槲皮素通过抑制MIP-1α/CCR1/CCR5信号通路减轻大鼠带状疱疹后神经痛的机制

目的 探讨槲皮素(Que)对大鼠带状疱疹后神经痛(PHN)及趋化因子配体3(CCL3,即MIP-1α)/C-C趋化因子受体(CCR)1/CCR5信号通路的影响。方法 将60只大鼠分为对照组(Con组)、PHN组、L-Que组(30 mg/kg)、M-Que组(60 mg/kg)、H-Que组(120 mg/kg)以及H-Que+MIP-1α组(120 mg/kg Que+0.4μg/kg重组MIP-1α)。检测各组大鼠机械痛阈值(PWT)、热痛阈值(TWL);试剂盒检测外周组织液腺苷、腺嘌呤核糖核苷酸(AMP)、腺苷二磷酸(ADP)以及脊髓背角样本肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;通过HE染色观察脊髓背角病理切片;免疫荧光染色检测脊髓背角小胶质细胞活化情况;Western blot检测MIP-1α/CCR1/CCR5信号通路蛋白表达。结果 PHN组脊髓背角组织出现破裂现象,神经束排列混乱,炎性细胞浸润、水肿,神经元轻微萎缩现象。与Con组相比,PHN组PWT值、腺苷、AMP、ADP水平降低(P<0.05),TWL值、TNF-α、IL-1β水平、Iba1阳性小胶质细胞数量以及MIP-1α、CCR1、CCR5蛋白水平均升高(P<0.05);Que治疗后,大鼠神经束排列杂乱现象有所改善,炎性细胞浸润减少,神经元萎缩现象减轻;与PHN组相比,L-Que组、M-Que组、H-Que组的PWT值、腺苷、AMP、ADP水平升高(P<0.05),TWL值、TNF-α、IL-1β水平、Iba1阳性小胶质细胞数量以及MIP-1α、CCR1、CCR5蛋白水平均降低(P<0.05),且Que作用效果呈剂量依赖性;与H-Que组相比,H-Que+MIP-1α组的PWT值、腺苷、AMP、ADP水平降低(P<0.05),TWL值、TNF-α、IL-1β水平、Iba1阳性小胶质细胞数量以及MIP-1α、CCR1、CCR5蛋白水平均升高(P<0.05)。结论 Que可能通过抑制MIP-1α/CCR1/CCR5信号通路减轻大鼠炎症反应,进而减轻PHN。

血清学指标在老年冠心病患者中的表达与冠状动脉病变程度的相关性

目的 探讨冠心病患者血清可溶性酪氨酸激酶1(sFlt-1)、趋化因子CC配体3(CCL3)水平与冠状动脉病变程度的相关性。方法 选取2020年11月至2022年11月新乡市中心医院心血管内科收治的老年冠心病患者230例(冠心病组),根据Gensini评分将冠心病组又分为轻度组89例,中度组95例和重度组46例,另选取同期本院健康体检者230例(对照组)。酶联免疫吸附检测血清sFlt-1、CCL3水平。ROC曲线分析血清sFlt-1、CCL3水平对冠心病的诊断价值。Pearson相关性分析血清sFlt-1、CCL3水平与冠状动脉病变程度的关系。结果 冠心病组血清sFlt-1、CCL3水平明显高于对照组[(121.71±29.80)ng/L vs(98.70±17.57)ng/L,(18.22±5.41)ng/L vs(13.68±3.89)ng/L,P<0.01]。ROC曲线分析显示,sFlt-1+CCL3联合诊断冠心病的曲线下面积明显大于sFlt-1、CCL3单独诊断(0.886 vs 0.791、0.775,P<0.01)。与轻度组比较,中度组及重度组血清sFlt-1、CCL3水平及Gensini评分明显升高,且重度组血清sFlt-1、CCL3水平及Gensini评分明显高于中度组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清sFlt-1、CCL3水平与Gensini评分呈正相关(r=0.420,r=0.479,P<0.01)。结论 冠心病患者血清sFlt-1、CCL3水平明显升高,且血清sFlt-1、CCL31水平与冠状动脉病变程度密切相关。

