL2对慢性压迫性 神经损伤小鼠神经性疼痛的作用

目的探讨脊髓背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中转录因子锌指X连锁复制C(zinc finger X-linked duplicated C,ZXDC)介导CCL2/CCR2信号通路对慢性压迫性神经损伤(chronic construction injury model,CCI)诱导神经性疼痛的作用及机制。方法构建小鼠坐骨神经慢性压迫性损伤模型,免疫荧光染色、Western blot法和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测正常情况和CCI造模后DRG中ZXDC及CCL2表达变化;将实验动物分为假手术(Sham)组、CCI+AAV-NC组和CCI+AAV-ZXDC siRNA组;Western blot法和免疫荧光染色检测各组小鼠CCI造模后各时间点DRG中ZXDC、CCL2和CCR2表达,RT-qPCR检测DRG中促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达,机械性缩足反射测试检测神经性疼痛行为改变。结果ZXDC表达定位在DRG大、中、小神经元。CCI损伤后1~3天DRG中ZXDC和CCL2蛋白和mRNA表达显著增高,CCI后7天二者表达显著降低,ZXDC和CCL2mRNA表达量呈正相关(P均<0.05)。CCI后3天,与Sham组比较,CCI+AAV-NC组和CCI+AAV-ZXDC siRNA组ZXDC、CCL2、CCR2蛋白表达、TNF-α和IL-1βmRNA表达显著增高,其中CCI+AAV-ZXDC siRNA组较CCI+AAV-NC组ZXDC、CCL2、CCR2蛋白表达、TNF-α和IL-1βmRNA显著降低(P均<0.05)。与Sham组比较,CCI+AAV-ZXDC siRNA组和CCI+AAV-NC组CCI后各时间点机械缩足阈值均显著降低,其中CCI后7天,CCI+AAV-ZXDC siRNA组机械缩足阈值显著高于CCI+AAV-NC组(P均<0.05)。结论脊髓背根神经节ZXDC基因敲减通过抑制CCL2/CCR2信号通路介导CCI诱导的神经性疼痛。

茯苓酸调节CCL2-CCR2信号轴对急性心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的探讨茯苓酸对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌损伤的影响,以及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1/CCL2)-CC趋化因子受体2(CCR2)信号轴发挥的作用。方法采用左前降支结扎法构建AMI大鼠模型,将造模成功大鼠分为模型组,低、中、高剂量茯苓酸组,每组15只,另取15只大鼠作为假手术组;药物干预14 d后,小动物超声仪检测心功能相关指标变化;ELISA法检测血清炎性因子水平;HE染色检测心肌组织病理损伤;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡;Western blot检测心肌组织CCL2、CCR2、Caspase-3蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠心肌组织结构被严重破坏,有大量炎性细胞浸润,心功能相关指标左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、血清中炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平、心肌细胞TUNEL阳性率、心肌组织CCL2、CCR2、Caspase-3蛋白表达水平均显著升高,左心室射血指标(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)显著降低(P<0.05);与模型组相比,低、中、高剂量茯苓酸组大鼠心肌组织结构逐渐恢复,炎性细胞浸润减轻,心功能指标LVEDD、LVESD、血清中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平、心肌细胞TUNEL阳性率、心肌组织CCL2、CCR2、Caspase-3蛋白表达水平均显著降低,LVEF、LVFS显著升高,呈剂量依赖性(P<0.05)。结论茯苓酸可能通过调节CCL2-CCR2信号轴减轻AMI大鼠心肌损伤。

