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双特异性CAR-T细胞对EGFRvⅢ^(+)/CD133^(+)胶质瘤干细胞的靶向杀伤 被引量:5
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作者 刘亚丹 谢甲贝 +3 位作者 朱琼琼 卢文杰 丁辉 韩双印 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期296-301,共6页
目的:制备双特异性CAR-T(bs CAR-T)细胞,观察其对表达表皮生长因子Ⅲ型突变阳性(EGFRvⅢ^(+),简称vⅢ^(+))和CD133^(+)胶质瘤干细胞的靶向杀伤作用。方法:基于前期研制的vⅢ/CD133双特异性微抗体和二代CAR构建的双特异性CAR(bs CAR),制... 目的:制备双特异性CAR-T(bs CAR-T)细胞,观察其对表达表皮生长因子Ⅲ型突变阳性(EGFRvⅢ^(+),简称vⅢ^(+))和CD133^(+)胶质瘤干细胞的靶向杀伤作用。方法:基于前期研制的vⅢ/CD133双特异性微抗体和二代CAR构建的双特异性CAR(bs CAR),制备慢病毒载体转染人外周血T细胞,FCM和WB法检测bs CAR转染效率和表达水平。bs CAR-T细胞和vⅢ^(+)/CD133^(+)U87胶质瘤干细胞共培养,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验、IFN-γ分泌实验检测其特异性杀伤作用和对IFN-γ分泌的促进作用。制备裸鼠vⅢ^(+)/CD133^(+)U87干细胞移植瘤模型检测bs CAR-T细胞对移植瘤生长的抑制作用。结果:vⅢsc Fv和CD133sc Fv通过重叠PCR无缝连接入二代CAR表达框(S-vⅢscFv/CD133scFv-Hinge-TM-CD137-CD3ζ)中,然后克隆入p CDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP载体的Eco RⅠ和Bam HⅠ位点(pbs CAR)。3种质粒(p VSV-G、p CMV-d R8.9和pbs CAR)共转染HEK293T细胞制备慢病毒载体,转染外周血T细胞,FCM检测bs CAR表达率为71.1%,WB法结果显示bs CAR表达正确。bs CAR-T细胞和vⅢ^(+)/CD133^(+)U87干细胞共培养检测结果显示,bs CAR-T细胞对胶质瘤干细胞具有特异性杀伤作用,与效靶比呈正比;IFN-γ分泌量为(2350.6±92)pg·m L^(-1),明显高于对照组(P<0.01)。裸鼠移植瘤动物模型显示,bs CAR-T细胞在体内具有明显的移植瘤抑制作用(P<0.01)。结论:bs CAR-T细胞能够特异性靶向杀伤vⅢ^(+)/CD133^(+)胶质瘤干细胞,实验结果为促进实体瘤的细胞免疫治疗提供了实验依据。 展开更多
关键词 表皮生长因子Ⅲ型突变体 cd133 双特异性CAR vⅢ^(+)/cd133^(+)U87胶质瘤干细胞 肿瘤干细胞
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人脐血CD133^+细胞体外短期培养中生物学特性的变化 被引量:9
2
作者 郝思国 孙关林 +1 位作者 邬维礼 吴英理 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第6期569-575,共7页
为了解脐血CD133+细胞的生物学特性及其在体外短期扩增培养中的变化 ,探讨其体外扩增的可行性 ,初步观察了脐血CD133+细胞的免疫表型、细胞周期、端粒酶活性以及粘附分子的表达等生物学特性及其在体外扩增中的动态变化并与CD34+细胞进... 为了解脐血CD133+细胞的生物学特性及其在体外短期扩增培养中的变化 ,探讨其体外扩增的可行性 ,初步观察了脐血CD133+细胞的免疫表型、细胞周期、端粒酶活性以及粘附分子的表达等生物学特性及其在体外扩增中的动态变化并与CD34+细胞进行比较。结果显示 ,新鲜脐血CD133+和CD34+细胞的含量分别为 ( 1.0 5±0 73) %和 ( 1.4 0± 0 .5 6 ) % ,CD34+细胞中 79.6 2 %为CD133+CD34+细胞 ,而CD133+细胞中 97%以上为CD133+CD34+细胞。短期扩增培养结果显示 ,CD133+细胞组扩增第 10天 ,CD133+,CD133+CD34+和CD34+CD38-细胞以及第 6天的CFU mix ,HPP CFC和CD34+CD38-细胞的扩增倍数要高于CD34+细胞组 ( P <0 .0 5 ) ;扩增中 ,CD133+CD34+细胞的比例逐渐下降 ,而CD133-CD34+和CD133-CD34-细胞的比例则逐渐上升。新鲜脐血CD133+和CD34+细胞的端粒酶活性较低 ,但高于CD34-细胞。扩增 1周后 ,端粒酶活性明显上调 ,15天以后又逐渐下降 ;90 %以上脐血CD133+细胞表达CD11a ,CD4 9d和CD5 4 ,约 5 0 %表达CD6 2L。扩增早期 ,CD4 9d表达上调 ,CD11a表达无明显变化 ,而CD5 4和CD6 2L则有下调趋势 ,随着扩增时间的延长 ,各种粘附分子的表达均有不同程度的下调。在整个扩增过程中 ,大部分CD34+细胞仍然表达CD11a,CD4 9d和CD5 4? 展开更多
关键词 脐血 cd133^+细胞 生物学 细胞周期 端粒酶
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肿瘤干细胞标记物CD133和EpCAM在子宫内膜癌中的表达及意义 被引量:8
3
