HLA-DRB1^(*)11:01与HCV感染的病毒选择压力及与CD4+T细胞表位的关系探讨

目的我们前期研究显示,无论在汉族人群还是黎族人群中,HLA-DRB1^(*)11∶01均是与机体自发清除HCV相关联的HLA-Ⅱ类基因,因此,本研究的目的是探讨HLA-DRB1^(*)11∶01基因与HCV感染的病毒选择压力及与CD4+T细胞表位的关系。方法对广东地区常见的HCV 6a慢性感染者HLA-DRB1^(*)11∶01阳性组和阴性组的E1E2和NS3基因进行病毒选择压力以及病毒群体扩张的分析。采用覆盖我国常见HCV基因型保守区的CD4+T细胞表位的重叠肽段刺激HCV自发清除组和慢性感染组,通过ELISPT实验,根据每孔的斑点形成细胞数以及在不同组出现的频次评估HLA-DRB1^(*)11∶01基因与CD4+T细胞表位的关系。结果广东地区常见的HCV 6a感染者HLA-DRB1^(*)11∶01阴性组E1E2和NS3的阳性选择位点以及位于CD4+T细胞表位的位点数均大于HLA-DRB1^(*)11∶01阳性组;两组HCV 6a感染者在广东地区均具有群体扩张趋势,且HLA-DRB1^(*)11∶01阴性组的扩张趋势明显高于HLA-DRB1^(*)11∶01阳性组。HCV自发清除组对其中5条肽段(C-52 E2691-707、C-119 NS31545-1560、C-134 NS4A1669-1684、C-154 NS4B1912-1927和C-159 NS4B1929-1944)刺激的应答率较高,HCV慢性感染组对其中的2条肽段(C-111 NS31497-1512和C-130 NS31650-1665)刺激的应答率较高。当考虑HLA-DRB1^(*)11∶01分型时,在慢性感染组和自发清除组HLA-DRB1^(*)11∶01阳性和HLA-DRB1^(*)11∶01阴性PBMCs产生的HCV特异性免疫应答均无统计学差异。结论研究揭示了HLA-Ⅱ类基因HLA-DRB1^(*)11∶01与HCV感染的病毒选择压力及与CD4+T细胞表位的关系,同时,获得HCV泛基因型CD4+T细胞抗原候选表位,为研发适合HCV泛基因型的T细胞疫苗提供基础数据。

CD11c^+髓样树突状细胞在慢性乙型肝炎中频数与细胞表型的变化

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血中CD11c+髓样树突状细胞(mDC)相对数量和细胞表型的变化,以及与HBV持续感染之间的关系.方法:2007-03/2007-10瑞金医院感染科住院及门诊慢性乙型肝炎患者28例,另设健康对照组21例(均为本院职工).流式细胞分析技术检测受试者外周血mDC的百分比数.磁珠分选方法分离纯化mDC,流式细胞仪检测mDC表面共刺激分子CD80和CD86.结果:与健康对照组相比,慢性乙肝患者CD11c+mDC占外周血单个核细胞的频数明显降低,差异有统计学意义(0.38%±0.61% vs 0.77%±0.56%,P<0.05).慢性乙肝患者外周血mDC频数与血清ALT水平、病毒载量呈负相关(r=-0.374,-0.435,均P<0.05),患者组不同肝脏炎症程度mDC频数存在差异.新鲜分离的mDC表面共刺激分子CD80和CD86表达较低,但患者组CD86的表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义(45.26%±21.54% vs 18.71%±10.93%,P<0.05).结论:慢性乙型肝炎患者外周血CD11c+mDC亚群百分比降低,但mDC表面共刺激分子表达率并未严重受损,外周血中CD11c+mDC数量减少可能与血清病毒载量及肝脏炎症程度相关.

