CD11c^+髓样树突状细胞在慢性乙型肝炎中频数与细胞表型的变化

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血中CD11c+髓样树突状细胞(mDC)相对数量和细胞表型的变化,以及与HBV持续感染之间的关系.方法:2007-03/2007-10瑞金医院感染科住院及门诊慢性乙型肝炎患者28例,另设健康对照组21例(均为本院职工).流式细胞分析技术检测受试者外周血mDC的百分比数.磁珠分选方法分离纯化mDC,流式细胞仪检测mDC表面共刺激分子CD80和CD86.结果:与健康对照组相比,慢性乙肝患者CD11c+mDC占外周血单个核细胞的频数明显降低,差异有统计学意义(0.38%±0.61% vs 0.77%±0.56%,P<0.05).慢性乙肝患者外周血mDC频数与血清ALT水平、病毒载量呈负相关(r=-0.374,-0.435,均P<0.05),患者组不同肝脏炎症程度mDC频数存在差异.新鲜分离的mDC表面共刺激分子CD80和CD86表达较低,但患者组CD86的表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义(45.26%±21.54% vs 18.71%±10.93%,P<0.05).结论:慢性乙型肝炎患者外周血CD11c+mDC亚群百分比降低,但mDC表面共刺激分子表达率并未严重受损,外周血中CD11c+mDC数量减少可能与血清病毒载量及肝脏炎症程度相关.

VEGF与CD11c^+ HLA-DR^+树突状细胞在OHSS发生中的相互作用

目的:研究卵巢过度刺激综合征(OHSS)患者卵泡液中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和CD11c^+HLADR^+树突状细胞(DCs)参与OHSS发生的可能机制。方法:对OHSS患者卵泡液中VEGF和DCs活化水平进行相关性分析;在体外用不同质量浓度(2. 0、1. 0、0. 5μg/L) VEGF刺激CD11c^+HLA-DR^+DCs 24 h后,分别采用qRTPCR和ELISA法检测细胞及上清液中相关细胞因子(IL-10、IL-12、IL-18、IL-23及TNF-α) mRNA和蛋白的表达情况。结果:OHSS患者卵泡液中VEGF和DCs活化水平均高于对照,且两者呈正相关(r=0. 801,P <0. 001)。与空白对照组相比,高、中浓度VEGF刺激后CD11c^+HLA-DR^+DCs中IL-12、IL-23和TNF-αmRNA表达增高(P <0. 05);不同质量浓度VEGF刺激后,CD11c^+HLA-DR^+DCs培养上清液中IL-10、IL-12、IL-23及TNF-α水平均水平明显升高(P <0. 05),高浓度VEGF刺激后细胞上清液中IL-18明显升高(P <0. 05)。结论:VEGF可能通过刺激CD11c^+HLA-DR^+DCs影响IL-12、IL-23和TNF-αmRNA的表达,加重卵泡液微环境中炎症的发生和免疫反应,从而参与OHSS的发生。

CD11c^+细胞特异性敲除TAK1对刀豆蛋白A诱导的免疫性肝损伤的影响

目的:探讨CD11c^+细胞中敲除TAK1对刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠免疫性肝损伤的影响。方法:采用体内CD11c^+细胞中特异性敲除TAK1的C57BL/6小鼠,经鼠尾静脉注射Con A(12mg/kg)或生理盐水,分别作为Con A敲除组和生理盐水敲除组。另选C57BL/6小鼠,鼠尾静脉注射Con A(12mg/kg)或生理盐水,作为Con A对照组和生理盐水对照组。给药6h之后测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;检测肝、肾、胸腺等脏器系数并进行肝组织病理学观察和评分;测定血清中免疫反应相关细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL-4/5/6/12)及肝组织中TNF-α和IFN-γ的表达水平。结果:与生理盐水对照组相比,Con A对照组ALT和LDH显著升高(P均<0.05),肝脏病理损伤明显加重,病理评分显著升高(P<0.05),血清中TNF-α、IFN-γ、IL-4/5/6水平和肝中TNF-α和IFN-γ均显著升高(P均<0.05);生理盐水敲除组肝中TNF-α水平显著降低(P<0.05)。与Con A对照组相比,Con A敲除组小鼠血清ALT、AST和LDH水平均显著升高(P<0.05),肝脏病理损伤明显加重,病理评分显著升高(P<0.05),肝组织IFN-γ水平,血清中TNF-α、IL-4和IL-6水平均显著升高(P均<0.05)。结论:在本实验条件下,CD11c^+细胞中敲除TAK1无明显肝损伤作用,但可加重Con A诱导的肝脏损伤,该作用可能与进一步激活免疫反应有关。