作者 李斌 张志强 +1 位作者 盛黎黎 周晟 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第17期1281-1284,共4页
目的:研究肿瘤干细胞标记物CD133和EpCAM在正常子宫内膜及子宫内膜癌组织中的表达及其临床病理意义。方法:应用免疫组化法检测CD133和EpCAM在65例子宫内膜癌和30例正常增生期子宫内膜组织中的表达情况,并分析其与子宫内膜癌病理分级、... 目的:研究肿瘤干细胞标记物CD133和EpCAM在正常子宫内膜及子宫内膜癌组织中的表达及其临床病理意义。方法:应用免疫组化法检测CD133和EpCAM在65例子宫内膜癌和30例正常增生期子宫内膜组织中的表达情况,并分析其与子宫内膜癌病理分级、临床分期、浸润深度及淋巴结转移等临床病理指标之间的关系。结果:CD133和EpCAM在子宫内膜癌组织中的表达显著高于正常子宫内膜组织(P=0.02,P=0.007),在子宫内膜癌组织中,CD133和EpCAM的表达与肿瘤大小(P=0.006,P=0.007)、组织学分级(P=0.008,P=0.013)、浸润深度(P<0.001,P=0.008)、淋巴结转移(P=0.002,P=0.024)、FIGO分期(P=0.004,P=0.010)均呈显著正相关关系。CD133和EpCAM在子宫内膜癌中的表达呈正相关(r=0.84,P<0.010)。结论:肿瘤干细胞标记物CD133和EpCAM与肿瘤的发生及进展有关,检测其在子宫内膜癌组织中的表达情况有助于预测肿瘤的生物学行为。 展开更多
关键词 cd133EpCAM肿瘤干细胞 子宫内膜癌
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Lenti-TK介导间充质干细胞对鼻咽癌CD133^+干细胞的靶向迁移及杀伤作用 被引量:2
4
作者 李冠雪 申聪香 +3 位作者 文忠 钟品能 杨柯柯 张沈华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期145-152,共8页
目的:观察慢病毒-胸苷激酶(lentivirus-thymidine kinase,Lenti-TK)/间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对鼻咽癌CD133+干细胞的靶向迁移及杀伤作用。方法:构建包含TK基因的重组慢病毒表达载体Lenti-TK,感染MSC后得到Lenti-TK-MSC... 目的:观察慢病毒-胸苷激酶(lentivirus-thymidine kinase,Lenti-TK)/间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对鼻咽癌CD133+干细胞的靶向迁移及杀伤作用。方法:构建包含TK基因的重组慢病毒表达载体Lenti-TK,感染MSC后得到Lenti-TK-MSC,RT-PCR及Western blotting检测Lenti-TK-MSC中HA-TK的表达。免疫磁珠法从鼻咽癌5-8F细胞中分选CD133+细胞;Transwell小室迁移实验检测Lenti-TK-MSC对CD133+5-8F细胞的趋向性;Lenti-TK-MSC联合更昔洛韦(ganciclovir,Lenti-TK-MSC/GCV)与CD133+5-8F细胞共培养,CCK-8试剂盒检测其对细胞的杀伤作用和旁观者效应。结果:成功构建重组慢病毒载体Lenti-TK,其滴度为1×108UT/ml,Lenti-TK(MOI=50)感染MSC 72 h时,感染效率达(95.1±0.1)%。Lenti-TK-MSC迁移至CD133+5-8F细胞组的细胞数明显多于CD133-5-8F细胞组、未分选5-8F细胞组[(83.0±8.7)vs(29.6±5.3)、(38.3±5.2),P=0.000]。Lenti-TK-MSC/GCV处理组与单独GCV处理组、Lenti-TK-MSC/GCV条件培养液(即Lenti-TK-MSC加入1 mg/L GCV培养48 h的培养上清)处理组相比,CD133+5-8F细胞的存活率明显降低[(37.2±2.3)%vs(98.5±3.1)%、(83.8±3.4)%,P=0.000]。Lenti-TK-MSC数量达到混合细胞总数(Lenti-TK-MSC和CD133+5-8F细胞)的20%时,CD133+5-8F细胞存活率为(68.2±2.3)%,表现出明显的旁观者杀伤效应。结论:Lenti-TK感染后MSC对鼻咽癌CD133+5-8F细胞具有靶向迁移及杀伤作用。 展开更多
关键词 鼻咽癌 cd133+细胞 间充质干细胞 肿瘤干细胞 肿瘤靶向基因治疗 旁观者效应
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骨髓基质细胞联合细胞因子对脐血CD133^+细胞体外扩增作用的研究 被引量:3
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作者 毛平 曾进龙 +1 位作者 王彩霞 杜庆华 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期319-323,共5页