CCL27 CCL28及CCR10在癫痫小鼠急性期表达增高

目的探讨趋化因子CCL27、CCL28及其受体CCR10在小鼠癫痫急性期外周血中的表达变化。方法取正常及癫痫小鼠急性期不同时间点(10min、30min、1h、2h)外周血利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测毛果云香碱致癫痫发作小鼠急性期外周血中CCL27、CCL28mRNA水平;同期取正常及癫痫急性期不同时间点(10min、30min、1h、2h)肝素抗凝外周血,提取淋巴细胞层后利用FACSsort型流式细胞仪检测外周血淋巴细胞CCR10蛋白水平的表达变化。结果癫痫小鼠发作急性期外周血中CCL27、CCL28mRNA水平、淋巴细胞中CCR10蛋白表达水平均在癫痫发作2h高于对照组(P<0.05)。结论癫痫发作早期已出现外周血免疫功能紊乱,该病理变化可能与癫痫发病过程中的炎性反应和神经细胞的凋亡相关。

趋化因子CCL2对大鼠学习记忆的影响及其机制

目的 研究CC类趋化因子配体2(CCL2)对大鼠学习记忆的影响及机制。方法 40只♂ SD大鼠随机分为5组:空白对照组、假手术组、CCL2(0.5、5、50 ng)组。除空白对照组外,其余各组均进行双侧海马注射。注射后的d3~8进行Morris水迷宫实验,d10分离各组大鼠海马,qPCR检测凋亡蛋白caspase-8、caspase-3以及磷酸激活谷氨酰胺酶(PAG)mRNA的相对表达水平;ELISA检测肿瘤坏死因子ɑ(TNF-ɑ)、乙酰胆碱酯酶(AChE)的含量,以及谷氨酰胺合成酶(GS)的活力。结果与假手术组相比,各CCL2处理组大鼠逃避潜伏期及游泳路程均明显增长,原平台穿越次数和原平台象限路程百分比均明显减少;各CCL2处理组大鼠海马组织中caspase-8、caspase-3、PAG mRNA相对表达量增加;各CCL2处理组大鼠海马组织内TNF-ɑ、AChE的表达量增加,GS活力下降。结论 CCL2能损伤大鼠的学习记忆力,其机制与参与炎症反应、神经兴奋毒性、导致ACh含量下降以及介导细胞凋亡有关。

趋化因子CCL2对血小板p38MAPK-HSP27通路的影响

目的探讨CC趋化因子配体2(CCL2)在残余血小板高反应中的作用及其调控血小板的可能机制。方法纳入ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者40例,采用Verify Now法检测P2Y12反应单元(PRU),根据检测结果将40例患者分为残余血小板高反应组(高反应组,n=24)和残余血小板正常反应组(正常反应组,n=16)。ELISA检测两组患者血浆中CCL2的表达,Western blotting检测血小板中CCL2和CCR2的表达,ARY003B蛋白芯片筛选经外源性CCL2刺激后血小板中磷酸化水平发生变化的激酶。Western blotting验证经CCL2刺激,或经CCR2拮抗剂(RS 102895)、p38MAPK信号通路抑制剂(SB 203580)预处理后血小板中p38MAPK和HSP27的磷酸化变化。结果高反应组血浆中CCL2浓度、血小板中CCL2和CCR2表达均明显高于正常反应组。经外源性CCL2刺激后,芯片筛选发现p38α、HSP27的磷酸化水平增高。在CCL2刺激前,应用RS 102895或SB 203580预处理血小板,Western blotting检测显示p38MAPK和HSP27的磷酸化水平下降。结论 CCL2以自分泌/旁分泌的方式参与残余血小板高反应,CCL2可能通过p38MAPK-HSP27通路调控血小板。

