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抑制KLF8基因对CD133^+肝癌干细胞亚群比例、裸鼠体内成瘤和肺转移能力的影响 被引量:1
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作者 石军梅 刘英 +2 位作者 刘义冰 王晓翔 刘纯一 《山东医药》 CAS 2018年第39期25-29,共5页
目的观察抑制KLF8基因对肝癌干细胞CD133^+表型细胞亚群比例、裸鼠体内成瘤和肺转移能力的影响。方法收集肝癌患者的肺转移灶,分离培养原代肝癌细胞,无血清悬浮培养形成肝癌细胞球,经流式分选筛选出CD133^+表型的肝癌干细胞细胞亚群(LCS... 目的观察抑制KLF8基因对肝癌干细胞CD133^+表型细胞亚群比例、裸鼠体内成瘤和肺转移能力的影响。方法收集肝癌患者的肺转移灶,分离培养原代肝癌细胞,无血清悬浮培养形成肝癌细胞球,经流式分选筛选出CD133^+表型的肝癌干细胞细胞亚群(LCSCs)。将KLF8基因的RNA干扰重组慢病毒质粒(sh-KLF8)及其阴性对照空载体质粒(sh-control)分别感染LCSCs,经2. 0μg/m L嘌呤霉素筛选,成功构建稳定敲除KLF8基因的CD133^+表型肝癌干细胞株LCSCs_(sh-KLF8)及对照细胞株LCSCs_(sh-control),qRT-PCR法检测KLF8 mRNA,流式细胞术检测CD133^+表型细胞亚群比例。分别注射LCSCs_(sh-KLF8)和LCSCs_(sh-control)构建肝癌干细胞裸鼠移植瘤模型,观察敲除KLF8基因对肝癌干细胞裸鼠体内成瘤能力的影响(成瘤重量)。另将LCSCs_(sh-KLF8)和LCSCs_(sh-control)分别经尾静脉注射到裸鼠体内,构建肝癌干细胞的裸鼠肺转移模型,观察敲除KLF8基因对肝癌干细胞裸鼠体内肺转移能力的影响(肺转移灶个数、KLF8蛋白)。结果与LCSCs_(sh-control)比较,LCSCs_(sh-KLF8)中KLF8 mRNA相对表达水平降低,分选时CD133^+表型干细胞亚群的比例显著降低,裸鼠体内的成瘤重量和肺转移的数量降低,KLF8蛋白阳性着色较少(P均<0. 05)。结论抑制KLF8基因可降低肝癌干细胞CD133^+表型细胞亚群比例及体内成瘤、肺转移能力,KLF8基因可能是抑制肝癌发生和进展的关键分子。 展开更多
关键词 KLF8基因 肝癌干细胞 cd133+表型细胞亚群 体内成瘤能力 肺转移能力
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白藜芦醇通过促进Apaf-1/caspase-9复合物的形成增强5-氟尿嘧啶对骨肉瘤CD133^+细胞亚群凋亡的诱导 被引量:3
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作者 张红萍 袁梅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1196-1202,共7页
目的:探讨白藜芦醇联合化疗药物5-氟尿嘧啶对骨肉瘤CD133^+细胞亚群的协同杀伤效应及机制。方法:将人骨肉瘤细胞系MG-63 CD133^+细胞亚群及相应CD133^-细胞亚群用5-氟尿嘧啶及白藜芦醇进行体外处理。MG-63细胞的相对细胞活力用MTT法进... 目的:探讨白藜芦醇联合化疗药物5-氟尿嘧啶对骨肉瘤CD133^+细胞亚群的协同杀伤效应及机制。方法:将人骨肉瘤细胞系MG-63 CD133^+细胞亚群及相应CD133^-细胞亚群用5-氟尿嘧啶及白藜芦醇进行体外处理。MG-63细胞的相对细胞活力用MTT法进行检测;细胞凋亡率用流式细胞术进行检测;用Western blot实验检测caspase-9和caspase-3的活化、Apaf-1的表达水平及细胞色素C的释放;用免疫共沉淀法检测Apaf-1与caspase-9前体的相互作用。结果:5-氟尿嘧啶对MG-63 CD133^+细胞亚群的杀伤活性和凋亡诱导活性均显著低于MG-63 CD133^-细胞亚群。但联用白藜芦醇能显著提高5-氟尿嘧啶对MG-63 CD133^+细胞亚群的细胞活力抑制率。白藜芦醇处理能显著上调MG-63 CD133^+细胞亚群中Apaf-1的表达水平,在MG-63 CD133^+细胞亚群中转染Apaf-1siRNA后,5-氟尿嘧啶联用白藜芦醇的协同效应受到显著抑制。另外,免疫共沉淀实验结果表明白藜芦醇联合5-氟尿嘧啶能显著诱导MG-63 CD133^+细胞亚群中Apaf-1/caspase-9复合物的形成,从而诱导caspase-9发生活化。结论:白藜芦醇通过促进Apaf-1/caspase-9复合物的形成,增强5-氟尿嘧啶对骨肉瘤CD133^+细胞亚群凋亡的诱导。 展开更多
关键词 白藜芦醇 5-氟尿嘧啶 骨肉瘤 cd133+细胞亚群 APAF-1 CASPASE-9
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CD4^+CD25^(high) Regulatory Cells in Peripheral Blood of NSCLC Patients
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作者 刘莉 姚军霞 +1 位作者 丁乾 黄士昂 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2006年第5期548-551,共4页