VEGF与CD11c^+ HLA-DR^+树突状细胞在OHSS发生中的相互作用

目的:研究卵巢过度刺激综合征(OHSS)患者卵泡液中血管内皮细胞生长因子(VEGF)和CD11c^+HLADR^+树突状细胞(DCs)参与OHSS发生的可能机制。方法:对OHSS患者卵泡液中VEGF和DCs活化水平进行相关性分析;在体外用不同质量浓度(2. 0、1. 0、0. 5μg/L) VEGF刺激CD11c^+HLA-DR^+DCs 24 h后,分别采用qRTPCR和ELISA法检测细胞及上清液中相关细胞因子(IL-10、IL-12、IL-18、IL-23及TNF-α) mRNA和蛋白的表达情况。结果:OHSS患者卵泡液中VEGF和DCs活化水平均高于对照,且两者呈正相关(r=0. 801,P <0. 001)。与空白对照组相比,高、中浓度VEGF刺激后CD11c^+HLA-DR^+DCs中IL-12、IL-23和TNF-αmRNA表达增高(P <0. 05);不同质量浓度VEGF刺激后,CD11c^+HLA-DR^+DCs培养上清液中IL-10、IL-12、IL-23及TNF-α水平均水平明显升高(P <0. 05),高浓度VEGF刺激后细胞上清液中IL-18明显升高(P <0. 05)。结论:VEGF可能通过刺激CD11c^+HLA-DR^+DCs影响IL-12、IL-23和TNF-αmRNA的表达,加重卵泡液微环境中炎症的发生和免疫反应,从而参与OHSS的发生。

枸杞多糖对H22荷瘤小鼠脾脏有核细胞CD11c^+、CD80^+表达的影响

目的观察枸杞多糖(LBP)对H22荷瘤小鼠脾脏有核细胞CD11c+、CD80+表达的影响。方法建立H22荷瘤小鼠模型,用LBP连续灌胃治疗两周后,小鼠脱颈处死,分离各组小鼠脾脏有核细胞,流式细胞仪检测CD11c+、CD80+的表达情况。结果肿瘤模型组及荷瘤LBP用药组,CD11c+、CD80+及双阳性细胞比例均较正常对照组升高,其中CD80+及双阳性细胞比例升高,差异具有显著性;双阳性细胞比例升高在荷瘤LBP高剂量组与肿瘤模型组间亦具有显著性差异。正常用药组与正常对照组比较,CD80+表达升高,差异具有显著性。结论LBP可以增强H22荷瘤小鼠脾脏中以DC细胞为主的抗原递呈细胞的功能,提示其抗肿瘤免疫作用机制可能与此有关。

原发性胆汁性肝硬化患者CD11c^+和CD123^+树突状细胞与肝功能损伤的关系

目的:检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血树交状细胞亚群CD11c+和CD123+, 探讨其与肝功能损伤及抗线粒体抗体亚型 2(AMA-M2)抗体产生的关系．方法:流式细胞术检测PBC患者(n=40)外周血树突状细胞亚群CD11c+和CD123+比例, 以40例肝脏疾病患者作为疾病对照组,30例健康体检者作为正常对照组,观察CD11c+和 CD123+树突状细胞与患者的肝功能指标及 AMA-M2抗体产生的关系．结果:PBC患者外周血CD11c+和CD123+比例显著低于正常对照组(0．087 2±0．008 2 vs 0．169 0±0．011 3,P<0．01;0．034 9±0．004 9 vs 0．064 3±0．005 4,P<0．01)．肝功严重损伤的 PBC患者外周血CD11c+及CD123+比例显著低于轻度损伤者(0．071 6±0．007 3 vs 0．124 2 ±0．0094,P<0．01;0．042 6±0．005 9 vs 0．061 7 ±0．006 1,P<0．01)．AMA-M2+患者外周血 CD11c+和CD123+比例显著低于AMA-M2- 患者(0．076 1±0．005 1 vs 0．096 5±0．008 3, P<0．05;0．046 6±0．006 9 vs 0．063 1±0．005 7, P<0．05)．经动态观察发现,同一PBC患者经过治疗后CD11c+和CD123+比例增加,特别是 CD123+明显高于治疗前(0．058 3±0．004 9 vs 0．032 1±0．004 1,P<0．01)．结论:PBC患者外周血树突状细胞亚群 CD11c+和CD123+比例与肝功能损伤和血清抗AMA-M2抗体产生有密切关系．CD11c+和 CD123+的变化可能是导致肝功能损伤和病情发展及血清抗AMA-M2抗体产生的环节之一．