趋化因子CCL2中和抗体在大鼠胫骨癌痛治疗中的作用

目的观察鞘内注射趋化因子CCL2中和抗体在胫骨癌痛大鼠治疗中的作用,并探讨可能的机制。方法 40只雌性SD大鼠随机均分为五组:假手术组(Ⅰ组)、假手术+CCL2中和抗体组(Ⅱ组)、骨癌痛组(Ⅲ组)、骨癌痛+controlIgG组(Ⅳ组)和骨癌痛+CCL2中和抗体组(Ⅴ组)。Walker256乳腺癌细胞注入胫骨骨髓腔建立大鼠胫骨癌痛模型。术后10～12d鞘内注射CCL2中和抗体或对照IgG(10μg/15μl)。测定术前1d,术后1、3、5、7、10、14、21d各组大鼠自由行走痛评分。另取30只大鼠,分组同前(n=6),术后14d取材,免疫荧光染色法测定脊髓背角星形胶质细胞标志物(GFAP)的平均光密度值(MOD)。结果与Ⅲ组相比,Ⅴ组大鼠术后10、14和21d自由行走痛评分明显降低,术后14dMOD值明显降低(P<0.01),Ⅳ组对应时点各值无明显变化。结论胫骨癌痛大鼠鞘内注射CCL2中和抗体能显著减轻自由行走痛并抑制脊髓星形胶质细胞的活化。CCL2可能通过激活脊髓星形胶质细胞参与大鼠胫骨癌痛维持的调控。

趋化因子CCL2在重度颅脑损伤患者中的表达

目的 研究趋化因子CCL2在重度颅脑损伤（TBI）患者脑组织中的细胞定位及在脑组织和血液中的表达,探讨其与损伤程度的关系。方法 选取36例2014年3月至2015年3月住院的重度颅脑创伤（GCS≤8分）,且行开颅手术患者为观察组,观察组根据入院时格拉斯哥昏迷评分（GCS）再分为重型TBI组（6~8分）及特重型TBI组（3~5分）。10例健康人为血液对照组,采用免疫荧光双标法观察重度TBI患者检测CCL2在脑组织中的细胞定位,运用ELISA法检测损伤后脑组织和血液中CCL2的表达。结果 脑损伤患者脑组织内CCL2主要表达在星型胶质细胞,重度脑损伤患者脑组织中CCL2水平明显增高,CCL2在血液中的水平于术后1d达高峰,术后30d仍高于对照组（59.15±3.44）pg/mL,与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。特重型TBI患者脑组织中CCL2（312.84±36.50）pg/mL表达量高,与重型TBI患者（197.94±10.51）pg/mL相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 重度TBI患者CCL2表达水平与损伤程度密切相关。

趋化因子CCL20及其受体CCR6在肺腺癌组织中的表达及与复发转移的关系研究

目的通过观察复发和非复发肺腺癌患者癌组织中CCL20和CCR6的表达情况,探讨CCL20和CCR6在肺腺癌发生发展中的作用。方法选取2009年2月—2011年12月河北省人民医院收治的肺腺癌患者162例,根据随访期间的复发转移情况分为复发组(n=50)和非复发组(n=112)。采用免疫组织化学染色检测CCL20和CCR6的表达;采用实时荧光定量PCR检测CCL20、CCR6 mRNA的表达,采用蛋白质印迹(Western blot)法检测CCL20、CCR6蛋白的表达。结果 CCL20在肺腺癌组织中主要表达于细胞膜和细胞质,CCR6在肺腺癌组织中主要表达于细胞质,二者在肺腺癌癌旁组织中均无明显表达。复发组CCL20、CCR6高表达率〔CCL20:38(76.0%)比9(8.0%);CCR6:33(66.0%)比7(6.3%)〕和染色指数〔CCL20:(150.4±10.2)比(62.5±8.5);CCR6:(134.4±11.3)比(58.0±9.5)〕均高于非复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。复发组CCL20、CCR6 mRNA表达较非复发组分别增加82.3%、56.4%,CCL20、CCR6蛋白表达较非复发组分别增加292.0%、188.0%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CCL20和CCR6在肺腺癌组织中呈高表达,且与肺腺癌的发生发展相关。