为了探讨胚胎骨髓基质细胞(FBMSC)联合细胞因子对脐血单个核细胞(MNC)中CD133+细胞的体外扩增作用,将新鲜脐血(CB)中分离出来的MNC接种于无血清培养体系中培养14天。实验分为4组:C组为空白对照组,不含基质细胞和细胞因子;S组为单用基质... 为了探讨胚胎骨髓基质细胞(FBMSC)联合细胞因子对脐血单个核细胞(MNC)中CD133+细胞的体外扩增作用,将新鲜脐血(CB)中分离出来的MNC接种于无血清培养体系中培养14天。实验分为4组:C组为空白对照组,不含基质细胞和细胞因子;S组为单用基质细胞组;F组为单用细胞因子组;SF组为联合使用基质细胞和细胞因子组。在第0,6,10及14天检测有核细胞总数、CD133+细胞数及集落形成单位(CFU)数。结果表明:各时间点SF组有核细胞总数的扩增倍数均高于其它组;除了第14天外,SF组在第6、10天时CD133+细胞数、CFU数的扩增倍数均高于其它组。结论:胚胎骨髓基质细胞对延缓造血细胞的分化具有重要的作用,基质细胞联合细胞因子可以有效的扩增脐血单个核细胞及其中的CD133+细胞,这是一种比较接近于临床移植要求的造血细胞体外扩增方法。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 造血干细胞 细胞扩增 cd133^+细胞 脐血 细胞因子
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人胎盘CD133^+细胞具有高增殖潜能集落形成细胞特性 被引量:2
6
作者 刘佳云 陈代雄 +5 位作者 方宁 章涛 刘祖林 祁莹 万卫红 刘金伟 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期915-918,共4页
目的通过对人胎盘CD133+细胞群中高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)检测与生物学特性的分析,证明人胎盘存在早期造血干/祖细胞(HSPC)。方法采用机械法制备人胎盘组织(PT)单细胞悬液,用Histopaque-1007分离出单个核细胞(MNC),经磁式分选(M... 目的通过对人胎盘CD133+细胞群中高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)检测与生物学特性的分析,证明人胎盘存在早期造血干/祖细胞(HSPC)。方法采用机械法制备人胎盘组织(PT)单细胞悬液,用Histopaque-1007分离出单个核细胞(MNC),经磁式分选(MACS)富集CD133+细胞,培养28d后观察HPP-CFC集落形成能力,用流式细胞仪(FCM)对分选的细胞组份和HPP-CFC进行表型分析,实验全程用脐带血(UCB)作平行比较分析。结果培养28d后,PT-CD133+与UCB-CD133+细胞组份分别扩增了266和362倍,前者低于后者(P<0.01);PT-CD133+与UCB-CD133+细胞中HPP-CFC分别为(32.4±11.2)/5×103、(17.7±5.7)/5×103,前者形成的HPP-CFC数量明显高于后者(P<0.01);PT-CD133+、UCB-CD133+细胞培养至28d时,除UCB-CD133+组的CD133+CD34-亚群比例无明显改变外,CD133+CD34+、CD133-CD34+和CD133+CD34-(PT-CD133+组)亚型均比培养前减少。结论人胎盘组织CD133+细胞中存在HPP-CFC,说明胎盘CD133+细胞群中存在早期HSPC。 展开更多
关键词 cd133^+细胞 造血干/祖细胞 高增殖潜能集落形成细胞 胎盘 磁式分选
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人胎盘CD133^+细胞具有LTC-IC集落启动细胞特性 被引量:2
7
作者 刘虹麟 陈代雄 +5 位作者 方宁 章涛 刘祖林 刘金伟 万卫红 祁莹 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期125-128,共4页
本研究从功能上评价人胎盘CD133+细胞是否具有长期造血重建功能。采用免疫磁珠激活分选系统(MACS)富集胎盘CD133+细胞作为测试细胞,采用有限稀释法(LDA)设置4种不同浓度的测试细胞,用胎儿原代骨髓基质细胞制备的饲养层细胞共培养于长期... 本研究从功能上评价人胎盘CD133+细胞是否具有长期造血重建功能。采用免疫磁珠激活分选系统(MACS)富集胎盘CD133+细胞作为测试细胞,采用有限稀释法(LDA)设置4种不同浓度的测试细胞,用胎儿原代骨髓基质细胞制备的饲养层细胞共培养于长期培养体系中,以检测测试细胞中长期培养启动细胞(LTC-IC)的发生率及其增殖分化能力。结果表明:人胎盘CD133+细胞群中含有LTC-IC,其发生率为1/645;LTC-IC具有增殖分化为粒-单集落形成单位(CFU-GM)和混合集落形成单位(CFU-Mix)的能力;在所有LTC-IC阳性孔中,产生CFU-GM的孔占总阳性孔的71.4%,产生CFU-GM和CFU-Mix的孔占总阳性孔的28.6%。结论:人胎盘组织CD133+细胞群中存在LTC-IC,并具有造血早期祖细胞集落形成能力。 展开更多
关键词 cd133^+细胞 长期培养启动细胞 造血干/祖细胞 磁珠激活细胞分选 胎盘
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ADAM12基因表达沉默对CD133阳性胶质瘤细胞自我更新能力的影响 被引量:4
8
作者 刘波 杨学军 +9 位作者 张辰 于圣平 林雨 海龙 周星辰 李帅 李涛 王伟 程铖 杨亦寒 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期45-49,共5页
