广西地区汉族人群CD14基因启动子C-260T多态性研究

目的:研究CD14基因启动子C-260T多态性各等位基因及基因型在广西地区汉族人群中的分布频率,比较其在不同种族间分布的差异。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测208例汉族人的CD14基因型,并结合文献对不同种族间的CD14基因型和等位基因的分布频率进行比较分析。结果:在广西汉族人群中CC、CT和TT基因型频率分别为32.2%、46.6%和21.2%;等位基因C、T频率分别为55.5%和44.5%。与捷克人比较,CD14基因多态性存在显著性差异。结论:在广西地区汉族人群中存在CD14基因多态性,其在不同种族间的分布可能存在显著性差异,这种差异可能是导致一些疾病在不同种族间的发病率和临床表现存在显著不同的因素之一。

鼠抗人CD14单链抗体ScFv2F9原核表达载体的构建和表达

目的:构建ZCH-7-2F9(简称2F9)单链抗体(ScFv2F9)原核表达载体,获得活性目的蛋白,为2F9免疫毒素及其它类型的基因工程抗体的研究奠定基础。方法:根据VH2F9、VL2F9、(G4S)3基因序列以及pIVEX2.3-MCS空载体多克隆位点内切酶位点NdeI和SmaI的核酸序列设计引物,采用高保真的Taq酶,通过重叠延伸拚接法(splicing by overlap extension,SOE)扩增克隆到ScFv2F9基因,T-A克隆、测序核实后克隆到pIVEX2.3-MCS空载体中,阳性重组质粒转化大肠杆菌菌株E.coli BL21star(DE3)plysS,IPTG诱导目的蛋白表达,镍树脂纯化后体外复性浓缩,流式细胞术观察其识别和结合CD14的能力。结果:成功构建ScFv2F9的原核表达载体pIVEX2.3-MCS/ScFv2F9;对大肠杆菌的包涵体进行纯化复性,其复性率为32.6%;通过流式细胞术观察到复性ScFv2F9对亲本单抗2F9-FITC有部分的阻滞效果,复性ScFv2F9阻滞1次后阳性细胞百分数、平均荧光强度(MFI)和高峰频道(peakCh)分别下降了11.73%、11.96%和31.57%,阻滞2次后分别下降了26.44%、21.75%和42.11%。结论:ScFv2F9在原核细胞中获得成功表达,复性后目的蛋白对人CD14有一定的识别和结合能力,为2F9单抗的进一步改造打下了坚实的基础。

表达小鼠CD1_D基因的重组逆转录病毒载体的构建及鉴定

目的构建表达小鼠CD 1D基因的重组逆转录病毒载体并加以酶切鉴定。方法提取小鼠脾总RNA进行RT-PCR反应获基因,酶切真核表达载体得到目的基因,定向克隆连接到逆转录病毒载体上,得到重组逆转录病毒载体,使用酶切方法加以鉴定。结果酶切所得片段与所需相符,经测序证明为所需载体。结论获得重组的逆转录病毒载体,为今后进一步的研究奠定基础。

小鼠B7-2基因的克隆、测序及其重组质粒的构建

目的 :克隆小鼠 B7- 2基因编码区的 c DNA序列 ,并构建其表达载体。方法 :利用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法 ,以小鼠脾细胞 m RNA为模板 ,扩增获得 B7- 2基因 ,与 p MD- 1 8T连接做全自动测序 ,并利用基因重组技术构建包含 B7- 2基因的表达质粒 pc DNA3.1 - CMV- B7- 2及 pc DNA3.1 - Egr- B7- 2。结果 :经测序证实获得的 B7- 2基因与文献报道的基本一致 ,并成功地构建了表达质粒。结论 :成功克隆了 B7- 2的编码基因 ,并成功构建了表达载体 pc DNA3.1 - CMV- B7- 2及 pc DNA3.1 - Egr- B7-

