电针调节CD8^(+)T细胞对帕金森病模型小鼠黑质区神经元损伤的保护机制研究

目的:观察早期电针干预对CD8^(+)T细胞浸润帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)及CD8^(+)T细胞相关细胞因子表达的影响,探讨早期电针对PD的神经元保护效应及机制。方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、电针组、左旋多巴组,每组15只;除空白组外,其余各组均腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)构建PD小鼠模型。造模成功电针组选取“足三里”“悬钟”进行干预14天,治疗结束后进行转棒、旷场测试,并观察黑质区TH表达及CD8^(+)T细胞表型标记物CD103^(+)T细胞、干扰素γ(IFNγ)蛋白及颗粒酶B(GzmB)蛋白的表达。结果:造模结束后,模型组小鼠毛色暗淡无光,精神萧瑟,活动减少,肌肉颤动,而电针组及左旋多巴组小鼠精神状态良好。与模型组相比,电针组及左旋多巴组小鼠掉棒潜伏时间延长(P<0.01),运动总距离延长且经过区域中心的速度改善(P<0.01),黑质区TH阳性表达增加(P<0.01),CD8^(+)CD103^(+)T细胞共定位表达率降低(P<0.01),IFNγ含量下调(P<0.05,P<0.01),GzmB表达下降(P<0.05,P<0.01)。结论:早期电针干预可以提高PD模型小鼠的运动能力,增加黑质区TH表达并改善神经元损伤,其机制与电针减少黑质区CD8^(+)CD103^(+)T细胞浸润,进一步抑制IFNγ、GzmB分泌,最终降低细胞毒性并提高机体免疫功能有关。

CD103^+CD8^+T细胞在结直肠癌组织中的浸润分布及其临床意义

目的:研究组织驻留CD8^+T细胞(CD103^+CD8^+T细胞)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中浸润程度及分布特征,分析其浸润程度与患者临床病理特征及预后的关系。方法:选用上海芯超生物科技有限公司的88例结肠癌HColA180Su14和77例直肠癌HRec-Ade180Sur-03组织芯片,应用免疫荧光染色法分别检测CRC组织及相应癌旁组织中CD103^+CD8^+T细胞的浸润分布特征及程度,Wilcoxon秩和检验比较CRC及癌旁组织中CD103^+CD8^+T细胞浸润程度,χ2检验分析CRC中CD103^+CD8^+T细胞浸润程度与患者临床病理特征的关系;Kaplan-Meier生存分析CD103^+CD8^+T细胞浸润程度与患者预后的关系,拟合Cox模型评价不同指标与患者预后的关系。结果:CRC组织中CD103^+CD8^+T细胞浸润程度与癌旁组织比较差异无统计学意义(P>0.05),有远处转移患者中CD103^+CD8^+T细胞高度浸润的比率显著低于无远处转移患者(P<0.01),CD103^+CD8^+T细胞浸润程度与患者其他临床病理特征无明显相关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,CD103^+CD8^+T细胞高度浸润患者的OS较低度浸润患者显著延长(54.42%vs 25.00%,P<0.05),多因素Cox显示,病理分级(P<0.01)和CD103^+CD8^+T细胞高度浸润(P<0.05)均可作为CRC患者预后的独立影响因素。结论:CRC组织中CD103^+CD8^+T细胞浸润与预后相关,提示其在CRC发生发展过程中发挥重要作用。

CD103^+T细胞在银屑病皮损中的表达

目的:明确银屑病患者皮肤CD103^+T细胞的表达及其与银屑病严重程度的关系。方法:免疫组化检测29例银屑病患者皮损和非皮损及6名健康对照皮肤中表皮及真皮CD103^+T细胞的表达。结果:CD103^+T细胞主要在真皮表达。银屑病患者皮损和非皮损真皮中每个高倍视野CD103^+T细胞百分率分别为(26.06±11.72)%和(12.82±4.50)%(P<0.05);健康人对照皮肤真皮内CD103^+T细胞百分率为(7.47±1.30)%,明显低于银屑病非皮损区(P<0.05)。银屑病患者皮损中,CD103^+T的表达与PASI值正相关(P<0.05)。结论:真皮中CD103^+T细胞可能与银屑病的发病及严重程度有关。