CCL2和ETS-1在皮肤黑色素瘤组织中的表达及临床意义

目的:探讨CCL2和ETS-1在皮肤黑色素瘤组织中的表达及其临床意义。方法:选取2012年06月至2015年06月本院收治的皮肤黑色素瘤患者70例,取其黑色素瘤组织。另选取同期在本院外科手术切除的正常皮肤组织70例作为对照。采用免疫组化染色法检测CCL2和ETS-1蛋白表达,分析其与临床病理参数的关系。采用COX回归模型分析CCL2和ETS-1蛋白表达与皮肤黑色素瘤患者预后的关系。结果:皮肤黑色素瘤组织中CCL2、ETS-1阳性表达率明显高于正常皮肤组织(P<0.05)。CCL2和ETS-1表达与患者年龄、性别无关(P>0.05),与肿瘤大小、分化程度、浸润程度、TNM分期、淋巴结是否转移有关(P<0.05)。CCL2与ETS-1在皮肤黑色素瘤组织中的表达呈正相关(r=0.452,P<0.05)。CCL2、ETS-1阳性表达组3年存活率均显著低于阴性表达组(P<0.05)。COX回归分析显示,CCL2和ETS-1表达、基层浸润、淋巴结转移是影响皮肤黑色素瘤预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:CCL2和ETS-1在皮肤黑色素瘤组织中均高表达,且与肿瘤分化程度、淋巴结转移等病理参数及预后有关,可能参与皮肤黑色素瘤发生发展。

早孕期人蜕膜趋化因子CCL2及其受体CCR2的表达及意义

目的:分析人早孕蜕膜及蜕膜基质细胞趋化因子受体CCR2及其配体CCL2在人早孕蜕膜组织及蜕膜基质细胞的表达和分泌,以探讨CCR2/CCL2在母-胎界面的生物学作用。方法:收集早孕期蜕膜组织,分离蜕膜基质细胞,分别用半定量RT-PCR、免疫化学方法分析正常人早孕蜕膜组织和培养的人蜕膜基质细胞CCR2/CCL2表达;并且用流式细胞术和ELISA法分别检测蜕膜基质细胞表面CCR2的表达和培养的蜕膜基质细胞上清中CCL2的分泌。结果:人早孕蜕膜组织和蜕膜基质细胞均高水平转录和翻译CCR2/CCL2,培养的基质细胞能分泌大量的CCL2,其分泌量呈时间依赖性。结论:早孕蜕膜高表达和分泌CCR2/CCL2可能参与早孕期母-胎免疫调节。

急性淋巴细胞白血病患者骨髓细胞中CCL2 mRNA的表达

背景:临床工作中希望能够根据骨髓CCL2表达对急性淋巴细胞白血病患者进行危险分层和预后判断。目的:观察急性淋巴细胞白血病患者骨髓细胞中CCL2 mRNA的表达情况。方法:初诊50例急性淋巴细胞白血病患者为实验组,30例非血液肿瘤患者为对照组。初诊急性淋巴细胞白血病患者化疗2个疗程后按疗效分为完全缓解组43例,未完全缓解组7例。实验抽取研究对象骨髓5mL,采用半定量聚合酶链反应法检测CCL2 mRNA表达。结果与结论:①初诊急性淋巴细胞白血病组CCL2 mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.05);完全缓解组CCL2 mRNA水平明显低于未完全缓解组(P<0.01);完全缓解组治疗后CCL2 mRNA表达水平明显低于治疗前(P<0.01)。未完全缓解组治疗2个疗程后CCL2 mRNA表达水平无明显下降(P>0.05)。②前B-急性淋巴细胞白血病患者骨髓CCL2 mRNA表达水平明显高于普通B及T系急性淋巴细胞白血病患者(P<0.05)。初诊时白细胞≥50×109L-1急性淋巴细胞白血病患者CCL2 mRNA表达水平明显高于白细胞<10×109L-1及10×109L-1≤白细胞<50×109L-1组(P<0.05),10×109L-1≤白细胞<50×109L-1组明显高于白细胞<10×109L-1组(P<0.01)。结果表明急性淋巴细胞白血病患者骨髓细胞能分泌CCL2,骨髓CCL2 mRNA表达水平与患者初诊时的白细胞计数及免疫分型有一定的关系,在一定程度上能反映患者的近期疗效。

