干细胞标志物CD133基因表达指数、增殖细胞核抗原标记指数与脑胶质瘤患者恶性程度的相关性分析

目的:分析干细胞标志物CD133基因表达指数、增殖细胞核抗原标记指数(PCNA-LI)与脑胶质瘤患者恶性程度的相关性。方法:选取2015年6月~2017年1月我院收治的71例脑胶质瘤患者为研究对象,根据神经肿瘤分类分级标准分为低级别组39例和高级别组32例,均行CD133基因表达指数、PCNA-LI检测。比较不同恶性程度脑胶质瘤患者CD133基因表达指数、PCNA-LI,以Spearman检验来分析CD133基因表达指数、PCNA-LI与脑胶质瘤恶性程度的相关性。结果:高级别组CD133基因表达指数、PCNA-LI均高于低级别组,差异有统计学意义(P<0.05);CD133基因表达指数、PCNA-LI与脑胶质瘤恶性程度呈正相关(r1=0.767,P1=0.008,r2=0.712,P2=0.013)。结论:CD133基因表达指数、PCNA-LI在脑胶质瘤中的表达情况随肿瘤恶性程度的增高而增强。

肾癌细胞株786-O中CD133^+细胞分选及基因表达谱研究

目的探讨应用免疫磁珠细胞分选方法分离肾癌细胞株786-O中CD133+的可能性,并分析CD133+细胞与CD133-细胞的基因表达谱差异。方法应用免疫磁珠细胞分选技术分选肾癌细胞株786-O中的CD133+细胞,流式细胞仪分析CD133细胞含量,提取RNA用基因芯片技术分析其基因表达谱。结果 786-O细胞中CD133+细胞占13.70%,磁珠分选收集的CD133+细胞阳性率可达98.46%。免疫磁珠细胞分选技术可以有效分选肾癌CD133+细胞,基因表达谱分析可见CD133+细胞较CD133-细胞有8种基因表达上调2倍以上,23种基因下调2倍以上。结论免疫磁珠细胞分选技术可以有效分离肾癌CD133+细胞,CD133+细胞与CD133-细胞表达差异基因分析为后续研究提供了新的思路。

CD133^(+)与CD133^(-)人原代胃癌细胞的差异表达基因及核心基因的筛选

目的通过生物信息学方法筛选出CD133^(+)与CD133^(-)人原代胃癌细胞的差异表达基因(DEGs),寻找可能参与胃癌发生的关键基因。方法根据人CD133^(+)和CD133^(-)人原代胃癌细胞的转录组数据,以|log2FC|≥1,P<0.05为标准筛选DEGs;用Metascape对DEGs进行基因本体论(GO)富集及京都基因和基因组数据库(KEGG)通路富集分析,利用STRING数据库及Cytoscape 3.8.0软件构建蛋白质^(-)蛋白质相互作用(PPI)网络,筛选核心基因;利用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析核心基因与胃癌患者总生存率的关系。结果在CD133^(+)与CD133^(-)人原代胃癌细胞间筛选出305个DEGs,其中下调的DEGs 227个,上调的DEGs 78个;这些DEGs主要参与钙离子通道调节、DNA复制及DNA的代谢过程;KEGG通路分析提示DEGs主要富集于IL^(-)17信号通路、RNA运输以及MAPK信号通路;PPI筛选出20个关键基因,其中趋化因子8(CXCL8)、TCP1伴侣蛋白亚基2(CCT2)、核糖体产物因子2(RPF2)、蛋白酶体20S亚基α4(PSMA4)、胞质伴侣素6A(CCT6A)、蛋白酶体26S亚基(PSMD12)以及凝聚素Ⅰ复合物亚基G(NCAPG)表达与胃癌患者的总生存率负相关,RUNX家族转录因子2表达与胃癌患者的总生存率正相关(P<0.05)。结论获得CD133^(+)与CD133^(-)人原代胃癌细胞的305个DEGs及20个核心基因。