记忆T细胞在行放射治疗的非小细胞肺癌患者中的表达及其预后预测价值

目的:分析记忆T细胞在行放射治疗的非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达及其对预后的预测价值。方法:收集2010年2月至2012年5月浙江省宁波市医疗中心李惠利医院共46例接受放射治疗的NSCLC患者和50名健康体检者。应用流式细胞术检测外周血CD4^+、CD8^+的中央型记忆T细胞(T_(CM))和效应型记忆T细胞(T_(EM))的表达。采用多因素Cox回归模型分析患者临床特征及记忆T细胞变化与总生存时间的相关性,并采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。结果:NSCLC患者放射治疗前外周血CD4^+T_(CM)、CD4^+T_(EM)、CD8^+T_(CM)和CD4^+/CD8^+T_(EM)比值较健康对照组低,CD4^+/CD8^+T_(CM)比值较健康对照组高(均P<0.05);放射治疗4周时,NSCLC患者外周血CD4^+T_(CM)、CD4^+T_(EM)、CD8^+T_(CM)和CD4^+/CD8^+T_(EM)比值较放射治疗前明显降低(均P<0.05),而CD8^+T_(EM)和CD4^+/CD8^+T_(CM)比值较放射治疗前升高(均P<0.05);放射治疗12周时,NSCLC患者外周血CD4^+T_(CM)、CD4^+T_(EM)和CD8^+T_(CM)较放射治疗4周时升高(均P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,放射治疗后CD4^+T_(CM)的变化趋势与NSCLC患者的总生存时间有相关性(95%CI:1.135~2.994,P<0.01)。放射治疗后CD4^+T_(CM)呈下降趋势者的存活率为23.1%,总生存时间为10.7个月(95%CI:0.29~12.41);CD4^+T_(CM)保持稳定者的存活率为52.7%,总生存时间为27.4个月(95%CI:0.00~31.26);CD4^+T_(CM)上升者的存活率为66.4%,总生存时间为37.4个月(95%CI:0.33~29.21)。结论:NSCLC患者放射治疗后初期表现出明显的免疫抑制,之后有逐渐改善的趋势。放射治疗后记忆T细胞的变化趋势对患者的预后有一定的预测价值。

鼻咽癌患者外周血调节性T细胞变化

目的探讨鼻咽癌(NPC)患者外周血调节性T(Tr)细胞比例变化的特点及其与临床分期的关系和意义。方法采用流式细胞技术检测56例NPC患者治疗前后和14例健康对照者外周血中T细胞亚群和CD4+CD25+Tr细胞的比例。结果 NPC患者治疗前CD3、CD4降低,CD4+CD25+Tr细胞比例增高(P<0.05),中晚期患者CD3、CD4低于早期患者和健康对照组,而CD4+CD25+Tr细胞则显著高于该两组(P<0.05);54例治疗后患者CD3、CD8和CD4+CD25+Tr细胞比例较治疗前降低(P<0.05),而中晚期患者CD4+CD25+Tr细胞比例有降低的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NPC患者存在免疫抑制,治疗后免疫抑制程度降低;免疫状态的呈现是多因素综合作用的结果,免疫抑制仅仅是免疫功能异常的一个表现。

CD4^＋T细胞亚群在狼疮肾炎中的免疫病理作用研究进展

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）是一种具有多种临床表现的系统性自身免疫疾病,针对不同的自身抗原,患者体内产生致病性的自身抗体,如ds-DNA、ANA等.

CD83分子与肿瘤相关性研究进展

CD83分子是成熟树突细胞（DC）发挥其激发免疫应答作用极其重要的功能性分子.CD83可活化DC,同时为初始T细胞和记忆性T细胞提供共刺激信号[1].可溶性CD83分子（sCD83）具有免疫抑制作用,可由特定类型的恶性肿瘤细胞释放,目前发现其与血液恶性肿瘤疾病有密切关系.笔者对CD83分子与多个系统肿瘤的关系及其可能机制综述如下。

传染性单核细胞增多症患儿CD3^＋CD4^-CD8^-T细胞与T淋巴细胞亚群变化情况及临床意义

目的 研究传染性单核细胞增多症（IM）患儿外周血CD3^＋CD4^-CD8^-T细胞（DNT细胞）及T淋巴细胞亚群变化及其临床意义.方法 采用免疫荧光流式细胞技术检测了48例IM患儿及40例正常儿童外周血DNT细胞与T淋巴细胞亚群CD3^＋T细胞、CD3^＋CD4^＋T细胞及CD3＋CD8＋T细胞水平.结果 IM患儿DNT细胞百分比（9.39±4.89）%高于正常对照组（4.26±1.68）%（P＜0.01）,CD3^＋CD4^＋T细胞百分比（21.45±9.87）%明显低于对照组（32.43±5.07）%（P＜0.01）;而CD3＋T细胞及CD3＋CD8＋T细胞百分比均明显高于对照组（P＜0.01）.结论 IM患儿DNT细胞升高及T淋巴细胞亚群比例改变,提示IM患儿存在免疫功能异常,为IM患儿临床免疫治疗提供理论依据.