目的研究解整合素-金属蛋白酶12(a disintegrin and metalloprotease 12,ADAM12)基因表达沉默抑制CD133阳性(CD133+)胶质瘤细胞的自我更新能力。方法采用sh RNA重组慢病毒转染技术沉默胶质瘤U87细胞系ADAM12基因表达分为ADAM12基因表达... 目的研究解整合素-金属蛋白酶12(a disintegrin and metalloprotease 12,ADAM12)基因表达沉默抑制CD133阳性(CD133+)胶质瘤细胞的自我更新能力。方法采用sh RNA重组慢病毒转染技术沉默胶质瘤U87细胞系ADAM12基因表达分为ADAM12基因表达干扰序列组(sh RNA-ADAM12)、阴性对照组(sh RNA-NC)及空白对照(sh RNA-C)组。通过Western blotting以及Real-time PCR验证各组细胞ADAM12表达情况;采用悬浮培养得到胶质瘤细胞球以富集CD133+的胶质瘤细胞;并通过免疫荧光染色技术检测ADAM12与CD133在细胞球与贴壁细胞的表达情况;通过神经肿瘤球形成实验检测三组细胞的自我更新能力;利用Western blotting分别检测三组细胞成球后未分化或分化相关蛋白CD133、GFAP及TUBB3以及Notch通路靶基因Hes1的蛋白表达情况。结果慢病毒转染技术可显著下调U87胶质瘤细胞ADAM12的m RNA及蛋白的表达量,sh RNA-ADAM12组与sh RNA-NC组较sh RNA-C组m RNA的相对表达量为0.22±0.03与0.98±0.06(F=425.37,P<0.01);三组ADAM12蛋白的相对表达量分别为28.72%±2.36%、69.21%±3.92%及69.04%±3.57%(F=145.42,P<0.01);免疫荧光染色显示细胞球中ADAM12与CD133表达量明显高于普通细胞;神经肿瘤球形成实验结果显示,三组成球数分别为45.5±2.3、104.2±5.8以及109.6±6.2,与sh RNA-NC组及sh RNA-C组相比,sh RNA-ADAM12组的成球能力明显降低,差异具有统计学意义(F=147.03,P<0.01)。sh RNA-ADAM12组与sh RNA-C组相比,GFAP与TUBB3蛋白表达量分别上调约166%与146%,CD133与HES1的蛋白表达量分别下调了54%与50%,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 ADAM12基因表达沉默可能通过抑制Notch通路活性降低CD133+胶质瘤细胞的自我更新能力。 展开更多
关键词 解整合素-金属蛋白酶12 cd133+胶质瘤细胞 自我更新
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胶质瘤U251细胞中CD133表达及干细胞特性分析 被引量:1
9
作者 杨伟现 欧阳琦 +5 位作者 周月鹏 王存祖 张志坚 向定朝 许慧中 陆晓峰 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2012年第1期27-30,共4页
目的:探讨CD133+细胞的生物学特性,分析CD133作为胶质瘤干细胞标记的可行性。方法:利用免疫荧光染色检测U251细胞中CD133、巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)等蛋白表达,分析CD133+细胞与CD1... 目的:探讨CD133+细胞的生物学特性,分析CD133作为胶质瘤干细胞标记的可行性。方法:利用免疫荧光染色检测U251细胞中CD133、巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)等蛋白表达,分析CD133+细胞与CD133-细胞中巢蛋白、NSE、GFAP阳性细胞存在的差异。结果:U251中CD133+细胞比例为0.060±0.003,在CD133+细胞中,巢蛋白阳性细胞,NSE和GFAP阴性细胞比CD133-中明显增多;在CD133-细胞中,也存在巢蛋白阳性细胞,数目较CD133+中明显减少,相反巢蛋白阴性细胞,NSE和GFAP阳性细胞明显增多。结论:胶质瘤U251细胞存在CD133+细胞,在CD133阳性和阴性细胞中,均存在干细胞样细胞,但是在CD133+细胞中此类细胞更多。 展开更多
关键词 胶质瘤 cd133+细胞 肿瘤干细胞
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人脐血单个核细胞中CD133^+细胞移植治疗心力衰竭的评价 被引量:1
10
作者 马力 谢宜旭 +1 位作者 常羽 姚磊 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第28期4196-4202,共7页
背景:细胞纯化方法可以消除细胞的生物变异性,为细胞再生治疗提供了新的思路。目的:探讨CD133+细胞在人脐血单个核细胞移植治疗心力衰竭中的作用。方法:(1)采用淋巴细胞分离液法提取人脐血单个核细胞,经免疫磁珠分离CD133+细胞及CD133-... 背景:细胞纯化方法可以消除细胞的生物变异性,为细胞再生治疗提供了新的思路。目的:探讨CD133+细胞在人脐血单个核细胞移植治疗心力衰竭中的作用。方法:(1)采用淋巴细胞分离液法提取人脐血单个核细胞,经免疫磁珠分离CD133+细胞及CD133-细胞,调整细胞浓度为1×108 L-1;(2)将40只SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、CD133+细胞组、CD133-细胞组和单个核细胞组,除假手术组,其余4组腹腔注射异丙肾上腺素建立心脏衰竭模型,CD133+细胞组经尾静脉注射1 mL CD133+细胞和1 mL PBS,CD133-细胞组经尾静脉注射1 mL CD133-细胞和1 mL PBS,单个核细胞组经大鼠尾静脉注射1 mL CD133+细胞和1 mL CD133-细胞,假手术组和模型组经尾静脉注射2 mL PBS;(3)细胞移植后4周,观察大鼠的心肌病理组织学改变,心肌纤维化程度以及CD133+细胞在心肌内的定植情况。结果与结论:(1)苏木精-伊红染色结果:模型组大鼠心肌排列紊乱,假手术组心肌排列整齐,CD133+细胞组心肌紊乱程度最轻,单个核细胞组其次,CD133-细胞组和模型组接近;(2)Masson染色结果:模型组胶原纤维增多,排列紊乱,胶原纤维断裂,假手术组胶原纤维很少,排列整齐,CD133+细胞组心肌胶原纤维减少和紊乱程度最轻;(3)模型组、CD133+细胞组、CD133-细胞组和单个核细胞组的胶原纤维面积均明显高于假手术组(P<0.05),其中CD133+细胞组的胶原纤维面积最小;(4)免疫组化和免疫荧光染色结果:在移植后4周各组大鼠心肌组织中均未发现特异性染色细胞;(5)结果表明,CD133+细胞移植治疗可以改善心肌受损程度,减少心肌纤维化程度,其治疗效果较单个核细胞移植治疗效果好,CD133+细胞并未定植于心脏局部。 展开更多