系统性红斑狼疮患者树突状细胞CD11c^＋，CD123^＋亚群与疾病活动性的关系

目的探讨系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）患者外周血树突状细胞CD11c^＋，CD123^＋亚群与疾病活动性、肾脏损伤及血清抗ds—DNA抗体产生的关系。方法选定SLE疾病组51例、疾病对照组30例（类风湿关节炎、舍格伦综合征患者各15例）和正常对照组30例，采用流式细胞术检测上述指标。结果①SLE患者外周血树突状细胞CD11c^＋，CD123^＋亚群比例均显著低于正常对照组（P〈0．01），而疾病对照组与正常对照组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。②疾病活动期SLE患者外周血树突状细胞CD123^＋亚群比例显著高于稳定期患者（P〈0．01），而两者CD11c^＋亚群比例之间差异无统计学意义（P〉0．05）。③SLE肾病组外周血树突状细胞CD123^＋亚群比例显著高于非肾病组患者（P〈0．01），两者CD11c^＋亚群比例之间差异无统计学意义（P〉0．05）；ds—DNA^＋组SLE患者外周血树突状细胞CD11c^＋，CD123^＋亚群比例均显著低于ds—DNA^-组（P〈0．05）。结论树突状细胞CD11c^＋，CD123^＋亚群的变化可能是SLE发病机制中的关键环节之一。

CD11c^+DCs促K14-VEGF转基因小鼠银屑病样发病

目的研究CD11c^+DCs对银屑病的促进作用及机制。方法取K14-VEGF转基因小鼠皮损皮肤进行表型鉴定。将CD11c^+DCs注射入未发病的转基因小鼠颈部皮下,对小鼠进行PASI评分;组织学检测小鼠耳朵和颈背部皮肤;检测骨髓、血液、脾脏和颌下淋巴结处T淋巴细胞和DCs;免疫荧光法检测皮损中CD4、CD8、IL-17a、IFN-γ和CD31含量;HE染色方法观察小鼠心、肝、脾、肺和肾的变化。结果 K14-VEGF小鼠皮损中90%FLT3阳性细胞表达CD11c。实验组表皮层厚度均显著高于对照组(P<0.01)。血液中CD3^+CD4^+T淋巴细胞数降低(P<0.01);骨髓、血液、脾脏和颌下淋巴结中的Th1和Th17细胞减少;同时,骨髓和颌下淋巴结中的CD11c^+DCs减少(P<0.01);皮损皮肤中表达CD4^+T、CD8^+T、IL-17a^+和IFN-γ^+的细胞均增多(P<0.01),血管增多(P<0.01)。结论 CD11c^+DCs可通过促使K14-VEGF小鼠皮肤中T淋巴细胞及血管增多使该小鼠银屑病样病变提前发生,提示CD11c^+DCs可能在银屑病的发生发展中起重要作用。