五味子苷B调控miR-370-3p/CCL3轴对幼年肺炎小鼠免疫炎症因子水平的影响

目的:探讨五味子苷B(Sch B)在幼年肺炎小鼠的作用机制。方法:将90只幼年雄性小鼠随机分为对照组、模型组、Sch B低剂量组(Sch BL组)、Sch B高剂量组(Sch BH组)、Sch BH+antagomir-NC组、Sch BH+miR-370-3p antagomir组各15只。Sch BL组和Sch BH组小鼠分别灌胃20、60 mg/kg的Sch B;Sch BH+antagomir-NC组和Sch BH+miR-370-3p antagomir组,先将1 nmol的miR-370-3p antagomir、antagomir-NC用20μL的磷酸盐缓冲液(PBS)溶解,在Sch B灌胃后将miR-370-3p antagomir、antagomir-NC质粒分别经尾静脉注射到小鼠体内;对照组和模型组给予等量生理盐水。每天1次,持续给药7 d。测定各组小鼠肺组织的湿干质量比;采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肺组织的病理形态;检测各组小鼠肺组织中炎症因子水平;流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群;实时定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肺组织中miR-370-3p和CCL3的mRNA水平;双荧光素酶实验验证miR-370-3p与CCL3的靶向关系。结果:与对照组相比,模型组幼鼠肺组织结构紊乱,肺泡壁变厚,出现大量炎性细胞浸润,组织受损严重,肺组织湿干质量比、CD8^(+)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、CCL3 mRNA水平均升高,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、miR-370-3p水平均降低(P均<0.05)。与模型组相比,Sch BL组和Sch BH组幼鼠肺组织中肺泡壁变薄,炎性细胞浸润明显减少,损伤减轻,肺组织湿干质量比、CD8^(+)、TNF-α、IL-6、CCL3 mRNA水平均降低,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、miR-370-3p水平均升高(P均<0.05)。加入miR-370-3p antagomir进行回补实验,结果显示Sch B对肺炎幼鼠免疫功能和炎症保护作用被逆转,且CCL3 mRNA水平升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验验证了miR-370-3p与CCL3存在靶向关系。结论:Sch B能够通过靶向调节miR-370-3p/CCL3轴来增强幼年肺炎小鼠免疫功能,并抑制炎症反应。

清瘟解热方对湿热证型病毒性肺炎大鼠肺损伤及CCL3/CCR5信号通路的作用

目的探讨清瘟解热方(以下简称QWJR)对湿热证型病毒性肺炎大鼠肺损伤及CCL3/CCR5信号通路的作用。方法将48只大鼠随机分为正常组、湿热模型组、阳性药物组(甲泼尼龙)、清瘟解热低剂量组(QWJR-L)、清瘟解热中剂量组(QWJR-M)、清瘟解热高剂量组(QWJR-H),每组8只,雌雄各半,正常组自然环境饲养,其余各组湿热外因+内因饲养14 d。14 d后,除正常组气管注射50μL PBS外,其余组均运用Poly(I:C)气管注射,建立湿热证型病毒性肺炎大鼠模型。造模2 h后,正常组和湿热模型组灌胃生理盐水,其余各组给予相应药物干预,连续给药3 d。收集样本后检测相关指标。(1)湿热证评价指标:大鼠症状、证候积分、体质量、血清总胆固醇(cholesterol,CHOL)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)含量、血常规;(2)肺泡毛细血管屏障变化、肺损伤情况:肺组织的干湿比、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)总细胞计数、BALF总蛋白浓度、HE染色观察大鼠肺组织病理变化;(3)趋化因子CCL3(CC chemokine Ligand 3,CCL3)/CC趋化因子受体-5(CC chemokine receptor 5,CCR5)通路及下游因子:qPCR法检测肺组织中CCL3、CCR5、磷脂酶C(phospholipase C,PLC)、蛋白激酶C(proteinkinase C,PKC)mRNA表达水平和Western-Blot法检测CCL3、CCR5、PLC、PKC蛋白表达水平。结果QWJR干预后大鼠大便黏滞或溏泄伴臭秽,肛门红肿污秽情况有所减轻,大鼠湿热证候积分降低,血脂CHOL、LDL-C水平降低(P<0.05);血常规中WBC及NE水平较模型组降低(P<0.05);QWJR-M组和QWJR-H组肺组织W/D值、BULF中总蛋白含量、总细胞数均降低,且以高剂量组治疗效果最显著(P<0.01),并有效改善大鼠肺组织病理损伤;与模型组相比,阳性药物组、QWJR-H组大鼠CCR5、PLC、PKC蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),CCL3、CCR5、PLC、PKC mRNA表达量降低(P<0.05,P<0.01)。结论QWJR可减轻湿热大鼠湿热症状,改善湿热证型病毒性肺炎大鼠肺部损伤情况,该作用可能是通过抑制CCL3/CCR5信号通路实现的。

