CD基因转移及与放射联合对宫颈癌细胞株作用的体外实验研究

目的 研究胞嘧啶脱氨酶 (CD )基因转移联合 5 氟胞嘧啶 (5 Fc)在体外对人宫颈癌细胞株Hela生长的影响及放射增敏作用。方法 将CD基因转入Hela细胞 ,加入含 5 Fc的培养基 ,联合放射 ,采用MTT法和克隆形成试验分别比较单一CD/5 Fc体系及与放射治疗联合对该细胞生长的影响。结果 5 Fc能显著抑制转入了CD基因的Hela细胞的生长 ,并能通过旁观者效应杀死基因转移细胞周围未转入该基因的细胞。CD /5 Fc体系联合放射作用于Hela细胞 ,其生长抑制强度与单一治疗相比显著增强 ,两者的联合作用具有协同效应 (P <0 .0 5 )。结论 CD基因转移联合 5 Fc作用对Hela细胞具有显著的杀伤作用 ,对放射具有增敏作用。

乏氧和去血清通过诱导自噬拮抗KAI1诱导凋亡

目的：观察乏氧和缺血是否通过诱导自噬拮抗肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82（KAI1）的生长抑制作用。方法应用无KAI1表达的人胰腺癌细胞MiaPaCa2，通过感染带有KAI1目的基因的复制缺陷型腺病毒Ad5-KAI1使细胞表达KAI1蛋白，通过乏氧和去血清培养细胞模拟实体瘤内缺血、缺氧的微环境，根据培养条件不同，将人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2分为4组：对照组（正常培养）、乏氧组、去血清组、乏氧去血清组。Western blot检测细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的改变。3-MA预处理阻断自噬，共聚焦显微镜观察自噬标志颗粒GFP-LC3颗粒。采用Annexin V-FITC/PI实验检测细胞增殖和凋亡的变化。结果 MiaPaCa2细胞不表达KAI1蛋白，感染Ad5-KAI1后表达KAI1蛋白，乏氧和去血清均显著促进LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的增加和GFP-LC3融合质粒的增加，且均可被3-MA有效阻断。3-MA 预处理后感染Ad5-KAI1，4组细胞（含氧含血清正常培养的细胞、单纯去血清培养的细胞、单纯乏氧培养的细胞、联合去血清和乏氧培养的细胞）的Annexin V表达均显著增长，分别由70%、34%、28%和19%增至86%～90%。提示3-MA预处理可以阻断去血清和乏氧对KAI1引起的Annexin V表达增加的抑制作用。提示乏氧和去血清通过诱导自噬拮抗KAI1诱导的凋亡。结论乏氧和缺血清培养细胞通过诱导自噬拮抗KAI1诱导的凋亡，促进细胞生存。