CD11c^+细胞特异性敲除TAK1对刀豆蛋白A诱导的免疫性肝损伤的影响

目的:探讨CD11c^+细胞中敲除TAK1对刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠免疫性肝损伤的影响。方法:采用体内CD11c^+细胞中特异性敲除TAK1的C57BL/6小鼠,经鼠尾静脉注射Con A(12mg/kg)或生理盐水,分别作为Con A敲除组和生理盐水敲除组。另选C57BL/6小鼠,鼠尾静脉注射Con A(12mg/kg)或生理盐水,作为Con A对照组和生理盐水对照组。给药6h之后测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;检测肝、肾、胸腺等脏器系数并进行肝组织病理学观察和评分;测定血清中免疫反应相关细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL-4/5/6/12)及肝组织中TNF-α和IFN-γ的表达水平。结果:与生理盐水对照组相比,Con A对照组ALT和LDH显著升高(P均<0.05),肝脏病理损伤明显加重,病理评分显著升高(P<0.05),血清中TNF-α、IFN-γ、IL-4/5/6水平和肝中TNF-α和IFN-γ均显著升高(P均<0.05);生理盐水敲除组肝中TNF-α水平显著降低(P<0.05)。与Con A对照组相比,Con A敲除组小鼠血清ALT、AST和LDH水平均显著升高(P<0.05),肝脏病理损伤明显加重,病理评分显著升高(P<0.05),肝组织IFN-γ水平,血清中TNF-α、IL-4和IL-6水平均显著升高(P均<0.05)。结论:在本实验条件下,CD11c^+细胞中敲除TAK1无明显肝损伤作用,但可加重Con A诱导的肝脏损伤,该作用可能与进一步激活免疫反应有关。

肺腺癌浸润CD8^(+)T细胞表达CD39的机制

目的:探讨肿瘤浸润CD8^(+)T细胞表达CD39的可能机制。方法:通过TCGA数据库的肺腺癌(LUAD)组织及正常肺组织转录组数据分析CD39在LUAD组织和正常肺组织中的表达差异及其对患者预后的影响,分析CD39表达与T细胞浸润、激活的关系。用小鼠LUAD Lewis细胞建立小鼠皮下移植瘤模型,FCM检测淋巴结、脾脏以及移植瘤组织中CD8^(+)CD39^(+)T细胞。收集Lewis细胞培养上清液作为条件培养基(CCM),免疫磁珠法(MACS)分选CD8^(+)T细胞、CD11b^(+)细胞;在培养基中分别加入CCM、IL-6和采取非接触或接触培养方式进行培养,探索CD8^(+)T细胞表达CD39的可能机制。结果:CD39在LUAD组织中呈低表达(P<0.01),其表达水平与LUAD患者OS、T细胞浸润和激活水平均呈正相关(P<0.05或P<0.001)。FCM检测结果显示,在移植瘤组织中CD8^(+)CD39^(+)T细胞的比例明显高于淋巴结及脾脏(P<0.01);CCM及IL-6不能直接诱导CD8^(+)T细胞表达CD39,非接触共培养CD11b^(+)细胞与CD8^(+)T细胞也不能诱导CD8^(+)T细胞表达CD39,CD11b^(+)细胞与CD8^(+)T细胞直接接触共培养可诱导CD8^(+)T细胞表达CD39(P<0.01)。结论:CD11b^(+)细胞通过直接接触方式诱导肿瘤浸润CD8^(+)T细胞表达CD39,CD39可能是LUAD特异性CD8^(+)T细胞的分子标志。

C57BL/6小鼠外周淋巴组织和肝脏中CD11c^(+)B220^(+)NK细胞分析

目的研究CD11c^(+)B220^(+)自然杀伤(NK)细胞在外周淋巴组织和肝脏中的分布及其表面浆细胞样树突状细胞抗原1(PDCA-1)分子的表达情况。方法采集C57BL/6小鼠脾脏、淋巴结和肝脏组织,制备单个核细胞悬液,通过多色流式细胞术检测3个组织器官中CD11c^(+)B220^(+)NK细胞的比例及其表面PDCA-1分子的表达情况。结果脾脏、淋巴结和肝脏均存在CD11c^(+)B220^(+)NK细胞,在脾脏中比例最高,达到(2.82±0.45)%。3个组织中均有部分CD11c^(+)B220^(+)NK细胞表达PDCA-1,脾脏最明显。结论CD11c^(+)B220^(+)NK细胞是小鼠外周淋巴组织和肝脏中NK细胞的重要亚群,因组织不同其表面PDCA-1表达存在差异。