肿瘤干细胞标志物CD133在胃癌中的表达及其临床意义

目的:探讨CD133在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测38例手术切除的胃癌原发组织、癌旁正常胃粘膜组织和其中8例肝转移灶组织中CD133 mRNA的表达,免疫组织化学方法检测肿瘤组织中CD133蛋白的表达情况,分析CD133的表达与临床病理参数的关系。结果:胃癌癌旁、原发、转移组织中CD133 mRNA的灰度相对值分别为0.189±0.149、0.305±0.118和0.359±0.139,癌旁与原发组织之间差异有统计学意义(P<0.01),原发与转移组织之间差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化检测肿瘤组织中CD133蛋白表达,阳性细胞稀少。原发组织CD133 mRNA的表达与肿瘤大小和Ki-67表达相关(P<0.05),与性别、年龄、浸润深度、淋巴结转移分期、TNM分期、组织分化程度及p53表达均无关(P>0.05)。结论:CD133的表达与胃癌的发生有关,与转移的关系有待进一步研究,可能在胃癌的诊断中起一定的作用。

干细胞转录因子Oct4和CD133蛋白在肝外胆管癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨干细胞转录因子Oct4(Oct4)和CD133蛋白在肝外胆管癌(EHCC)中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化方法检测50例EHCC、30例癌旁胆管组织(TAC)和20例正常胆管组织(NBDT)中Oct4和CD133蛋白表达水平,并结合临床病理特征进行分析。结果:在EHCC中Oct4和CD133蛋白阳性表达率分别为62.0%(31/50)和68.0%(36/50)。EHCC中Oct4和CD133表达阳性率显著高于TAC和NBDT(P<0.05)。Oct4和CD133的表达与EHCC的TNM分期、分化程度和转移相关(P<0.05),且两者表达呈正相关(r=0.33,P<0.05)。结论:检测Oct4和CD133基因蛋白表达可作为评估EHCC生物学行为和预后的参考指标。

survivin启动子调控肿瘤干细胞标记CD133基因siRNA增殖型溶瘤腺病毒的构建及对肝癌细胞生长的抑制作用

目的构建survivin启动子调控的靶向CD133基因的siRNA增殖型溶瘤腺病毒,研究其对肝癌细胞生长的影响。方法 RT-PCR法扩增survivin启动子,测序鉴定,双酶切连接,获得p H-XC2-survivin。酶切p H-XC2-survivin、p ZD55-CD133-siRNA获得survivin启动子表达框的亚克隆和CD133-siRNA基因表达框的亚克隆,连接获得survivin启动子调控的siRNA增殖型溶瘤腺病毒表达载体质粒p T-ZD55-CD133-siRNA。增殖型溶瘤腺病毒survivin-T-ZD55-CD133-siRNA经PCR和测序鉴定。qRT-PCR法检测CD133表达,Western blot法检测E1A,CCK-8法检测细胞生长,流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建增殖型溶瘤腺病毒survivin-T-ZD55-CD133-siRNA。qRT-PCR法检测CD133 mRNA明显下降,Western blot证实survivin-T-ZD55-CD133-siRNA在肿瘤细胞中表达E1A能抑制肝癌细胞CD133表达及生长。结论构建的增殖型溶瘤腺病毒可有效降低肝癌细胞CD133的表达,用于肝癌基因治疗的进一步研究。