胃癌组织中驻留CD8^+T细胞的浸润程度及其意义

目的研究组织驻留CD8^+T细胞(CD103^+CD8^+T细胞)在胃癌组织中的浸润程度及分布特征,并分析其浸润程度与患者临床病理特征及预后的关系。方法采用组织芯片技术和免疫荧光染色法分别检测90例胃癌及相应癌旁正常组织中CD8^+T细胞及CD103^+CD8^+T细胞的浸润分布特征及程度,采用Wilcoxon秩和检验比较胃癌及癌旁正常组织中CD8^+T细胞、CD103^+CD8^+T细胞浸润程度及CD103^+CD8^+T细胞占CD8^+T细胞比率的差异,χ~2检验分析胃癌组织中CD8^+T细胞、CD103^+CD8^+T细胞浸润程度及CD103^+CD8^+T细胞占CD8^+T细胞比率与患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier生存分析法分析CD8^+T细胞、CD103^+CD8^+T细胞浸润程度及CD103^+CD8^+T细胞占CD8^+T细胞比率与患者预后的关系,拟合Cox模型评价不同指标与患者预后的关系。结果胃癌组织CD103^+CD8^+T细胞浸润程度与癌旁正常组织比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者中CD103^+CD8^+T细胞高度浸润的比率(69.09%,38/55)显著低于Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者(91.43%,32/35),差异有统计学意义(χ~2=6.175,P=0.013)。CD103^+CD8^+T细胞浸润程度与患者其他临床病理特征相关性无统计学意义(P>0.05)。Kaplan-Merier生存分析显示,CD103^+CD8^+T细胞高度浸润的患者总生存期较CD103^+CD8^+T细胞低度浸润的患者显著延长(HR=2.187,95%CI:1.062～4.500,P=0.033 6);多因素Cox比例风险模型显示,肿瘤直径(HR=2.031,95%CI:1.163～3.546,P=0.013)和CD103^+CD8^+T细胞浸润程度(HR=0.516,95%CI:0.285～0.934,P=0.029)均可作为胃癌患者的独立预后因素。结论 CD103^+CD8^+T细胞在胃癌组织中与良好预后有关,提示其在抑制胃癌发生发展过程中发挥重要作用,可作为胃癌患者预后评估的指标。

胰腺癌免疫微环境组织驻留CD103^(+)CD8^(+)T细胞浸润分布及其临床意义

目的探讨胰腺癌肿瘤免疫微环境中组织驻留CD103^(+)CD8^(+)T细胞的分布及浸润程度,分析其临床意义。方法应用多色免疫荧光染色检测胰腺癌组织芯片(HPanA120Su02,上海芯超生物科技有限公司)中CD103^(+)CD8^(+)T细胞的浸润程度及其临床相关性。共53例胰腺癌组织(2009-01-06-2013-08-07行手术治疗且经病理确诊的初诊胰腺癌患者)和54例癌旁正常组织纳入研究。通过组织芯片中PD-L1表达阳性比例,取Cutoff为10%,以PD-L1<10%为PD-L1低表达组,PD-L1≥10%为PD-L1高表达组,进一步分析不同亚组中的CD103^(+)CD8^(+)T细胞的浸润程度对预后的影响。结果胰腺癌组织中CD103^(+)CD8^(+)T细胞浸润程度〔20.9个/mm^(2)(4.8~46.3)〕较正常组织〔0.8个/mm^(2)(0~2.8)〕增高,差异有统计学意义,P<0.001。CD8^(+)T细胞中CD103^(+)CD8^(+)T所占比例为21.6%(10.5%~39.8%),较正常组织〔0.6%(0~3.1%)〕增高,P<0.001。PD-L1高表达组患者CD103^(+)CD8^(+)T细胞〔37.9个/mm^(2)(20.1~102.7)〕浸润程度较PD-L1低表达组患者〔8.5个/mm^(2)(3.1~26.8)〕增高,差异有统计学意义,P=0.014。CD8^(+)T和CD103^(+)CD8^(+)T细胞浸润程度均与PD-L1阳性表达水平呈正相关(r=0.354,P=0.009;r=0.555,P<0.001)。PD-L1高表达患者总生存(OS)差于PD-L1低表达患者(HR=2.154,95%CI为1.158~4.000,P=0.001)。CD8^(+)T和CD103^(+)CD8^(+)T细胞浸润程度高低均与OS无统计学意义的关联,均P>0.05。PD-L1高表达的患者较PD-L1低表达患者有更高的死亡风险(HR=2.732,95%CI为1.431~5.216,P=0.002)。多因素Cox分析显示,PD-L1表达水平可作为胰腺癌患者预后评估的独立风险因素(HR=4.066,95%CI为1.539~10.743,P=0.005)。PD-L1高表达+CD8^(+)T细胞高浸润组患者OS差于PD-L1低表达+CD8^(+)T细胞高浸润组(HR=6.429,95%CI为1.608~25.700,P=0.027)。PD-L1高表达+CD103^(+)CD8^(+)T细胞高浸润组患者OS差于PD-L1低表达+CD103^(+)CD8^(+)T细胞低浸润组(HR=1.600,95%CI为0.777~3.294,P=0.018)。结论CD103^(+)CD8^(+)T细胞在胰腺癌组织和PD-L1高表达患者中高度浸润,PD-L1高表达合并CD103^(+)CD8^(+)T细胞高度浸润患者对于免疫治疗可能具有更高的治疗反应率。