关键词 脐血干细胞移植 心力衰竭 膜糖蛋白类 组织工程 细胞 移植 脐血 单个核细胞 cd133+细胞 纤维化 细胞移植
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抑制KLF8基因对CD133^+肝癌干细胞亚群比例、裸鼠体内成瘤和肺转移能力的影响 被引量:1
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作者 石军梅 刘英 +2 位作者 刘义冰 王晓翔 刘纯一 《山东医药》 CAS 2018年第39期25-29,共5页
目的观察抑制KLF8基因对肝癌干细胞CD133^+表型细胞亚群比例、裸鼠体内成瘤和肺转移能力的影响。方法收集肝癌患者的肺转移灶,分离培养原代肝癌细胞,无血清悬浮培养形成肝癌细胞球,经流式分选筛选出CD133^+表型的肝癌干细胞细胞亚群(LCS... 目的观察抑制KLF8基因对肝癌干细胞CD133^+表型细胞亚群比例、裸鼠体内成瘤和肺转移能力的影响。方法收集肝癌患者的肺转移灶,分离培养原代肝癌细胞,无血清悬浮培养形成肝癌细胞球,经流式分选筛选出CD133^+表型的肝癌干细胞细胞亚群(LCSCs)。将KLF8基因的RNA干扰重组慢病毒质粒(sh-KLF8)及其阴性对照空载体质粒(sh-control)分别感染LCSCs,经2. 0μg/m L嘌呤霉素筛选,成功构建稳定敲除KLF8基因的CD133^+表型肝癌干细胞株LCSCs_(sh-KLF8)及对照细胞株LCSCs_(sh-control),qRT-PCR法检测KLF8 mRNA,流式细胞术检测CD133^+表型细胞亚群比例。分别注射LCSCs_(sh-KLF8)和LCSCs_(sh-control)构建肝癌干细胞裸鼠移植瘤模型,观察敲除KLF8基因对肝癌干细胞裸鼠体内成瘤能力的影响(成瘤重量)。另将LCSCs_(sh-KLF8)和LCSCs_(sh-control)分别经尾静脉注射到裸鼠体内,构建肝癌干细胞的裸鼠肺转移模型,观察敲除KLF8基因对肝癌干细胞裸鼠体内肺转移能力的影响(肺转移灶个数、KLF8蛋白)。结果与LCSCs_(sh-control)比较,LCSCs_(sh-KLF8)中KLF8 mRNA相对表达水平降低,分选时CD133^+表型干细胞亚群的比例显著降低,裸鼠体内的成瘤重量和肺转移的数量降低,KLF8蛋白阳性着色较少(P均<0. 05)。结论抑制KLF8基因可降低肝癌干细胞CD133^+表型细胞亚群比例及体内成瘤、肺转移能力,KLF8基因可能是抑制肝癌发生和进展的关键分子。 展开更多
关键词 KLF8基因 肝癌干细胞 cd133+表型细胞亚群 体内成瘤能力 肺转移能力
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HepG2细胞系CD133^+细胞对多柔比星的抗性及其机制 被引量:1
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作者 王平凡 张东生 +1 位作者 徐杨 马艳红 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期595-600,共6页
目的:探讨Hep G2中CD133^+细胞对多柔比星(doxorubicin,DOX)的抗性及其作用机制。方法:通过磁珠分选实验对Hep G2细胞中CD133^+细胞进行分选,流式细胞术检测CD133^+细胞阳性率,MTT法检测CD133^+细胞对DOX诱导凋亡的抗性,免疫荧光实验检... 目的:探讨Hep G2中CD133^+细胞对多柔比星(doxorubicin,DOX)的抗性及其作用机制。方法:通过磁珠分选实验对Hep G2细胞中CD133^+细胞进行分选,流式细胞术检测CD133^+细胞阳性率,MTT法检测CD133^+细胞对DOX诱导凋亡的抗性,免疫荧光实验检测DOX处理各组细胞后P65激活转运情况,q RT-PCR检测各组细胞乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)m RNA表达水平;Western blotting检测CD133^+细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:磁珠分选可以高效地富集Hep G2细胞中CD133^+细胞。与CD133-细胞相比,CD133^+细胞对DOX具有更强的抗性(P<0.05);与CD133-细胞、Hep G2细胞相比,CD133^+细胞中P65激活速度与表达水平明显提高(均P<0.05);CD133^+细胞中BCRP m RNA表达水平明显高于CD133-细胞和Hep G2细胞(均P<0.05);与Hep G2、CD133-组相比,CD133^+细胞组Bax和p53蛋白表达水平显著减少、Bcl-2和Survivin蛋白表达量显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论:Hep G2细胞中CD133^+细胞亚群对DOX高耐药性的分子机制在于高表达存活相关蛋白NF-κB、Bcl-2、Survivin以及耐药性转运蛋白BCRP,而低表达促凋亡相关蛋白p53、Bax。 展开更多