CX_3NO(X=F、Cl)分子结构和稳定性的ab initio研究

本文用STO-3G基组对分子CF_3NO(1)、CF_2ClNO(2)、CFCI_2NO(3)和CCl_3NO(4)的各种可能存在的稳定构型进行了研究.结果表明:(1)卤素与氧在同侧的构型比其它构型稳定;(2)在同一分子中,Cl与O同侧比F与O同侧更为稳定;(3)分子从1至4稳定性下降.本文计算结果与实验符合较好。

CX_3NO_2(X=F,Cl)分子结构的稳定性

分子CF_3NO_2(1)、CF_2CINO_2(2)、CFCl_2NO_2(3)和CCl_3NO_2(4)在光化学和大气化学中是一类重要的分子。虽然它们的许多性质被广泛研究,但是从理论上尤其是ab initio分子轨道法对它们分子结构和化学键的研究报导极少。本文在ab initio/STO-3G水平上,全构型优化,系统地研究了这类分子的结构和各种构型的稳定性,并与实验以及CX_3NO(X=F,Cl)的结构进行了比较。计算采用Gaussian-82程序。在VAX-8350计算机上完成。结果和讨论分子各种稳定构型的键长、键角、Hartree-Fock能量、电荷密度及偶极矩列于表1至表3。

巨噬细胞炎性蛋白1α在小鼠深静脉血栓模型中的表达及其意义

目的建立小鼠下腔静脉深静脉血栓(DVT)模型,观察血栓形成后下腔静脉及血栓栓子中巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的表达及其与血栓栓子溶解的关系。方法 100只18～22g的昆明种小白鼠(雌雄不限)随机分为对照组(n=10)和模型组(n=90),模型组采用神经血管钳钳夹联合结扎下腔静脉建立小鼠DVT模型。建模后将模型组分为DVT组(小鼠不加任何干预,n=45)和DVT+MIP-1α-Ab组(小鼠予以MIP-1α中和抗体持续腹腔注射7d,n=45),于2、4、8、12、21d5个时间点各处死8只,质量/长度比值比较栓子溶解程度,应用SYBR?GreenⅠ核酸凝胶染液实时荧光定量PCR及ELISA检测股静脉组织中MIP-1αmRNA、蛋白的表达量。结果 DVT组1只小鼠因严重感染死亡;模型组小鼠均有血栓形成。DVT组及DVT+MIP-1α-Ab组栓子质量/长度比值随时间的延长呈逐渐缩小的趋势(P<0.05),相同时间点DVT组血栓栓子质量/长度比值减小更为明显(P<0.05);DVT组MIP-1αmRNA、蛋白随时间点的改变呈逐渐升高趋势,8d升至最高点(P<0.05),后呈逐渐下降趋势,DVT+MIP-1α-Ab组MIP-1αmRNA、蛋白表达亦呈上述趋势,但差异无统计学意义。相同时间点组间比较,DVT组MIP-1αmR-NA、蛋白变化较为明显(P<0.05)。结论 DVT形成后MIP-1α参与了血栓栓子的溶解过程,MIP-1α中和抗体可阻断其溶栓效应。

CCL3L1基因拷贝数目变异与慢性乙肝的易感性相关

目的:研究我国汉族人群CCL3L1基因拷贝数的分布,及其与非静脉吸毒者慢性乙肝的相关关系。方法:选1 477例慢性乙肝病人及1 023例健康人。用qPCR方法检测CCL3L1基因的拷贝数;用qPCR及ELISA方法分别检测CCL3L1基因拷贝数与其mRNA、蛋白质的定量关系,并用Transwell法分析了不同拷贝数目与其趋化效力的关系。用Pearson's卡方检验和Logistic回归方法检测CCL3L1基因拷贝数目变异与乙肝易感性的统计学相关性。结果:CCL3L1基因拷贝数目在我国汉族正常人为0-9(中位数=3),与其mRNA、蛋白质产物呈正相关,也与其趋化性呈正相关关系。低拷贝数目者比健康对照更易患乙肝(P<0.01)。结论:在中国汉族人群中,CCL3L1基因拷贝数目变异与乙型病毒性肝炎易感性存在显著相关,低拷贝数目者更容易患乙肝。

