CD137-CD137L相互作用对ApoE^(-/-)小鼠NFATc1表达的影响

目的:观察CD137-CD137配体(CD137L)轴对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠活化T细胞核因子胞浆1型(NFATc1)表达的影响。方法:ApoE-/-小鼠动脉粥样斑块模型采用颈动脉硅胶圈植入法;分别采用免疫组化及流式细胞术检测小鼠颈动脉斑块及淋巴细胞NFATc1表达;分别应用RT-PCR和流式细胞技术检测体外培养的小鼠淋巴细胞NFATc1 mRNA和蛋白表达。结果:在体情况下应用anti-CD137特异性刺激CD137-CD137L轴后,ApoE-/-小鼠斑块及脾脏中淋巴细胞NFATc1表达增加;体外培养的淋巴细胞刺激CD137-CD137L轴后,淋巴细胞NFATc1 mRNA和蛋白表达明显上调,anti-CD137刺激浓度以20 mg/L时作用最强,作用24 h最明显(P<0.05)。应用Anti-CD137L特异性阻断CD137-CD137L轴能明显抑制NFATc1 mRNA及蛋白表达,浓度在20 mg/L时抑制最强,时间为24 h后抑制最佳(P<0.05)。结论:ApoE-/-小鼠体内NFATc1的表达受CD137-CD137L轴调控。

人外周血树突状细胞的体外诱导培养及其表面CD137、CD137L的表达特点

目的:建立人外周血树突状细胞(DCs)的体外扩增培养技术,并初步探讨其表面CD137、CD137L的表达特点。方法:利用贴壁方法自正常人外周血单个核细胞(PBMC)分离获得单核细胞,体外经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合诱导培养,对培养过程中的细胞进行形态学观察及表型分析,并检测CD137及CD137L的表达。结果:诱导培养5～7天后的非贴壁细胞具有典型的DCs形态,无明显的增殖趋势;流式细胞仪分析显示,MHCⅡ-类分子HLA-DR表达率为64.02%,单核-巨噬细胞系特异性表面标志CD14表达率仅为2.34%;人类DCs表面CD137L表达率为41.03%;CD137表达率为9.77%,LPS刺激后表达率增加为36.06%。结论:人外周血单核细胞,体外经GM-CSF、IL-4诱导,可获得大量的未成熟DCs,其中含有少量的单核-巨噬细胞;此DCs增殖能力很弱,表明单核细胞为DCs的非增殖性前体;体外培养的人类DCs可中等量表达CD137L,并有CD137的表达,LPS刺激可诱导CD137表达的增加。为进一步研究DCs以及CD137、CD137L的生物学特性和功能奠定了基础。

计算机模拟重组人CD137L蛋白与其鼠源受体的相互作用研究

研究重组人协同刺激分子CD137配体(rhCD137L)蛋白与其鼠源受体CD137(mCD137)发生相互作用的结构基础。分别以小鼠核因子受体激活剂RANK蛋白和人CD137L的X-射线晶体结构为模板,应用DiscoveryStudio(DS)Modeling 2.5软件同源模建mCD137和rhCD137L的三维结构模型;进行能量优化后,采用Ramachan-dran图和Profiles 3D对模建结构进行合理性评估;通过ZDOCK模块进行分子对接,预测rhCD137L-mCD137的候选结合结构域。结果表明,rhCD137L中存在多个可与mCD137发生相互作用的候选结合位点,其中包括D80-A82、L84、以及参与其与人源受体CD137发生相互作用的A'B Loop环(Q98-T130)和Q230。与已知人源CD137L-CD137间的相互作用不同,rhCD137L还与mCD137形成了2个氢键。CD137L虽然可以与鼠源受体发生相互作用,但与人源受体的结合模式并不完全相同。该结果为今后深入研究CD137通路发挥协同刺激作用的信号体系以及基于该信号途径新型分子靶向药物的设计提供了理论基础。

CD137L在肺癌细胞株的表达及其生物学功能

目的研究人CD137配体(CD137L)在人肺癌细胞株的表达及其生物学功能。方法采用RT-PCR及流式细胞术检测人CD137L在肺癌细胞株A549、H460、A2、SK-MES-1、SPC-A1的表达水平。用细胞计数试剂盒8检测A2细胞在PBS(A组)、IgG1-FC(B组)或CD137-FC(C组)包被处理后的增殖情况,并用Annexin V/PI双染方法检测其凋亡率。结果 CD137LmRNA及蛋白在多种肺癌细胞株上均有表达。C组细胞增殖较A、B组明显增加(P<0.05),但三组间细胞凋亡率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CD137L在各种肺癌细胞株上均有表达,CD137L介导的逆向信号能促进肺癌细胞增殖,可能在肺癌发生、进展中起重要作用。