关键词 肝癌 HEPG2细胞 cd133^+细胞 多柔比星 抗性
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miR-125b通过下调HAX-1的表达提高CD133^+ SW480细胞对顺铂的敏感性 被引量:2
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作者 潘海强 沈锋 +2 位作者 崔焌辉 蔡珂 都志军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1053-1059,共7页
目的:探讨miR-125b在CD133^+结直肠癌细胞中发挥的作用并研究其是否和顺铂的体外治疗有关。方法:用RT-qPCR方法检测miR-125b在常规SW480肿瘤细胞及CD133^+ SW480肿瘤细胞中的表达水平。流式细胞术检测miR-125b和顺铂对SW480细胞系中CD13... 目的:探讨miR-125b在CD133^+结直肠癌细胞中发挥的作用并研究其是否和顺铂的体外治疗有关。方法:用RT-qPCR方法检测miR-125b在常规SW480肿瘤细胞及CD133^+ SW480肿瘤细胞中的表达水平。流式细胞术检测miR-125b和顺铂对SW480细胞系中CD133^+ 细胞比例的影响。MTT法检测miR-125b对顺铂杀伤CD133^+ SW480细胞能力的影响。利用生物信息学及Western blot方法验证miR-125b是否调节CD133^+ SW480细胞中HAX-1的表达。运用JC-1染色、Annexin V染色及Western blot方法研究miR-125b影响顺铂疗效的信号通路的效应。结果:CD133^+ SW480细胞中的miR-125b表达水平显著低于正常结直肠上皮细胞系FHC和常规SW480肿瘤细胞。顺铂体外单独治疗能提高SW480细胞系中CD133^+细胞的比例,然而联用miR-125b模拟物后CD133^+ SW480细胞的比例显著下降。MTT实验结果表明miR-125b可显著增强顺铂对CD133^+ SW480细胞的杀伤活性。Western blot实验表明miR-125b的靶基因可能为HAX-1。miR-125b联合顺铂可引起CD133^+ SW480细胞线粒体膜电位的丧失并诱导线粒体内细胞色素C的释放,进而引起细胞凋亡。转染HAX-1表达载体后miR-125b联合顺铂对CD133^+ SW480细胞的凋亡诱导效应显著降低。结论:miR-125b通过下调HAX-1的表达提高CD133^+结直肠癌细胞对顺铂的敏感性。 展开更多
关键词 miR-125b HAX-1 细胞色素C 顺铂 cd133+结直肠癌细胞
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阿加曲班联合普伐他汀对急性脑梗死患者外周血CD133+细胞血浆3-MST水平的影响 被引量:1
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作者 刘书芳 汪琳 +3 位作者 李月玲 李文雅 王明磊 黄圣明 《临床心身疾病杂志》 CAS 2020年第6期25-29,共5页
目的 探讨阿加曲班联合普伐他汀对急性脑梗死患者外周血CD133+细胞、血浆巯基丙酮酸硫基转移酶水平的影响.方法 将90例急性脑梗死患者按随机数字表法分为两组,各45例.两组均予以常规治疗,研究组在此基础上予以阿加曲班联合普伐他汀治疗... 目的 探讨阿加曲班联合普伐他汀对急性脑梗死患者外周血CD133+细胞、血浆巯基丙酮酸硫基转移酶水平的影响.方法 将90例急性脑梗死患者按随机数字表法分为两组,各45例.两组均予以常规治疗,研究组在此基础上予以阿加曲班联合普伐他汀治疗,治疗28 d.统计并比较两组临床疗效有效率、不良反应发生率,治疗前及治疗后第14 d美国国立卫生研究院卒中量表评分、Barther指数量表及外周血CD133+细胞、血浆巯基丙酮酸硫基转移酶、血清炎性因子(白细胞介素-6、超敏C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α)水平.结果 研究组总有效率显著高于对照组(P<0.05).治疗后第14 d,两组美国国立卫生研究院卒中量表评分、白细胞介素-6、超敏C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α水平较治疗前显著降低(P<0.01),研究组显著低于对照组(P<0.01);两组Barther指数、CD133+细胞、血浆巯基丙酮酸硫基转移酶水平较治疗前显著升高(P<0.01),研究组显著高于对照组(P<0.01).两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 阿加曲班联合普伐他汀治疗急性脑梗死疗效显著,可明显改善患者的神经功能及日常生活活动能力,有效增加外周血CD133+细胞及血浆巯基丙酮酸硫基转移酶水平,降低炎性因子水平. 展开更多
关键词 急性脑梗死 阿加曲班 普伐他汀 外周血cd133^(+)细胞 巯基丙酮酸疏基转移酶
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人脐带血中CD133^+细胞的分布情况以及与CD34的共表达 被引量:1
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作者 刘红 张慧 南虎松 《吉林医学》 CAS 2016年第2期379-381,共3页