丹酚酸B、C组分配伍对肾纤维化炎症细胞趋化因子CCL2、CCL3的影响

目的研究丹酚酸B、C组分配伍对肾间质纤维化大鼠肾组织炎症细胞趋化因子CCL2、CCL3的作用及机制。方法50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、丹酚酸B组、丹酚酸C组、丹酚酸B和C按1∶1配伍组(简称丹酚酸B+C组)。除正常组外,其余各组均给予单侧输尿管结扎术(UUO)建立肾间质纤维化模型。各治疗组即给予相应药物灌胃治疗。第14天处死大鼠,光镜观察肾组织病理、胶原沉积,全自动生化分析仪检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN),Western Blot法检测肾组织单核细胞趋化蛋白-1(CCL2)和巨噬细胞炎症蛋白-3α(CCL3)蛋白表达。结果与模型组比较,各治疗组HE、Masson评分均显著降低,丹酚酸C组血清Cr水平降低明显,各治疗组CCL2、CCL3相对表达显著降低。结论丹酚酸B、C组分配伍可抑制肾组织CCL2和CCL3蛋白表达,从而改善UUO大鼠肾功能及肾脏病理,并对其肾脏起到一定的保护作用。

趋化性细胞因子CCL3L1基因拷贝数与HIV-1易感性研究

目的分析趋化性细胞因子CCL3L1基因拷贝数在中国汉族健康人和HIV-1感染者中的分布特点,以期阐明趋化性细胞因子CCL3L1基因拷贝数与HIV-1易感性的相关性。方法选择HIV/AIDS患者81例和健康者97例,实时定量PCR法检测趋化性细胞因子CCL3L1基因拷贝数。bDNA法检测HIV/AIDS患者的血浆病毒载量,同时用流式细胞仪检测外周血CD4+T细胞数量。结果中国汉族健康人群的CCL3L1平均基因拷贝数为1,应用logistic回归分析发现低于汉族健康人群平均拷贝数者有较高的易感性(OR值为0.501);应用spearman相关分析,HIV/AIDS人群CCL3L1基因拷贝数与病毒载量呈密切负相关性(P=0.000),HIV/AIDS人群CCL3L1基因拷贝数与CD4T细胞计数密切正相关(P=0.000)。结论趋化性细胞因子CCL3L1基因拷贝数与HIV-1易感性密切相关。

CCL3、CCL4下调表达和重症继发性肺结核病理损伤的关系

目的研究趋化因子CCL3和CCL4下调表达与重症继发性肺结核病理损伤的相关性。方法用基因表达谱芯片对5例重症、5例轻症继发性肺结核和5例健康对照进行差异基因的筛选;用实时荧光定量PCR测定20例重症、20例轻症,患者和8例健康对照外周血单个核细胞CCL3、CCL4相对表达量;酶联免疫吸附法测定20例重症、20例轻症和20例健康对照CCL3、CCL4在血浆中的蛋白表达量;用方差分析和非参数检验统计方法判断组间比较的统计学差异。结果芯片筛选重症与轻症组比较的差异基因显示CCL3、CCL4表达下调,下调比值分别为0.153 1和0.122 7。实时荧光定量PCR结果、酶联免疫吸附法均显示重症组与轻症组相比CCL3、CCL4表达下调(均P<0.05)。结论重症继发性肺结核患者CCL3、CCL4表达下调,可能是促进重症继发性肺结核肺结构破坏的因素之一。

中国健康人趋化性细胞因子CCL3L1的基因拷贝数及其与HIV-1易感性关系的初步研究

目的研究中国健康人群趋化性细胞因子配体蛋白CCL3L1(CC chemokine ligand 3-like-1)的拷贝数及其与HIV易感性的关系。方法收集全血标本,提取基因组DNA,应用Realtime PCR法分析其CCL3L1的相对拷贝数。首先选取22例健康人和23例HIV慢性感染者计算其CCL3L1拷贝数,分析我国健康人群CCL3L1平均拷贝数情况,并分析HIV感染和CCL3L1拷贝数的关系;选取男性同性恋早期感染HIV阳性者29例和HIV阴性者57例,分析CCL3L1基因拷贝数与HIV易感性的关系。结果我国人群CCL3L1平均拷贝数约为3;HIV慢性感染者与健康人无显著性差异(P=0.880);同性恋HIV阴性者CCL3L1拷贝数显著高于同性恋HIV阳性者(P=0.000)。结论我国健康人CCL3L1平均拷贝数为3,CCL3L1拷贝数与HIV易感性关系密切。