Castleman′s病患者的CD4^+CD25^+调节性T细胞的研究

目的:探讨Castleman′s病患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其与疾病的关系。方法:用流式细胞术对14例Castleman′s病患者及30例正常对照的外周血中CD4+CD25lowT细胞、CD4+CD25highT细胞、CD4+CD25highFOXP3+T细胞的比例进行检测。结果:局灶型Castleman′s病患者外周血中CD4+CD25lowT细胞、CD4+CD25highT细胞和CD4+CD25highFOXP3+T细胞比例在治疗前分别为(4.55±0.53)%、(0.73±0.09)%、(0.64±0.09)%;治疗后分别为(4.88±0.24)%、(1.0±0.10)%、(0.93±0.10)%,均低于正常对照组。治疗后这3种T细胞的比例较治疗前有显著升高(P<0.05)。多中心型患者外周血中这3种T细胞比例在治疗前分别为(9.43±0.81)%、(2.79±0.17)%、(2.46±0.09)%;治疗后(8.82±1.01)%、(2.71±0.10)%、(2.23±0.10)%,均高于正常对照组。结论:CD4+CD25+调节性T细胞在局灶型和多中心型Castleman′s病中的变化是不同的,这种不同的变化可能和这两型的临床表现和预后不同有关。

Th17／IL-23免疫轴与克罗恩病疾病活动性的临床研究

目的探讨Th17细胞／IL-23免疫轴相关细胞因子与克罗恩病（CD）疾病活动性的关系。方法对本院确诊克罗恩病55例（观察组，其中缓解期13例，中度活动期31例，重度活动期11例）及10例正常肠黏膜组织作对照，采用免疫组化ABC法测定其组织中IL-17、IL-23P19、ROR-γt的蛋白表达，比较各组的表达意义。结果IL-17在正常组和缓解期组低表达，两组比较差异无统计学意义（P〉0．05），而在中度活动期组及重度活动期组表达依次增加，备组比较差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；IL-23P19在缓解期组、中度活动性组、重度活动期组表达依次增加，各组比较差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；ROR-γt在缓解期组、中度活动期组、重度活动期组表达依次增加，各组比较差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论Th17细胞／IL-23免疫轴参与了克罗恩病肠黏膜的免疫损伤，其细胞因子在肠黏膜组织表达水平的高低与疾病的严重程度有关。

进展期胃癌血清CD4＋T细胞、CD8＋T细胞亚群检测的临床价值

目的 探讨进展期胃癌（AGC）血清CD4＋T细胞、CD8＋T细胞亚群检测的临床价值.方法 采用流式细胞术检测20例AGC患者（AGC患者组）和20例健康成人（健康对照组）血清CD4＋T细胞、CD8＋T细胞亚群水平并比较其差异;检测AGC患者组患者手术治疗前后血清CD4＋T细胞、CD8＋T细胞亚群水平并比较其差异.结果 AGC患者组较健康对照组受试者血清CD4＋T细胞水平降低而CD8＋T细胞水平升高,AGC患者组手术治疗后CD4＋T细胞水平升高而CD8＋T细胞水平降低,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 血清CD4＋T细胞、CD8＋T细胞亚群检测有助于评估AGC患者机体的免疫状态,对AGC的病情监测具有一定的临床价值.

腰-硬联合阻滞分娩镇痛对产妇外周血CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋细胞的影响

目的观察腰．硬联合阻滞（CSEA）分娩疼痛时对产妇外周血CD3^＋、CIM^＋、CI）8^＋细胞的影响。方法50例足月产妇随机分为2组，镇痛组（A组）和对照组（C组）各25例。A组行CSEA分娩镇痛，选L3-4间隙为穿刺点，腰麻用药为20μg芬太尼，硬膜外用药为0．1％罗哌卡因＋2μg／ml芬太尼；C组不做镇痛处理。两组产妇在宫口开大2-3cm（T1），胎儿娩出时（T2）、分娩后24h（T1）采血，用放免法检测皮质醇，流式细胞仪法检测T细胞亚群CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋，并分别记录产程、新生儿Apgar评分以及疼痛视觉模拟评分（VAS）。结果（1）与C组比较，A组第一产程活跃期明显缩短[（177．64±67．98）minVS（219．40±67．37）min，t=2．812，P〈0．05]而第二、三产程、新生儿Apgar评分比较差异无统计学意义[A组：（32．92±11．59）min，（7．56±2．47）min，9．204-0．82；C组：（31．44±13．93）min，（7．28±2．25）min，8．84±1．31]（P〉0．05）。（2）皮质醇浓度在T2时点A组[（548．11±75．67）ng／m1]明显低于c组[（789．32±96．07）ng／m1]（P〈0．05）。（3）两组母血CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋／CD8’在各时点均有不同程度降低，而且在L时点A组和C组均降低显著（P〈0．05），C组[分别为（48．43±6．46）％，（31．35±8．93）％，（0．96±0．21）％]明显低于A组[分别为（52．38±5．62）％，（36．90±7．91）％，（1．16±0．25）％]（P〈0．05）。结论CSEA分娩镇痛可缩短第一产程活跃期，对新生儿Apgar评分无明显影响，能够减轻疼痛等应激反应对产妇免疫功能的抑制。

CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞在初发酮症倾向2型糖尿病中的表达及意义

目的 测定初发酮症倾向2型糖尿病患者外周血CD4^＋ CD25^＋ FoxP3^＋调节性T细胞（Treg）水平并探讨其意义.方法 新人院、发病时间≤6个月的酮症倾向2型糖尿病患者（KPDM组）,年龄、性别匹配的非酮症2型糖尿病患者（T2DM组）和健康对照者（NC组）,使用流式细胞仪测定外周血CD4^＋ CD25^＋ FoxP3^＋调节性T细胞（Treg）在CD4^＋T淋巴细胞所占比例.结果 与NC组相比,KPDM组和T2DM组Treg比例明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）.KPDM组Treg比例高于T2DM组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 Treg细胞数量减少可能参与酮症倾向2型糖尿病的发生发展,其更倾向于一类有别于2型糖尿病的特殊类型糖尿病。

脑电图和癫（癎）患者血清细胞因子及免疫细胞异常的关系研究

目的 探究脑电图和癫（癎）患者血清因子及免疫细胞异常的关系.方法 选取80例癫（癎）患者作为实验组,选取同期健康体检者80例为对照组.探究患者发病1、24 h后的CD4、CD8、CD4/CD8、脑电图异常人数、TNF-α、IL-2的水平.结果 实验组患者发病1、24 h后的CD4、CD8、CD4/CD8、脑电图异常人数、TNF-α、IL-2与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.癫（癎）患者中,脑电图异常患者中CD4、CD8和CD4/CD8水平比脑电图正常患者低,FNF-α、IL-2水平较脑电图正常患者高,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 TNF-α、IL-2细胞因子和CD4、CD8 T淋巴细胞对癫（癎）病情有重要影响,表明癫（癎）时患者免疫功能异常.脑电图改变与TNF-α、IL-2细胞因子和CD4、CD8 T淋巴细胞水平有关。

mB7-1-GPI融合蛋白锚定Lewis细胞疫苗的制备及抗肿瘤作用

下载PDF阅读器目的 将mB7-1-GPI融合蛋白锚定于小鼠肺癌细胞株（Lewis）膜上,制备肿瘤细胞疫苗,研究该瘤苗的抗肿瘤作用.方法 将mB7-1-GPI融合蛋白锚定于小鼠肺癌细胞（Lewis）膜上,制备肿瘤细胞疫苗.采用流式细胞术检测该蛋白的细胞膜锚定作用.建立C57BL小鼠的肺癌模型,观察用mB7-1-GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用.结果 mB7-1-GPI与Lewis瘤细胞共同孵育4 h后4℃放置0、4 h和8 h,样本的荧光强度分别为11.2、10.6和9.8,阳性细胞数百分率分别为95.8%、93.6%、91.1%.脾细胞＋Lewis组IL-2和IFN-γ分泌量分别为（25.9±1.4）pg/ml、（56.0±3.5）pg/ml,脾细胞＋Lewis/mB7-1-GPI组IL-2和IFN-γ分泌量分别为（871. 3±10.4）pg/ml和（1329.0±11.9）pg/ml,25 d时,Lewis/mB7-1-GPI瘤苗组小鼠的肿瘤直径（1.4±0.21）cm较Lewis瘤苗治疗组小（2.5±0.27）cm,差异有统计学意义（P＜0.05）.Lewis/mB7-1-GPI瘤苗组小鼠寿命为（75.2±2.0）d,与Lewis瘤苗组（40.2±1.3）d相比,生存期延长,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 mB7-1-GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用,有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防.