目的:了解CD133^+细胞在脐带血中的分布情况以及与CD34共表达的情况,为今后脐带血移植提供基础理论依据。方法:采用6%羟乙基淀粉沉降法和密度梯度离心法联合应用分离脐带血单个核细胞。采用流式细胞技术检测单个核细胞中的CD34^+/CD133^... 目的:了解CD133^+细胞在脐带血中的分布情况以及与CD34共表达的情况,为今后脐带血移植提供基础理论依据。方法:采用6%羟乙基淀粉沉降法和密度梯度离心法联合应用分离脐带血单个核细胞。采用流式细胞技术检测单个核细胞中的CD34^+/CD133^+百分率。结果:单个核细胞中CD133^+百分比为0.17%±0.08%,在CD34^+细胞中同时表达CD133的百分比为78.49%±7.53%。结论:CD133在人脐带血中主要表达与CD34^+细胞亚群上,且CD133^+细胞在单个核细胞中所占的比例较CD34^+细胞低。 展开更多
关键词 cd133^+细胞 脐带血 造血干细胞
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三氧化二砷诱导胆囊癌细胞凋亡涉及CD133表达下调机制的细胞研究 被引量:2
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作者 潘洪涛 艾志龙 +4 位作者 沈盛 锁涛 王越琦 刘厚宝 童赛雄 《外科理论与实践》 2011年第6期553-556,共4页
目的:探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人胆囊癌(GBC)细胞凋亡及对干细胞标志物CD133表达的作用。方法:用Hoechest染色、流式细胞仪和DNA凝胶电泳研究As2O3诱导GBC细胞凋亡及对CD133+GBC细胞的作用。Western印迹法检测CD133蛋白表达,RT-PCR检... 目的:探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人胆囊癌(GBC)细胞凋亡及对干细胞标志物CD133表达的作用。方法:用Hoechest染色、流式细胞仪和DNA凝胶电泳研究As2O3诱导GBC细胞凋亡及对CD133+GBC细胞的作用。Western印迹法检测CD133蛋白表达,RT-PCR检测CD133 mRNA表达。结果:As2O3能诱导GBC细胞凋亡、减少CD133+GBC细胞的数量,同时能降低GBC细胞CD133的蛋白及mRNA表达。结论:As2O3可能通过抑制干细胞标志物CD133表达而实现其对体外人GBC细胞的诱导凋亡作用。 展开更多
关键词 三氧化二砷 人胆囊癌细胞 细胞标志物cd133 细胞凋亡
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SCF与bFGF联合诱导脐血CD133^+细胞分化及基因表达的变化
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作者 张静 朱敬松 +4 位作者 李倩如 杜英 杨波 李国喜 胡祥 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期146-150,共5页
本研究探讨干细胞因子(SCF)与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)体外联合诱导脐血CD133+细胞分化及基因表达的变化,认识脐血CD133+细胞的生物学特性,为体外诱导分化和临床应用打下基础。利用MiniMACS免疫磁珠法从脐静脉血单个核细胞中分离出... 本研究探讨干细胞因子(SCF)与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)体外联合诱导脐血CD133+细胞分化及基因表达的变化,认识脐血CD133+细胞的生物学特性,为体外诱导分化和临床应用打下基础。利用MiniMACS免疫磁珠法从脐静脉血单个核细胞中分离出CD133+细胞,用含干细胞因子(SCF)、bFGF、B27的DMEM/F12细胞营养液培养10-15天,提取培养前后细胞总RNA,利用Oligo GEArray芯片和GEArray表达分析软件进行相关基因表达的芯片数据分析。结果表明:在所检测的263个基因中,发现21个基因培养后表达比培养前显著上调,7个基因表达显著下调。这些基因主要涉及干细胞特异性标志、细胞周期、干细胞分化标志以及与干细胞相关的信号转导、细胞因子及其受体等。结论:SCF和bFGF通过一些特定基因的变化影响脐血CD133+细胞增殖分化,这一结果有助于从基因水平理解SCF与bFGF联合作用对CD133+细胞增殖分化的影响,有利于细胞因子诱导的CD133+细胞在临床上的应用。 展开更多
关键词 细胞因子 碱性成纤维细胞生长因子 cd133细胞 基因芯片 脐血
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脐血CD133^+细胞体外扩增巨核系祖细胞的研究
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作者 王丽 陈代雄 +5 位作者 方宁 刘祖林 章涛 万卫红 祁莹 刘金伟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期645-649,共5页