脓毒症大鼠巨噬细胞炎症蛋白-1α和血管内皮细胞变化及其相关性研究

目的探讨盲肠结扎穿孔脓毒症大鼠肺泡巨噬细胞(AM)和血管内皮细胞变化情况及其相关性。方法 60只SD大鼠随机分成A、B两组,A组仅行盲肠探查术,B组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制作大鼠脓毒症模型。各组均于术后3、6、12、24、48h时相点,分别留取肺泡灌洗液检测巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)水平,留取血清检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和E-选择素,并统计学分析肺泡灌洗液MIP-1α与血清TNF-α和E-选择素变化的相关性。结果①CLP术后3 h B组肺泡灌洗液MIP-1α和血清TNF-α、E-选择素即开始升高,明显高于A组,且逐步升高,到术后12 h达峰值,随后逐渐下降,但在48 h时点仍然显著高于A组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。②B组肺泡灌洗液MIP-1α与血清TNF-α和E-选择素变化分别呈显著正相关。结论 CLP脓毒症致急性肺损伤(ALI)后,AM的变化可以通过E-选择素影响肺血管内皮细胞变化,AM聚集与血管内皮细胞损伤在脓毒症致ALI过程中发挥重要作用。

江西人群CCL3L1基因拷贝数与HIV感染相关性研究

目的研究江西省HIV/AIDS(艾滋病感染者/艾滋病病人)人群趋化性细胞因子配体蛋白CCL3L1(CC chemokine ligand 3-like-1)的拷贝数及其与HIV病毒(艾滋病病毒)易感性及艾滋病进展的关系。方法收集192例HIV/AIDS和131例阳性者配偶阴性血样标本,提取基因组DNA,应用PRT(the Paralogue Ratio Test)法检测其CCL3L1基因拷贝数,计算江西省人群CCL3L1基因拷贝数中位数,用SPPS统计软件分析CCL3L1拷贝数与HIV感染的关系。结果江西人群CCL3L1基因拷贝数中位数为2;HIV慢性感染者与健康人无显著性差异(P>0.05);第一次CD4淋巴细胞数与基因拷贝数的变化有显著相关(P<0.05)。结论江西人群的CCL3L1基因拷贝数与HIV易感性无相关性,与感染进程有一定相关性。

CC趋化因子受体5在滤泡状甲状腺癌中的表达

目的:研究CC趋化因子受体5(CCR5)在滤泡状甲状腺癌中的表达,并检测血清中CCR5配体的含量,为进一步探讨CCR5在滤泡状甲状腺癌演进和转移中的作用奠定基础。方法:采用免疫组化方法检测15例滤泡状甲状腺癌患者以及17例甲状腺腺瘤患者,12例癌旁甲状腺组织中CCR5的表达情况,同时应用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血清中CCL3、CCL4、CCL5的浓度。结果:滤泡状甲状腺癌组织中,CCR5表达阳性率(11/15)明显高于甲状腺腺瘤和正常甲状腺组织(P<0.01)。滤泡状甲状腺癌患者血清中CCL3、CCL5的浓度显著高于对照组(P<0.05)。结论:滤泡状甲状腺癌组织中存在着CCR5高表达,且外周血CCL3,CCL5浓度明显升高,提示CCR5可能在滤泡状甲状腺癌发病进程中发挥着重要的作用。

绝经后骨质疏松病人CCL3和IGFBP-3表达与骨密度的相关性

目的研究血清趋化因子配体3(CCL3)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)表达与绝经后骨质疏松病人股骨颈和腰椎骨密度(BMD)的相关性。方法以我院2017年1月—2021年1月诊断并治疗的绝经期骨质疏松病人120例为观察组,根据BMD检测结果分为骨量减少组59例、轻度骨质疏松组33例、重度骨质疏松组28例,另选取同期进行健康体检的绝经期非骨质疏松妇女为对照组,比较两组以及不同严重程度骨质疏松病人的血清CCL3、IGFBP-3表达及股骨颈和腰椎BMD的差异,并分析其相关性。结果观察组CCL3表达显著高于对照组,IGFBP-3表达和腰椎、左股骨颈及右股骨颈BMD水平均显著低于对照组(t=6.341~72.377,P<0.001)。不同程度骨质疏松病人血清CCL3与IGFBP-3表达以及腰椎、左股骨颈和右股骨颈BMD水平比较,差异有统计学意义(F=7.288~26.761,P<0.001)。随着病程进展,血清CCL3表达显著升高,IGFBP-3表达以及腰椎、左股骨颈和右股骨颈BMD显著降低。<60岁组血清CCL3表达显著低于≥60岁组,IGFBP-3表达显著高于≥60岁组,差异具有统计学意义(t=4.935、11.623,P<0.001)。骨质疏松病人CCL3表达与腰椎、左股骨颈和右股骨颈BMD均呈负相关(r=-0.647~-0.339,P<0.001),而IGFBP-3表达则与其均呈正相关(r=0.552~0.851,P<0.001)。结论血清CCL3、IGFBP-3表达与绝经后骨质疏松病人股骨颈和腰椎BMD有相关性。