丹酚酸B、C组分配伍对肾纤维化炎症细胞趋化因子CCL2、CCL3的影响

目的研究丹酚酸B、C组分配伍对肾间质纤维化大鼠肾组织炎症细胞趋化因子CCL2、CCL3的作用及机制。方法50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、丹酚酸B组、丹酚酸C组、丹酚酸B和C按1∶1配伍组(简称丹酚酸B+C组)。除正常组外,其余各组均给予单侧输尿管结扎术(UUO)建立肾间质纤维化模型。各治疗组即给予相应药物灌胃治疗。第14天处死大鼠,光镜观察肾组织病理、胶原沉积,全自动生化分析仪检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN),Western Blot法检测肾组织单核细胞趋化蛋白-1(CCL2)和巨噬细胞炎症蛋白-3α(CCL3)蛋白表达。结果与模型组比较,各治疗组HE、Masson评分均显著降低,丹酚酸C组血清Cr水平降低明显,各治疗组CCL2、CCL3相对表达显著降低。结论丹酚酸B、C组分配伍可抑制肾组织CCL2和CCL3蛋白表达,从而改善UUO大鼠肾功能及肾脏病理,并对其肾脏起到一定的保护作用。

循环血CCL2、CCL5、CXCL10在HBV相关性肝病中表达水平的差异及相关性分析

目的:探讨HBV相关性肝病患者循环血CCL2、CCL5、CXCL10水平的表达差异与临床意义。方法:收集在本院检测或治疗的乙肝病毒携带者20例、慢性乙型肝炎患者75例、慢性重型乙型肝炎患者20例、乙肝肝硬化患者20例、乙肝肝癌患者20例的循环血标本及临床资料,以同期体检而无HBV感染的20例健康体检者为对照组。采用ELISA法检测研究对象循环血中CCL2、CCL5、CXCL10的表达水平,荧光定量PCR法检测乙肝病毒(HBV-DNA)载量,用7600-020全自动生化分析仪检测肝功能的ALT、AST等,分析CCL2、CCL5、CXCL10表达水平的差异与临床意义。结果:慢性乙型肝炎患者轻、中、重度组循环血CCL2、CCL5、CXCL10的表达水平与乙肝病毒携带者及健康对照组比较显著升高,且慢性乙型肝炎患者重度组表达水平最高,五者间比较,F值分别为824.90,595.51,810.41,差异具有统计学意义(P<0.01);在HBV相关性肝病患者间,随着病情加重其循环血CCL2、CCL5、CXCL10表达水平逐渐升高,重型乙型肝炎组水平最高,六组间比较,F值分别为226.77、196.14、133.09,差异具有统计学意义(P<0.01);慢性乙型肝炎组患者循环血CCL2、CCL5、CXCL10水平与HBV-DNA载量呈正相关系(r值分别为:0.32、0.3、0.41,P<0.05);HBV相关性肝癌组CCL2水平与HBV-DNA载量呈正相关系(r值为:0.57,P<0.05),其余各HBV相关性肝病组的CXCL10与CCL2、CCL5水平与HBV-DNA载量无相关关系(P>0.05);慢性乙型肝炎组CCL2、CCL5、CXCL10表达水平间呈正相关系(r值为0.88、0.88,P<0.05),其余各HBV相关性肝病患者组CCL2、CCL5、CXCL10表达水平间无相关关系(P>0.05)。结论:循环血CCL2、CCL5、CXCL10表达水平在HBV相关性肝病患者中明显升高,可能介导了肝组织的炎症反应与免疫损伤的发生,并在HBV相关性肝病患者的肝组织炎症发生及慢性化、纤维化和肝细胞癌变的进程中可能发挥了重要的调控作用。