CD11b^+ NKT细胞抑制Poly I:C诱导小鼠肝损伤中CD8^+T细胞增殖反应

目的:研究Poly I:C诱导的肝损伤模型中肝脏内上调的CD11b+NKT细胞对CD8+T细胞增殖反应的作用。方法:经腹腔注射Poly I:C(20μg/g)制备Poly I:C诱导小鼠肝损伤模型,流式细胞术检测CD11b+NKT细胞的比例、T细胞增殖反应和CD8+T细胞的杀伤功能,ELISA法检测细胞培养上清中的细胞因子浓度。结果:Poly I:C诱导的肝损伤模型小鼠的肝脏中CD11b+NKT细胞的比例显著上升[(71.7±5.3)%vs(12.4±3.6)%,P<0.01]。细胞因子表达谱分析发现,CD11b+NKT细胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-10的能力显著低于CD11b-NKT细胞。功能分析发现,CD11b+NKT细胞能够显著抑制anti-CD3/CD28单抗诱导非特异性的和OVA特异性的CD8+T细胞增殖反应,而CD11b-NKT细胞没有此抑制功能;进一步分析发现,CD11b+NKT细胞并不影响CD8+T细胞的杀伤功能。结论:Poly I:C诱导的肝损伤模型小鼠肝脏中CD11b+NKT细胞比例升高,该细胞能够负反馈抑制CD8+T细胞的增殖反应,但是并不影响CD8+T细胞的杀伤功能。

CD103^+CD8^+T细胞在结直肠癌组织中的浸润分布及其临床意义

目的:研究组织驻留CD8^+T细胞(CD103^+CD8^+T细胞)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中浸润程度及分布特征,分析其浸润程度与患者临床病理特征及预后的关系。方法:选用上海芯超生物科技有限公司的88例结肠癌HColA180Su14和77例直肠癌HRec-Ade180Sur-03组织芯片,应用免疫荧光染色法分别检测CRC组织及相应癌旁组织中CD103^+CD8^+T细胞的浸润分布特征及程度,Wilcoxon秩和检验比较CRC及癌旁组织中CD103^+CD8^+T细胞浸润程度,χ2检验分析CRC中CD103^+CD8^+T细胞浸润程度与患者临床病理特征的关系;Kaplan-Meier生存分析CD103^+CD8^+T细胞浸润程度与患者预后的关系,拟合Cox模型评价不同指标与患者预后的关系。结果:CRC组织中CD103^+CD8^+T细胞浸润程度与癌旁组织比较差异无统计学意义(P>0.05),有远处转移患者中CD103^+CD8^+T细胞高度浸润的比率显著低于无远处转移患者(P<0.01),CD103^+CD8^+T细胞浸润程度与患者其他临床病理特征无明显相关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,CD103^+CD8^+T细胞高度浸润患者的OS较低度浸润患者显著延长(54.42%vs 25.00%,P<0.05),多因素Cox显示,病理分级(P<0.01)和CD103^+CD8^+T细胞高度浸润(P<0.05)均可作为CRC患者预后的独立影响因素。结论:CRC组织中CD103^+CD8^+T细胞浸润与预后相关,提示其在CRC发生发展过程中发挥重要作用。