巨噬细胞炎性蛋白-1α在小鼠病毒性心肌炎中的表达

目的探讨病毒性心肌炎(VMC)小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的动态变化和作用。方法 120只雄性4周龄BALB/c小鼠随机分为VMC组80只,对照组40只。VMC组小鼠腹腔接种柯萨奇B3病毒建立VMC模型,对照组接种不含病毒DMEM液。接种后第3、7、15、30天每组各取10只处死,留取心脏标本,用免疫组织化学技术检测心肌MIP-1α蛋白表达水平,HE染色检查心脏病理变化,分析MIP-1α水平与心肌病变程度的相关性。结果 VMC组小鼠接种病毒后第3天心肌组织MIP-1α蛋白表达水平开始升高,第7天达高峰,此后逐渐下降,至第30天仍维持在较高水平。在各时间点,VMC组小鼠的MIP-1α水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且与心肌病理学积分呈显著正相关(r=0.94,P<0.01)。结论 MIP-1α过度表达可能在VMC的发病机制中起重要作用。

谷胱甘肽-S-转移酶人趋化因子CCL3L1的表达

目的克隆人趋化因子CCL3L1基因,表达并初步纯化谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-CCL3L1融合蛋白。方法从乳腺癌细胞MCF7中提取总RNA,采用RT-PCR扩增CCL3L1cDNA基因,克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-1中,重组载体经酶切和测序鉴定后,在BL21大肠杆菌中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-CCL3L1融合蛋白,采用SDS-PAGE和Westernblotting分析表达产物。结果经测序、酶切鉴定证明CCL3L1基因已正确插入到pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为34000的新生GST-CCL3L1融合蛋白。结论GST-CCL3L1融合蛋白可被成功表达。

CCL3和CCL4基因多态性与肺结核易感性的关系

目的探讨趋化因子CCL3基因位点2021C/T和CCL4基因位点5725A/C的多态性与肺结核(TB)易感性的关系。方法选择78例TB患者(结核组)和97例体检健康者(对照组),应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)对两组CCL3-2021C/T和CCL4-5725A/C多态性进行基因分型。结果结核组CCL3-2021C/T的CC、CT、TT基因型频率分别为2.5%、15.4%、82.1%,对照组分别为0、18.6%、81.4%,P均>0.05;结核组C等位基因频率为10.2%、T等位基因频率为89.8%,对照组分别为9.3%、90.7%,P均>0.05。结核组CCL4-5725A/C的AA、AC、CC基因型频率分别为7.7%、30.8%、61.5%,对照组分别为5.2%、27.8%、67.0%,P均>0.05;结核组A等位基因频率为23.1%、C等位基因频率为76.9%,对照组分别为19.1%、80.9%,P均>0.05。结论 CCL3-2021C/T和CCL4-5725A/C多态性与TB易感性不相关。

抵抗素刺激软骨细胞趋化因子CCL3及CCL4基因表达及机制

背景:既往研究表明抵抗素可刺激软骨细胞产生大量趋化因子,在炎症性关节病变中具重要作用,但具体作用机制未明。目的:进一步探讨抵抗素刺激软骨细胞趋化因子CCL3及CCL4基因表达上调的机制。方法:培养人源性软骨细胞,T/C-28a2细胞及ATDC5细胞,采用q PCR检测抵抗素刺激趋化因子基因的作用,C/EBPβ表达,核因子κB亚型及软骨特异性mi RNAs。给予核因子κB抑制剂(IKK-NBD)和C/EBPβ抑制剂(SB303580),对C/EBPβ及核因子κB的共同调节作用进行检测。在给予抵抗素刺激或无抵抗素刺激时分别进行亚细胞结构定位检测。结果与结论:1抵抗素可非依赖性上调趋化因子基因表达。2软骨细胞对抵抗素刺激应答具有非严格细胞特异性,通过C/EBPβ抑制剂、核因子κB及一些软骨细胞特异性mi RNAs,可对趋化因子基因表达进行联合调控。3一过性核因子κB活性增高可增强C/EBPβ活性,且两个转录因子对趋化因子基因CCL3及CCL4的作用均为非依赖性。