结直肠癌CD146基因甲基化与患者临床病理特征和生存的关系

目的 探讨结直肠癌组织中CD146基因甲基化改变与患者临床病理特征和生存的关系。方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,分析CD146基因甲基化。采用电化学发光法进行定量检测结直肠癌患者血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)含量。采用Kaplan-Meier生存曲线计算结直肠癌患者生存率。结果 与结直肠癌组相比,对照组和腺瘤组CD146基因甲基化阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。CD146基因甲基化与结直肠癌患者淋巴结转移、浸润深度和TNM分期之间,差异有统计学意义(P<0.05)。CD146基因甲基化与CEA含量之间明显相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线经Log-rank检验发现,CD146基因甲基化与结直肠癌患者总体5年生存率之间存在相关性(P<0.05)。结论 CD146基因表观遗传学的改变参与了结直肠癌的发生、发展。检测CD146基因甲基化可作为反映结直肠癌患者部分恶性生物学行为和生存期的指标。

宫颈癌组织中CD146和MMP-14表达的意义及相关性分析

目的探讨CD146标记的微血管密度(MVD)和基质金属蛋白酶(MMP-14)在宫颈鳞癌组织中的表达及与其临床病理因素的相关性。方法应用免疫组织化学染色(SP法),检测CD146和MMP-14在82例宫颈鳞癌、48例宫颈上皮内瘤变(CIN)及24例慢性宫颈炎组织中的表达,并对CD146标记的MVD进行图像分析计数。结果宫颈鳞癌组中MMP-14表达及CD146标记的MVD值明显高于CIN组及慢性宫颈炎组(P<0.01)。CD146标记的MVD值及MMP-14表达与肿瘤组织学类型、浸润深度、FIGO分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.01),而与患者年龄无关(P>0.05)。CD146表达与MMP-14表达呈正相关(P<0.01)。结论 CD146和MMP-14是宫颈鳞癌发生、浸润及转移的促进因子,CD146表达与宫颈鳞癌组织中MMP-14的异常表达密切相关。

CD146阳性亚群有作为软骨组织工程种子细胞的应用潜力

背景:再生医学的发展、组织工程技术的出现为软骨缺损重建提供了新的解决思路。在组织工程中,间充质干细胞是应用广泛的种子细胞,然而干细胞作为一个异质性的细胞群体其不同亚群发挥着不同的功能。因此,应用间充质干细胞关键功能亚群进行软骨修复具有广泛应用前景。目的:从人脂肪间充质干细胞中分离出CD146阳性亚群细胞,验证其生物学特性及其作为软骨组织工程种子细胞的潜力。方法:人脂肪间充质干细胞由浙江金时代生物技术有限公司提供,通过流式细胞术对人脂肪间充质干细胞表面标志物进行鉴定,应用免疫磁珠分选方法从人脂肪间充质干细胞中分选出CD146阳性表达的细胞亚群。通过基因芯片检测技术及生物信息学分析技术揭示2种细胞的分子特性;体外诱导2种细胞成软骨分化并进行鉴定;冻存复苏前后检测2种细胞的细胞活性及凋亡情况。结果与结论:①人脂肪间充质干细胞表达高水平干细胞相关标志物CD73、CD90,不表达造血干细胞相关标志物CD34、CD45、HLA-DR;②生物信息分析结果表明CD146阳性亚群细胞与脂肪间充质干细胞相比在炎症通路及骨骼肌肉系统疾病有不同功能;③CD146阳性亚群细胞能够成球软骨分化,并且其成软骨分化能力要优于人脂肪间充质干细胞;④CD146阳性亚群细胞复苏后凋亡情况和活性均要优于人脂肪间充质干细胞;⑤结果表明,CD146阳性亚群细胞具有良好的成软骨分化潜力,是一种具有前景的软骨组织工程种子细胞。

尿路上皮癌组织中CD_(146)表达、MVD变化及意义

目的检测尿路上皮癌组织中CD146表达和微血管密度(MVD),并探讨其意义。方法采用实时荧光定量PCR技术和免疫组化法检测尿路上皮癌组织及正常尿路上皮组织中CD146mRNA及其蛋白的表达情况,用CD34标记免疫组化法检测MVD。结果癌组织中CD146mRNA、蛋白表达及MVD均明显高于正常黏膜组织,P均<0.05。癌组织中CD146mRNA、蛋白表达与肿瘤病理分级、临床分期、淋巴结转移状况及MVD有相关性,P均<0.05。结论尿路上皮癌组织中CD146表达和MVD升高。其尿路上皮癌的分化、浸润及淋巴转移有关。CD146可能通过促进肿瘤血管生成在尿路上皮癌发生发展过程中发挥重要作用。

CD146基因重组质粒的构建及蛋白表达

目的构建CD146原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达和定位。方法提取人黑色素瘤细胞A875的总mRNA并进行反转。以反转录的cDNA为模板PCR扩增CD146全长编码基因,分别克隆至pCDNA3.1-myc/his以及pGEX-4T-3表达载体中。原核重组质粒鉴定后转入BL21细胞中并经了诱导表达及纯化,真核表达质粒转入胃癌MKN45细胞中,分别利用westernblot和激光共焦扫描显微技术检测了重组质粒的表达以及在胃癌细胞中的定位。结果 CD146全长基因序列克隆到原核、真核表达载体中,酶切鉴定片段为1930bp。原核诱导出了GST-CD146并进行了纯化,CD146在真核细胞中表达为113KD的糖蛋白,Westernblot检测到真核转染的myc/his-CD146表达,条带约为120KD,免疫荧光显示蛋白定位在胃癌MKN细胞膜。结论成功构建了CD146原核、真核表达载体,融合蛋白在胃癌MKN45细胞表达。

CD146基因重组质粒的构建及其在骨髓癌NCI-H929的表达

目的构建CD146真核表达载体,证实融合蛋白在骨髓瘤细胞内的表达、定位。方法提取人工具细胞Hela细胞的总mRNA并进行反转。以反转录的cDNA为模板PCR扩增CD146全长编码基因,克隆至pCDNA3.1-3×Flag表达载体中。质粒转入骨髓癌NCI-H929细胞中,分别利用western blot和激光共焦扫描显微技术检测了重组质粒的表达以及在骨髓癌细胞中的定位。结果 CD146全长基因序列克隆真核表达载体中,酶切鉴定片段为1930bp。CD146在真核细胞中表达为113KD的糖蛋白,利用Western blot检测到真核转染的Flag-CD146表达,条带约为120KD,免疫荧光显示蛋白在细胞膜上有明显定位。结论成功构建了CD146真核表达载体,并验证了其表达定位。