CD4^(+)CD45RC^(low)Treg在大鼠肝移植免疫耐受中的调节作用研究

目的探讨CD4^(+)CD45RC^(low)调节性T细胞(Treg)在肝移植免疫耐受诱导中的作用。方法建立急性排斥反应(AR)[Lewis→Brown Norway(BN),AR组]与自发耐受(BN→Lewis,耐受组)大鼠肝移植模型,每组6只。并设立假手术组(对照组),Lewis大鼠和BN大鼠各3只。对各组大鼠肝组织进行病理学检查;检测各组大鼠外周血、移植肝、脾脏T细胞亚群和浆细胞样树突状细胞(pDC)的表达情况,分析pDC与CD4^(+)CD45RC^(low)Treg的相关性;检测各组大鼠移植肝和脾脏CD4、CD45RC、CD103的表达情况。结果AR组大鼠病理学主要表现为移植肝炎症细胞浸润和组织结构紊乱。与AR组大鼠比较,耐受组大鼠外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg、CD8^(+)Treg表达水平均升高(均为P<0.05)。外周血CD4^(+)CD25^(+)Treg与CD8^(+)Treg表达水平呈正相关(r=0.742,P=0.022)。AR组大鼠外周血CD4+CD45RChighT细胞水平高于耐受组和对照组大鼠(均为P<0.05)。与AR组大鼠比较,耐受组大鼠脾脏CD4+CD45RClowTreg表达水平升高,外周血、移植肝、脾脏CD8^(+)CD45RC^(low)Treg表达水平均升高(均为P<0.05)。与对照组和AR组大鼠比较,耐受组大鼠外周血CD8^(+)CD45RC^(low)Treg/CD8+T比值升高,外周血、移植肝、脾脏中pDC的表达水平均升高(均为P<0.05);且CD4^(+)CD45RC^(low)Treg与pDC表达水平的变化呈正相关(r=0.506,P=0.016)。耐受组大鼠移植肝和脾脏CD4、CD45RC、CD103的表达均增多;而AR组大鼠移植肝CD4、CD45RC的表达增多,CD103表达降低。结论CD4+CD45RClowTreg是具有负向免疫调控作用的细胞亚群,与CD8^(+)CD45RC^(low)Treg及pDC等构成免疫耐受诱导的调节性细胞网络。

电针调节CD8^(+)T细胞对帕金森病模型小鼠黑质区神经元损伤的保护机制研究

目的:观察早期电针干预对CD8^(+)T细胞浸润帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)及CD8^(+)T细胞相关细胞因子表达的影响,探讨早期电针对PD的神经元保护效应及机制。方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、电针组、左旋多巴组,每组15只;除空白组外,其余各组均腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)构建PD小鼠模型。造模成功电针组选取“足三里”“悬钟”进行干预14天,治疗结束后进行转棒、旷场测试,并观察黑质区TH表达及CD8^(+)T细胞表型标记物CD103^(+)T细胞、干扰素γ(IFNγ)蛋白及颗粒酶B(GzmB)蛋白的表达。结果:造模结束后,模型组小鼠毛色暗淡无光,精神萧瑟,活动减少,肌肉颤动,而电针组及左旋多巴组小鼠精神状态良好。与模型组相比,电针组及左旋多巴组小鼠掉棒潜伏时间延长(P<0.01),运动总距离延长且经过区域中心的速度改善(P<0.01),黑质区TH阳性表达增加(P<0.01),CD8^(+)CD103^(+)T细胞共定位表达率降低(P<0.01),IFNγ含量下调(P<0.05,P<0.01),GzmB表达下降(P<0.05,P<0.01)。结论:早期电针干预可以提高PD模型小鼠的运动能力,增加黑质区TH表达并改善神经元损伤,其机制与电针减少黑质区CD8^(+)CD103^(+)T细胞浸润,进一步抑制IFNγ、GzmB分泌,最终降低细胞毒性并提高机体免疫功能有关。

CD8^(+)CD103^(+)Trm细胞在胃癌中的分布、表型及其功能下降的机制研究

目的探讨CD8^(+)CD103^(+)常驻记忆型T(Trm)细胞在胃癌患者组织中的分布情况,并研究其表型特征,分析胃癌组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞功能下降的机制。方法采用免疫组织化学染色检测胃癌患者组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的数目并分析其与胃癌患者临床分期的相关性;流式细胞术检测胃癌患者组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的比例与数目、表型和功能;体外TGF-β1刺激培养CD8^(+) T细胞,分析其对CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞功能的影响。结果与正常组织相比,胃癌患者肿瘤组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的数目并未明显改变(P>0.05),但其频率显著下降(P<0.05);胃癌组织浸润的CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞主要属于效应记忆型细胞(CD45RA-CCR7-),并高表达CD69和PD-1;然而,其表达的颗粒酶B和穿孔素水平显著下降(P<0.05);体外TGF-β1可诱导CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞下调表达颗粒酶B和穿孔素(P<0.05)。此外,与早期胃癌患者相比,晚期胃癌患者肿瘤组织中浸润的CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞数目显著下降(P<0.05)。结论胃癌组织中CD8^(+)CD103^(+) Trm细胞的浸润水平与疾病的进展成负相关,并呈现出抑制性的表型且抗肿瘤功能下降,从而有助于胃癌的免疫逃逸。