重组慢病毒CD133-miR30-shRNA的构建及抗肝癌细胞生长的作用

目的:构建沉默CD133基因的mi R30-CD133慢病毒,探讨其对肝癌细胞株SMMC7721生物学行为的影响。方法:针对已经筛选确定的CD133基因干扰有效序列,合成靶序列的Oligo DNA,与p PRIME载体连接。用p PRIME-mi R30-CD133、ps PAX2和p MD2G 3种质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,测定病毒滴度;荧光显微镜下测定病毒感染效率;q RT-PCR、Western blot检测CD133表达;CCK-8法检测细胞生长;annexin V/PI检测细胞凋亡。根据实验要求(1)Blank组;(2)sh NC组;(3)sh CD133组。结果:病毒滴度为6.58×109 PFU/m L,病毒感染效率为(80.8±9.1)%。q RT-PCR结果显示sh CD133组相对Blank组的CD133表达量的平均值为0.18±0.04,sh CD133组相对Blank组和sh NC组有显著的CD133敲减作用(P<0.05)。Western blot结果显示sh CD133组的CD133表达明显下降,约为sh NC组的10%(P<0.05)和Blank组的8%(P<0.05)。重组慢病毒抑制肝癌细胞生长,与Blank组(25.3%)、sh NC组(24.3%)相比,sh CD133组凋亡细胞比例(41.3%)显著增加(P<0.05)。结论:成功构建慢病毒PRIME-mi R30-CD133,为CD133基因的功能研究提供了工具。

CD133在急性白血病中的表达及其意义

目的 探讨CD133(AC133)在急性白血病 (AL)中的表达及其意义。方法 采用三色荧光流式细胞术测定 76例AL患者白血病细胞膜上CD133的表达 ;采用半定量逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)方法测定CD133mRNA的表达。结果 ①正常对照和AL患者的CD133mRNA表达与CD133蛋白表达相一致 ,AL患者CD133表达水平显著高于正常对照。②AL患者CD133及CD133mRNA高表达阳性率分别为 4 2 .1%和 4 6 .1%。急性髓系白血病 (AML)M3 患者CD133均高表达阴性 ,AML和急性淋巴细胞白血病 (ALL)的CD133高表达率分别为 4 3.4 %和 38.1% ,差异无显著性。AML M4CD133高表达阳性率显著高于其它AML亚型 ,而T ALL和B ALL的CD133高表达率分别为 2 0 .0 %和 4 3.7% ,差异也无显著性。③AML患者骨髓细胞CD133表达与CD34、HLA DR显著相关 ,ALL患者骨髓细胞CD133表达与CD34无关。④CD133表达与细胞或分子遗传学异常、发病时外周血白细胞数、乳酸脱氢酶水平、多药耐药基因 (mdr1)表达及年龄等预后因素无显著相关。⑤CD133高表达阳性组完全缓解 (CR)率及总反应 (OR)率低于高表达阴性组 ,但仅有CD34/CD133共高表达阳性组CR率低于阴性组 (44 .4 %vs71.4 % ,P <0 .0 5 ) ,差异有显著性。结论 AL患者骨髓细胞CD133表达高于正常对照 ;

肿瘤干细胞标志EpCAM和CD133在人原发性肝癌中的表达及其对预后的临床意义

目的:检测肿瘤干细胞标志上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)和CD133在原发性肝癌组织中表达的情况,探讨其与临床病理参数的关系及对肝癌预后的临床意义。方法:应用免疫组织化学方法检测70例人肝癌组织中EpCAM和CD133的表达情况。采用SPSS软件包进行相关分析和生存分析,研究EpCAM、CD133与肝癌临床病理特征及预后的关系。结果:CD133和EpCAM蛋白在肝癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.01),癌旁组织中CD133未见表达。CD133在有血管浸润的肝癌组织中表达水平明显高于未浸润血管组(P<0.05),而术前甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)水平>400ng/mL、低分化和肿瘤浸润血管的癌组织中EpCAM表达水平明显高于相应对照组(P<0.05)。肝癌EpCAM蛋白表达与CD133蛋白表达呈正相关关系(P<0.01)。CD133表达强阳性的肝癌患者生存期明显短于CD133表达强度较低组。如果将EpCAM表达强阳性和中等阳性的肝癌患者合为一组,可见EpCAM中-强阳性表达的肝癌患者生存期短于EpCAM低表达者。通过术前AFP水平分层分析可见,术前AFP水平>400ng/mL组中EpCAM中-强阳性表达的患者生存期与低度阳性表达患者相比明显缩短。肿瘤数目、术前AFP水平、有无肿瘤包膜和CD133表达是影响肝癌预后的独立因素。结论:CD133和EpCAM可能参与肝癌发展的恶性进程,其高表达提示肝癌患者预后不良,因此推测EpCAM+AFP+可能是肝癌恶性程度更高的标志。