本研究探讨脐血CD133+(UCB-CD133+)细胞体外扩增巨核系祖细胞的能力和最佳收获时间。采用免疫磁珠激活细胞分选系统(MACS)分选UCB-CD133+细胞,将纯化的UCB-CD133+细胞接种于含TPO、IL-3和SCF的无血清液体培养体系中体外扩增巨核系祖细胞... 本研究探讨脐血CD133+(UCB-CD133+)细胞体外扩增巨核系祖细胞的能力和最佳收获时间。采用免疫磁珠激活细胞分选系统(MACS)分选UCB-CD133+细胞,将纯化的UCB-CD133+细胞接种于含TPO、IL-3和SCF的无血清液体培养体系中体外扩增巨核系祖细胞,在培养第7、10和14天进行细胞计数,流式细胞仪检测扩增过程中CD133、CD34、CD41抗原表达的动态变化,并采用半固体法对不同扩增阶段的细胞进行巨核祖细胞集落形成单位(CFU-MK)培养。结果表明:培养至第7天时,UCB-CD133+细胞扩增效果最佳,扩增了8.2±2.2倍;培养至第14天,细胞总数扩增了116倍;培养至10天时,平均1个CD133+细胞所产生的CD133+CD41+和CD34+CD41+细胞数最多,分别为2.5±0.9和2.6±0.5个,所产生的CD41+细胞为20.3±5.9个;扩增前后的UCB-CD133+细胞均能形成CFU-MK,扩增第10天的UCB-CD133+细胞所形成的CFU-MK总数最多,CFU-MK扩增倍数为59.5±11.8倍。巨核细胞免疫组织化学染色显示,扩增后的巨核系细胞多呈幼稚状态,未见血小板形成。结论:UCB-CD133+细胞具有较强的体外扩增巨核系祖细胞的能力,培养第10天扩增效能最佳。 展开更多
关键词 cd133^+细胞 造血干/祖细胞 巨核系祖细胞 体外扩增 脐血
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CD133+细胞联合人脐血干细胞在心力衰竭小鼠中的作用
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作者 后梅 张红星 +1 位作者 叶青 张勇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第14期2066-2072,共7页
背景:目前常规方法治疗心力衰竭效果不佳。目的:研究CD133+细胞联合人脐血干细胞在心力衰竭小鼠中的效果,为心力衰竭治疗提供依据。方法:采集足月妊娠顺产婴儿脐血,并利用淋巴细胞分离液法提取CD133+细胞和人脐血干细胞。将20只Balb/C... 背景:目前常规方法治疗心力衰竭效果不佳。目的:研究CD133+细胞联合人脐血干细胞在心力衰竭小鼠中的效果,为心力衰竭治疗提供依据。方法:采集足月妊娠顺产婴儿脐血,并利用淋巴细胞分离液法提取CD133+细胞和人脐血干细胞。将20只Balb/C裸小鼠随机等分为单个核细胞组和CD133+细胞联合人脐血干细胞组。2组小鼠均建立心力衰竭模型。单个核细胞组经尾注射单个核细胞治疗,CD133+细胞联合人脐血干细胞组经尾注射CD133+细胞联合人脐血干细胞治疗。结果与结论:(1)治疗后14 d时:CD133+细胞联合人脐血干细胞组小鼠体质量及肝脏、心脏和肺脏质量显著大于单个核细胞组(P<0.05);(2)治疗30 d后:CD133+细胞联合人脐血干细胞组小鼠心肌排列整齐,而单个核细胞组小鼠的心肌排列紊乱,CD133+细胞联合人脐血干细胞组小鼠心肌胶原纤维平均面积显著小于单个核细胞组(P<0.05),血清基质金属蛋白酶9浓度显著低于单个核细胞组(P<0.05),Masson染色结果显示,CD133+细胞联合人脐血干细胞组小鼠蓝色胶原纤维较少,排列相对整齐;单个核细胞组小鼠心内膜出现不同程度胶原纤维增多,排列紊乱;(3)结果提示:CD133+细胞联合人脐血干细胞治疗小鼠心力衰竭效果理想,具有较高的临床应用价值。 展开更多
关键词 心力衰竭 药物治疗 心肌细胞 组织工程 细胞 移植 人脐血干细胞 cd133+细胞 协同作用 治疗效果 单个核细胞 血清基质金属蛋白酶9 MASSON染色 国家自然科学基金
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RNA干扰抑制CD133表达对CD133^+肝癌干细胞增殖和化疗敏感性的影响 被引量:3
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作者 兰曦 王勇 +3 位作者 曹姝 邹冬玲 李芳 李少林 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1741-1747,共7页
目的利用慢病毒介导的RNA干扰技术下调CD133+HepG2肝癌干细胞中CD133的表达,探讨其对肝癌干细胞增殖及化疗敏感性的影响。方法利用流式分选技术筛选CD133+HepG2细胞并检测分选前后CD133表达量,体外成球及体内成瘤实验鉴定其"干性&q... 目的利用慢病毒介导的RNA干扰技术下调CD133+HepG2肝癌干细胞中CD133的表达,探讨其对肝癌干细胞增殖及化疗敏感性的影响。方法利用流式分选技术筛选CD133+HepG2细胞并检测分选前后CD133表达量,体外成球及体内成瘤实验鉴定其"干性";随后以CD133 mRNA编码序列为干扰靶点,采用慢病毒介导的shRNA转染CD133+细胞。应用RT-PCR和Western Blot检测CD133 mRNA及蛋白表达,克隆形成实验检测转染前后细胞增殖情况,CCK-8法和流式细胞仪检测在化疗药物顺铂作用下转染前后细胞的生长抑制率及凋亡情况。结果分选前后CD133表达率分别为(3.36±1.80)%,(88.74±3.19)%;CD133+细胞相对于CD133-细胞有更强的体外成球和体内成瘤能力;转染CD133 shRNA后的细胞CD133 mRNA表达明显受到抑制(P<0.05),蛋白表达水平降低,增殖能力显著下降(P<0.01)。顺铂对转染CD133 shRNA后细胞生长抑制作用明显提高(P<0.01),且其在顺铂作用下的凋亡率也显著增加(P<0.05)。结论慢病毒介导的shRNA能显著下调CD133+肝癌干细胞CD133基因的表达,抑制其增殖并提高其对顺铂的敏感性。 展开更多
关键词 cd133 cd133+肝癌干细胞 RNA干扰 顺铂
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