小鼠缺血性脑卒中后病灶部位CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞种类以及基因表达谱分析

目的探讨小鼠缺血性脑卒中发生后不同时间点病灶部位CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞浸润情况以及基因表达的动态变化。方法将60只6~8周龄成年雄性C57鼠采用随机数字表法分为6组:假手术组(Sham组)和缺血性脑卒中后第1天(D1L组)、第3天组(D3L组)、第7天组(D7L组)、第14天组(D14L组)和第21天组(D21L组)。Sham组小鼠给予缺血性脑卒中处理但不进行大脑中动脉结扎,缺血性脑卒中各组小鼠给予缺血性脑卒中手术处理。按上述时间点取病灶组织消化后,流式细胞术分选CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞,然后应用RNA-seq技术,对小鼠不同时间点分选的CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞进行基因表达谱测序、生物信息学分析以及细胞种类验证。结果在缺血性脑卒中发生后,γδT淋巴细胞和天然杀伤性T淋巴细胞的数目逐渐上升,在D3达到高峰,然后逐渐下降趋于稳定;CD4 T淋巴细胞和CD8 T淋巴细胞数目逐渐上升,在D14达到高峰;调节性T淋巴细胞数目在D14出现明显的上升。结论缺血性脑卒中发生后不同时间点,不同种类的CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞从外周循环系统浸润到病灶组织,早期主要以发挥先天免疫功能的CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞为主,中晚期主要以发挥适应性免疫的CD4 T淋巴细胞和CD8 T淋巴细胞为主。本研究首次运用转录组测序技术和流式细胞术系统阐述了缺血性脑卒中后不同时间点病灶部位CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞的浸润情况以及基因表达特点,为研究缺血性卒中发生、发展的分子机制提供基础。

骨髓单个核细胞分化为CD103^+树突状细胞的方法研究（英文）

目的:探索小鼠骨髓单个核细胞在体外培养诱导其分化为CD103^+树突状细胞(DCs)的方法,为免疫性疾病的防治提供实验基础。方法:分离小鼠胫腓骨,冲洗骨髓腔得到骨髓细胞,利用单个核细胞分离液分离出单个核细胞,加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、Fms样酪氨酸激酶3配体(FLT3L)诱导其分化为成熟的DCs。显微镜下观察细胞大小、形态、分布,流式细胞术检测细胞CD103^+及其共刺激分子的表达水平,再利用磁珠分选出CD103^+DCs,检测其纯度。结果:单个核细胞培养8 d后,倒置显微镜下观察到细胞分化为多种形态,大部分呈圆形或不规则,大小不一,细胞周围有细小凸起,成簇状分布,细胞表面CD11c和CD103增多,表面标志物CD40、CD80、CD86和MHC-Ⅱ升高,磁珠分选纯化后CD103^+DCs纯度可达95.7%,分选后的CD103^+DCs可有效促进T细胞分化。结论:利用GM-CSF和FLT3L联合诱导法进行体外培养,能够得到纯度较高的CD103^+DCs。