The proportion and changes of CD4^+CD25^high regulatory T cells (Trs) in peripheral blood of non-small cell lung cancer (NSCLC) patients were analyzed and their clinical significance explored. The peripheral bloo... The proportion and changes of CD4^+CD25^high regulatory T cells (Trs) in peripheral blood of non-small cell lung cancer (NSCLC) patients were analyzed and their clinical significance explored. The peripheral blood was collected from 61 patients with NSCLC and 15 healthy controls. By using monoclonal antibodies, the blood samples were evaluated with the flow cytometry for lymphocyte subsets (CD3^+, CD4^+ and CD8^+) and CD4^+CD25^high Tr cells. The results showed that the proportion of CD4^+CD25^high Tr cells in NSCLC group was significantly higher than in control group [(4.36 ±2.07) % vs (2.04±1.03) %, P〈0.01]. The proportion of CD4^+CD25^ high Tr cells in late stage was higher than that in early stage [stages Ⅰ +Ⅱ (2.264±0.6) %; stage Ⅲ(3.284± 1.38) %; stage IV (6.06 4±4.08) %] (P〈0.05). Kaplan-Meier survival analysis revealed that the prognosis of the patients who had higher proportion of CD4^+CD25^high Tr cells in peripheral blood was worse (P=0.0026). In conclusion, the relative increase in CD4^+CD25^high Tr cells in peripheral blood may be related to im- munosuppression and tumor progression in patients with NSCLC. This finding suggests that CD4^+CD25^high Tr cells in peripheral blood of NSCLC may be positive for prognosis analysis. The use of depletion of the CD4^+CD25^high Tr cell therapy to treat NSCLC patients may be an effective strategy. 展开更多
关键词 non-small cell lung cancer T subsets ^cd4^+cd25^high regulatory T cell flow cytometry survival analysis
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欧前胡素通过下调c-met的表达提高肺癌CD133~+细胞亚群对吉非替尼的敏感性 被引量:8
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作者 吴乾波 张敏 陶志华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期46-52,共7页
目的:研究PC9 CD133^+细胞亚群对吉非替尼的耐药性并探讨欧前胡素提高吉非替尼抗肺癌活性的机制。方法:MTT法检测PC9细胞在吉非替尼和欧前胡素处理下的细胞活力。Western blot实验检测吉非替尼和欧前胡素对PC9细胞c-met表达水平、caspa... 目的:研究PC9 CD133^+细胞亚群对吉非替尼的耐药性并探讨欧前胡素提高吉非替尼抗肺癌活性的机制。方法:MTT法检测PC9细胞在吉非替尼和欧前胡素处理下的细胞活力。Western blot实验检测吉非替尼和欧前胡素对PC9细胞c-met表达水平、caspases活化水平及表皮生长因子受体(EGFR)、PI3K、AKT磷酸化水平的影响。流式细胞术检测欧前胡素和吉非替尼对PC9细胞系的CD133^+细胞亚群种群比例的影响及PC9细胞在二者处理下的凋亡率。结果:PC9 CD133^+细胞亚群对吉非替尼的敏感性显著低于PC9 CD133^-细胞亚群。吉非替尼能显著抑制PC9 CD133^-细胞亚群EGFR/PI3K/AKT的活化,但对PC9 CD133^+细胞亚群该通路的影响不大。吉非替尼单独处理能提高PC9细胞系中CD133^+细胞亚群的比例,然而联用欧前胡素后PC9 CD133^+细胞亚群的种群比例显著下降。Western blot实验表明欧前胡素能显著降低PC9 CD133^+细胞亚群的c-met蛋白表达水平表明c-met是欧前胡素的治疗靶点。MTT、Western blot、流式细胞术实验结果表明在PC9 CD133^+细胞亚群中,欧前胡素通过抑制c-met的表达提高吉非替尼对PI3K/AKT的抑制作用,从而诱导PC9 CD133^+细胞亚群发生caspases活化和凋亡。结论:欧前胡素通过下调c-met的表达提高肺癌CD133^+细胞亚群对吉非替尼的敏感性,两者存在协同抗肿瘤效应。 展开更多
关键词 欧前胡素 C-MET 吉非替尼 PC9 ^cd133^+细胞亚群 PI3K/AKT信号通路
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