局部晚期口腔鳞状细胞癌新辅助化免联合治疗的疗效预测研究

目的探讨CD103+CD8+T细胞在经新辅助化免联合治疗(NACI)的局部晚期口腔鳞状细胞癌(LA-OSCC)患者中的表达水平和临床意义。方法分析2020年6月至2022年12月于中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科接受NACI的LA-OSCC患者30例,其中响应者16例(响应组),非响应者14例(非响应组)。利用多重免疫荧光技术对患者活检肿瘤组织切片染色,明确CD103+CD8+T细胞密度与NACI疗效的相关性。采用Inform、HALO软件统计肿瘤组织内CD103+CD8+T细胞的表达丰度,通过皮尔逊相关系数分析CD103+CD8+T细胞与4种肿瘤炎症标志物的相关性,包括中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、嗜中性白细胞与淋巴细胞比值(dNLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)及系统免疫炎症指数(SII)。应用多因素二元Logistic回归分析评估代表PD-L1表达水平的联合阳性评分(CPS)、CD103+CD8+T细胞丰度以及肿瘤炎症标志物NLR、dNLR、PLR、SII对患者NACI疗效的影响。采用受试者操作特征(ROC)曲线分析和决策曲线分析这些指标作为NACI疗效预测靶点的有效性。使用SPSS 22.0和GraphPad Prism 9.0软件进行统计分析及绘图。以双侧P<0.05为差异有统计学意义。结果NACI响应组的CD103+CD8+T细胞密度[118.30(41.92,197.80)个/mm2]显著高于非响应组[21.63(4.91,71.92)个/mm2](U=52.00,P=0.012)。ROC曲线分析显示,CD103+CD8+T细胞的预测效能[0.861(95%CI:0.585~0.950,P=0.013)]显著大于CPS的预测效能[0.734(95%CI:0.552~0.917,P=0.029)](P=0.037)。CD103+CD8+T细胞丰度与NLR、dNLR、PLR、SII均呈负相关(P<0.05)。NLR、dNLR、PLR、SII预测疗效的曲线下面积(AUC)分别为0.781、0.674、0.679及0.750。单独使用CD103+CD8+T细胞预测疗效的AUC为0.861,CD103+CD8+T细胞与NLR联合预测疗效的AUC为0.896(P=0.025,95%CI:0.454~0.938)。结论本研究发现LA-OSCC中,CD103+CD8+T细胞表达水平与患者NACI治疗响应程度呈正相关,而联合NLR可以对NACI疗效具有一定的预测作用。

直肠癌新辅助治疗对组织驻留细胞浸润的影响及意义

目的探究新辅助治疗对局部进展期直肠癌(LARC)患者肿瘤微环境中CD103^(+)CD8^(+)T细胞的影响。方法选取接受新辅助治疗的LARC患者58例和未接受新辅助治疗的LARC患者82例。利用免疫荧光染色对两组患者手术切除标本的石蜡切片进行抗CD103^(+)和CD8^(+)染色,使用卡方检验比较两组标本中CD103^(+)CD8^(+)T细胞的浸润情况、Spearman相关性分析探索新辅助治疗敏感性与CD103^(+)CD8^(+)T细胞浸润的关系。计数资料组间差异采用χ^(2)检验,相关性分析采用Spearman相关系数。结果实验组CD103^(+)CD8^(+)T细胞高浸润率高于对照组(58.62%比40.24%,χ^(2)=4.597,P<0.05)。两组患者CD103^(+)CD8^(+)T细胞浸润程度与T分期、临床分期、分化程度有关(P<0.05);与患者年龄、性别、淋巴结转移及肿瘤大小无关(P>0.05)。根据CD103^(+)CD8^(+)T细胞浸润程度,将实验组分为高低浸润组:高浸润组新辅助治疗的敏感率高于低浸润组(44.11%比12.50%,χ^(2)=6.571,P<0.05)。CD103^(+)CD8^(+)T细胞浸润程度与新辅助治疗敏感性呈正相关(rs=0.438,P<0.05)。结论CD103^(+)CD8^(+)T细胞高浸润的LARC患者对新辅助治疗更敏感,新辅助治疗可能部分通过提高LARC肿瘤微环境中CD103^(+)CD8^(+)T细胞的浸润进一步杀伤肿瘤细胞。