下调CD133表达对肝癌干细胞上皮间质化和侵袭能力影响及机制探讨

目的肿瘤干细胞是肿瘤复发和转移的原因。探讨CD133基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)的重组质粒,对人肝癌细胞株MHCC-H的CD133基因表达、上皮间质化和侵袭能力的影响。方法通过免疫磁珠分选MHCC-H细胞中的CD133阳性细胞,设计并合成特异性靶向CD133的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段,并构建pSuper retro GFP-neo-siRNA-CD133表达质粒,将其转入MHCC-H-CD133+细胞,并设空白对照组、阳性对照组。通过G418筛选出稳定株。通过粘附实验、Boyden小室实验和软琼脂克隆形成实验观察各细胞株侵袭能力的变化。采用明胶酶法测定肝癌细胞的基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的含量,蛋白质印迹法检测上皮间质化相关基因的变化。结果通过免疫磁珠分选后的MHCC-H细胞中CD133表达率为83.5%。qRT-PCR结果显示,shCD133组相对空白对照组的CD133表达量下降了80%,P<0.05。蛋白质印迹法检测结果显示,shCD133组的CD133表达明显下降,约为空白对照组的12%和shNC组的10%,均P<0.05。shCD133组的粘附能力为86.9±12.4,较空白对照组的568.5±53.2和shNC组的538.8±35.6明显下降,P<0.05。Boyden小室实验发现,shCD133组穿膜细胞数为(80.6±11.4)个,较空白对照组的(228.5±33.2)个和shNC组的(230.8±32.9)个明显减少,P<0.05。软琼脂克隆形成率的检测发现,shCD133的细胞克隆形成(60±5)个,比空白对照组的(178±23)个和shNC组的(168±25)个明显下降,P<0.05。明胶酶法检测发现,shCD133组MMP-2和MMP-9相对活性为0.4±0.14和0.6±0.16,较shNC组的1.03±0.19和1.3±0.16明显下降,P<0.05。蛋白质印迹法检测结果表明,shCD133组N-cadherin蛋白表达为36.3±4.5,Snail为53.6±6.7,Slug为41.63±5.6,Twist为39.4±3.9,均明显低于空白对照组的87.6±8.6、80.6±7.5、81.9±9.2和83.9±9.1,也明显低于shNC组的89.4±9.6、83.5±8.9、85.1±8.7和87.6±9.3,均P<0.05;而shCD133组E-cadherin表达为88.4±9.2,较空白对照组的57.6±8.7和shNC组的53.9±8.9明显上调,P<0.05。结论沉默MHCC-H细胞CD133基因的表达能有效抑制其上皮间质化和侵袭能力,CD133基因可能成为肝癌基因治疗的有效靶点。

CD133和Nestin在乳腺癌中的表达

目的探讨CD133和Nestin在不同类型乳腺癌中的表达及其相互关系。方法应用免疫组织化学SP法检测38例乳腺浸润性导管癌、20例乳腺浸润性小叶癌、10例乳腺良性病变组织中CD133和Nestin的表达情况。结果CD133和Nestin在乳腺癌和乳腺良性肿瘤中均表达于胞浆；CD133和Nestin在乳腺癌中的表达阳性率分别为89．7％和72．4％，均高于良性肿瘤的50．0％和0；乳腺浸润性导管癌中CD1333，和Nestin的阳性表达率显著高于小叶癌，且CD133与Nestin表达之间呈正相关；CD133、Nestin阳性细胞率均与患者年龄、部位无关。结论CD133和Nestin在乳腺癌病理组织中均呈高表达，而在乳腺良性病变中呈低表达。CD133和Nestin的表达对乳腺癌的诊断具有较显著的临床意义。