C57BL/6小鼠外周淋巴组织和肝脏中CD11c^(+)B220^(+)NK细胞分析

目的研究CD11c^(+)B220^(+)自然杀伤(NK)细胞在外周淋巴组织和肝脏中的分布及其表面浆细胞样树突状细胞抗原1(PDCA-1)分子的表达情况。方法采集C57BL/6小鼠脾脏、淋巴结和肝脏组织,制备单个核细胞悬液,通过多色流式细胞术检测3个组织器官中CD11c^(+)B220^(+)NK细胞的比例及其表面PDCA-1分子的表达情况。结果脾脏、淋巴结和肝脏均存在CD11c^(+)B220^(+)NK细胞,在脾脏中比例最高,达到(2.82±0.45)%。3个组织中均有部分CD11c^(+)B220^(+)NK细胞表达PDCA-1,脾脏最明显。结论CD11c^(+)B220^(+)NK细胞是小鼠外周淋巴组织和肝脏中NK细胞的重要亚群,因组织不同其表面PDCA-1表达存在差异。

mTSLPR-Ig调节CD11c^+细胞改善哮喘小鼠炎症反应

本研究探讨mTSLPR-Ig逆转哮喘小鼠Th1/Th2失衡以及改善哮喘气道炎症的可行性及其诱导哮喘免疫耐受的机制。实验包括用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发BALB/c小鼠,建立哮喘动物模型。于OVA激发前,将mTSLPR-Ig进行小鼠滴鼻灌注,光镜下对BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞、淋巴细胞进行计数;ELISA法检测BALF中细胞因子IL-4、IL-5、IFN-γ以及IL-10水平;HE组织染色法观察小鼠肺部炎症表现。分离小鼠肺脏并制备成细胞悬液,FCM检测肺脏CD11c+细胞表面共刺激分子CD80、CD86以及CD40的表达变化。结果表明,mTSLPR-Ig治疗组与哮喘组比较,BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞计数显著减少(P<0.01)、BALF中IL-4、IL-5水平均显著降低(P<0.01),而IL-10、IFN-γ显著升高(P<0.01);小鼠肺部炎症明显减轻。mTSLPR-Ig治疗组肺脏CD11 c+细胞表面分子CD80、CD86以及CD40较哮喘组显著降低。mTSLPR-Ig能显著抑制哮喘小鼠Th1/Th2失衡以及肺部变应性炎症,该效应可能与mTSLPR-Ig抑制肺脏CD11 c+细胞共刺激分子表达有关。mTSLPR-Ig对哮喘的治疗具有重要的潜在临床应用价值,为哮喘的治疗提供了可能的新途径。

Tfam基因敲除对树突状细胞基因表达的高通量RNA测序分析

目的:研究线粒体核转录因子Tfam对CD11c^(+)树突状细胞的基因表达的影响,为进一步探讨Tfam参与调控细胞免疫反应提供新的分子机制。方法:利用条件性基因敲除技术,进行打靶载体的设计和构建,基于Cre/loxP重组酶系统建立表达CD11c特异性敲除Tfam基因的小鼠模型。利用磁珠分选试剂盒分选小鼠脾脏的CD11c细胞,并通过流式细胞仪验证分选纯度(90%以上)。用Trizol法抽提CD11c^(+)树突状细胞的RNA,利用mRNA转录组测序检测CD11c^(+)树突状细胞的基因表达谱。通过生物信息学方法比较2组细胞间的显著差异表达基因(DEGs)。通过GO、KEGG富集分析差异表达蛋白质编码基因功能。结果:以Tfam^(fl/fl)小鼠脾脏组织分选的CD11c^(+)树突状细胞为对照组,2组小鼠共筛选出140个差异表达的基因,其中上调的基因有84个,下调的基因有56个。采用组间log_(2)FC≥0.585且P值≤0.05的基因筛选为DEGs,2组细胞共筛选出48个DEGs,其中28个DEGs表达上调,20个DEGs表达下调。GO分析富集到的DEGs与细胞杀伤的积极调节与免疫系统过程的调节等有关。DEGs的KEGG富集分析到的通路主要与恰加斯病、松弛素信号通路等通路有关。结论:Tfam基因敲除的CD11c^(+)树突状细胞DEGs主要富集在免疫系统过程的调节、免疫相关的反应、线粒体代谢、线粒体基因的表达等,为探讨Tfam调节CD11c^(+)树突状细胞免疫功能提供了相关的分子机制基础。

CCR2抑制剂延缓输尿管结扎小鼠肾纤维化

目的探究趋化因子受体2(CCR2)抑制剂(RS504393)在小鼠肾纤维化中的作用及其机制。方法将小鼠随机分为假手术组(sham组,单侧输尿管分离术)、UUO模型组(单侧输尿管结扎术)和给药组(UUO+RS504393,术前3天开始灌胃给予RS504393 25 mg/kg,早晚各1次,连续17 d);用Masson染色和HE染色观察肾脏纤维化程度和炎性细胞变化;流式细胞计量术分析各组小鼠肾脏CCR2及CD11b^+Ly6C^+单核细胞的比例。结果 UUO模型组肾间质炎性细胞数量较假手术组明显增多(P<0.05),给药组炎性细胞数量较模型组显著减少(P<0.05);UUO模型组肾脏胶原蛋白沉积面积较假手术组显著增加(P<0.05),给药组胶原沉积面积较模型组明显减少(P<0.05);UUO模型组肾脏CCR2比例较假手术组显著增多(P<0.05),给药组CCR2比例较模型组减少(P<0.05);UUO模型组肾间质CD11b^+Ly6C^+单核细胞群比例较假手术组明显增加(P<0.05),给药组CD11b^+Ly6C^+单核细胞群比例较模型组明显减少(P<0.05)。结论 CCR2抑制剂RS504393可减少CD11b^+Ly6C^+单核细胞浸润延缓肾脏纤维化。