胃癌组织中驻留CD8^+T细胞的浸润程度及其意义

目的研究组织驻留CD8^+T细胞(CD103^+CD8^+T细胞)在胃癌组织中的浸润程度及分布特征,并分析其浸润程度与患者临床病理特征及预后的关系。方法采用组织芯片技术和免疫荧光染色法分别检测90例胃癌及相应癌旁正常组织中CD8^+T细胞及CD103^+CD8^+T细胞的浸润分布特征及程度,采用Wilcoxon秩和检验比较胃癌及癌旁正常组织中CD8^+T细胞、CD103^+CD8^+T细胞浸润程度及CD103^+CD8^+T细胞占CD8^+T细胞比率的差异,χ~2检验分析胃癌组织中CD8^+T细胞、CD103^+CD8^+T细胞浸润程度及CD103^+CD8^+T细胞占CD8^+T细胞比率与患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier生存分析法分析CD8^+T细胞、CD103^+CD8^+T细胞浸润程度及CD103^+CD8^+T细胞占CD8^+T细胞比率与患者预后的关系,拟合Cox模型评价不同指标与患者预后的关系。结果胃癌组织CD103^+CD8^+T细胞浸润程度与癌旁正常组织比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者中CD103^+CD8^+T细胞高度浸润的比率(69.09%,38/55)显著低于Ⅰ～Ⅱ期胃癌患者(91.43%,32/35),差异有统计学意义(χ~2=6.175,P=0.013)。CD103^+CD8^+T细胞浸润程度与患者其他临床病理特征相关性无统计学意义(P>0.05)。Kaplan-Merier生存分析显示,CD103^+CD8^+T细胞高度浸润的患者总生存期较CD103^+CD8^+T细胞低度浸润的患者显著延长(HR=2.187,95%CI:1.062～4.500,P=0.033 6);多因素Cox比例风险模型显示,肿瘤直径(HR=2.031,95%CI:1.163～3.546,P=0.013)和CD103^+CD8^+T细胞浸润程度(HR=0.516,95%CI:0.285～0.934,P=0.029)均可作为胃癌患者的独立预后因素。结论 CD103^+CD8^+T细胞在胃癌组织中与良好预后有关,提示其在抑制胃癌发生发展过程中发挥重要作用,可作为胃癌患者预后评估的指标。

粘附分子CD11b/CD_(18)白介素-8与慢性阻塞性肺疾病

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是世界范围内危害人类健康的疾病,发病率和病死率都很高,其确切发病机制仍不十分清楚,涉及多种炎症细胞和细胞因子、蛋白酶和抗蛋白酶系统、氧化和抗氧化等.而以中性粒细胞、巨噬细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CD8+ T淋巴细胞)为主的气道壁、肺泡壁的炎症和进行性发展的气流阻塞是COPD的两大特点[1,2].

mTSLPR-Ig调节CD11c^+细胞改善哮喘小鼠炎症反应

本研究探讨mTSLPR-Ig逆转哮喘小鼠Th1/Th2失衡以及改善哮喘气道炎症的可行性及其诱导哮喘免疫耐受的机制。实验包括用卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化吸入激发BALB/c小鼠,建立哮喘动物模型。于OVA激发前,将mTSLPR-Ig进行小鼠滴鼻灌注,光镜下对BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞、淋巴细胞进行计数;ELISA法检测BALF中细胞因子IL-4、IL-5、IFN-γ以及IL-10水平;HE组织染色法观察小鼠肺部炎症表现。分离小鼠肺脏并制备成细胞悬液,FCM检测肺脏CD11c+细胞表面共刺激分子CD80、CD86以及CD40的表达变化。结果表明,mTSLPR-Ig治疗组与哮喘组比较,BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞计数显著减少(P<0.01)、BALF中IL-4、IL-5水平均显著降低(P<0.01),而IL-10、IFN-γ显著升高(P<0.01);小鼠肺部炎症明显减轻。mTSLPR-Ig治疗组肺脏CD11 c+细胞表面分子CD80、CD86以及CD40较哮喘组显著降低。mTSLPR-Ig能显著抑制哮喘小鼠Th1/Th2失衡以及肺部变应性炎症,该效应可能与mTSLPR-Ig抑制肺脏CD11 c+细胞共刺激分子表达有关。mTSLPR-Ig对哮喘的治疗具有重要的潜在临床应用价值,为哮喘的治疗提供了可能的新途径。